Показатели крови у людей пожилого возраста 20 - 30 лет

 

Принцип метода: Хиломикроны, липопротеиды очень низкой плотности (ЛПОНП) и липопротеиды низкой плотности (ЛПНП) осаждаются при добавлении к образу фосфорновольфрамовой кислоты и Mg 2+. После центрифугирования в супернатанте остаются только ЛПВП, концентрация которых определяется так же, как концентрация общего холестерина [49].

Состав набора:осаждающий реагент, стандартный раствор холестерина.

Ход определения. Определение проводят по таблицам 3 и 4.

Таблица 3

Преципитация.

Реагенты	Опытная проба, мл	Калибровочная проба, мл	Контрольная проба, мл
Сыворотка	0,15	-	-
Вода	-	-	0,15
Осажд. реагент	0,3	0,3	0,3
Раствор холестерина	-	0,15	-

Хорошо перемешать и оставить на 10 минут при комнатной температуре, опытные пробы отцентрифугировать в течение 10 минут при 4000 об. или 1 – 2 минуты при 10000 об. Прозрачный супернатант используют для определения концентрации ЛПВП.

Таблица 4

Определение концентрации ЛПВП.

Реагенты	Опытная проба, мл	Калибровочная проба, мл	Контрольная проба, мл
Супернатант	0,2	-	-
Вода + реагент № 1	-	-	0,2
Рабочий реагент для определения холестерина	2,0	2,0	2,0
Раствор холестерина + реагент № 1	-	0,2	-

 

Реакционную смесь тщательно перемешивают и инкубируют не менее 10 минут при комнатной температуре (20 – 25оС) или 5 минут при 37оС и измеряют оптическую плотность опытной и калибровочной проб, против контрольной пробы в кюветах с толщиной поглощающего слоя 5 мм (1 см) при длине волны 500 Нм (ФЭК – 490 Нм).

Расчет концентрации (С) [ммоль/л] или [мг/100 мл],

где Е оп и Е ст – экстинции опытной и калибровочной проб, измеренные относительно контрольной пробы.

Таблица 5

ЛПВП

	Мужчины	Женщины
Нормальные величины	> 55/100 мл (1,42 ммоль/л)	> 65/100 мл (1,68 ммоль/л)
Группа риска	35 – 55 мг/100 мл (0,9 – 1,42 ммоль/л)	45 – 65 мг/100 мл (1,16 – 1,68 ммоль/л)
Патологическое нару-шение липидного обмена	< 35 мг/100 мл (0,9 ммоль/л)	< 45 мг/100 мл (1,16 ммоль/л)

 

II.4.2 Расчет концентрации ЛПНП

С = [общий холестерин] - [ЛПВП холестерин] – [триглицериды/5] мг/100 мл

или

С = [общий холестерин] - [ЛПВП холестерин] – [триглицериды/2,2] ммоль/л

II.4.3 Определение содержания общего холестерина в сыворотке и плазме крови энзиматическим колориметрическим методом

Принцип метода: При гидролизе жиров холестерина холестеролэстеразой образуется свободный холестерин. Образовавшийся и имеющийся в пробе холестерин окисляется кислородом воздуха под воздействием холестеролоксидазы с образованием эквимолярного количества перекиси водорода. Под действием перексидазы  перекись водорода окисляет хромогенные субстраты с образованием окрашенного продукта. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации холестерина в пробе.

Состав набора: фосфатный буфер, лиофилизат, стандартный раствор холестерина.

Подготовка реагентов к процедуре анализа и их стабильность

Рабочий реагент: Содержание флакона № 2, аккуратно перемешивая, растворить во флаконе № 1. Для получения оптимальных результатов рекомендуется выдержать рабочий реагент после полного растворения лиофилизата при комнатной температуре 20 – 30 минут.

Таблица 6

Ход определения

Реагенты	Опытная проба, мл	Калибровочная проба, мл	Контрольная проба, мл
Сыворотка или плазма	0,02	-	-
Вода	-	-	0,02
Реагент	2,0	2,0	2,0
Раствор холестерина	-	0,02	-

 

Реакционная смесь тщательно перемешивают и инкубируют не менее 5 минут при комнатной температуре (20 - 25оС) или при 37оС и измеряют оптическую плотность опытной и калибровочных проб против контрольной пробы в кюветах с толщиной поглощаемого слоя 5 мм (1 см) при длине волны 500 Нм (ФЭК – 490 Нм).

Расчет концентрации (С) холестерина (ЛПВП) проводят по формуле:

 [ммоль/л] или [мг/100 мл],

где Е о и Е ст – экстинции образца и стандарта, измеренные относительно контрольной пробы.

Нормальные величины: идеальное содержание      < 5,2 ммоль/л 

                                         допустимое содержание  5,2-6,5 ммоль /л  

                                         патологическое содержание       >6,5 ммоль/л

II.4.4 Определение концентрации триглицеридов в сыворотке и плазме крови энзиматическим колориметрическим методом

Принцип метода: Последовательное протекание четырех ферментативных реакций, осуществляемых липопротеиновой липазой (ЛПЛ), глицеролкиназой (ГК), глицеролфосфатоксидазой (ГФО) и пероксидазой (ПОД).  Перекись водорода в присутствии пероксидазы вступает в реакцию с р-хлорфенолом и р-аминофеназоном (р-аминоантипирин, ПАП) с образованием окрашенного хинонеиминового остатка. Интенсивность окраски производного хинонеимина прямо пропорциональна концентрации триацилглицеринов в пробе [48].

Состав набора: буфер, лиофилизат, стандартный раствор.

Подготовка реагентов к процедуре анализа и их стабильность

Рабочий реагент: Растворите содержимое флакона № 2 в 50 мл буферного раствора (флакон № 1). Для получения оптимальных результатов рекомендуется выдержать рабочий реагент после полного растворения лиофилизата при комнатной температуре 20 – 30 минут. Реагент № 3 готов к работе.

Ход определения: Реакционную смесь тщательно перемешивают и инкубируют не менее 5 минут при комнатной температуре (20 - 25оС) и измеряют оптическую плотность опытной и калибровочных проб против контрольной (холостой) пробы в кюветах с толщиной поглощаемого слоя 5 мм (1 см) при длине волны  505 Нм (ФЭК – 490 Нм). Окраска стабильна не менее часа после окончания инкубации при предохранении от прямого солнечного света.

 Таблица 7

Приготовление реакционных смесей для определения содержания триглицеридов в сыворотке или плазме крови

Реагенты	Опытная проба, мл	Калибровочная проба, мл	Контрольная проба, мл
Сыворотка или плазма	0,02	-	-
Вода	-	-	0,02
Рабочий реагент	2,0	2,0	2,0
Стандартный раствор	-	0,02	-

 

Реакционную смесь тщательно перемешивают и инкубируют не менее 5 минут при комнатной температуре (20 - 25оС) и измеряют оптическую плотность опытной и калибровочных проб против контрольной (холостой) пробы в кюветах с толщиной поглощаемого слоя 5 мм (1 см) при длине волны 505 Нм (ФЭК – 490 Нм). Расчет концентрации триглицеридов (С) производят по формуле:

 [мг/100 мл] или [ммоль/л],

где Е о и Е ст – экстинции опытной и калибровочной проб, измеренные относительно контрольной (холостой) пробы;

10 мг/100 мл (0,11 ммоль/л) – поправка  на содержание свободного глицерина

 в сыворотке (плазме) крови.

Нормальные величины: 13 – 160 мг/100 мл -0,15-1,82 ммоль/л

Группа риска: 160 – 200 мг/100 мл 1,82-2,28 ммоль/л

Патологические показатели:  200мг/100 мл выше >2.28 ммоль/л

II.4.5 Определение коэффициента атерогенности

                                                      Общий холестерин-холестерин ЛПВП

Индекс атерогенности=--------------------------------------------------

                                                        холестерин ЛПВП

Используют два показателя: общий холестерин и холестерин ЛПВП. У здоровых коэффициент не превышает 3-3,5, выше он у мужчин [48].

II.4.6 Определение С-реактивного белка в сыворотке крови и серозных жидкостях

Принцип метода. Метод основан на реакции преципитации С-реактивного белка с антисывороткой.

Реактивы: антисыворотка.

Ход определения. Стеклянный капилляр берут посередине двумя пальцами и, держа под углом 40-45°, опускают концом во флакон с антисывороткой, набирая ее на 1/3длины капилляра (3см). Капилляр опускают тем же концом в  исследуемую сыворотку (при заполнении капилляра не должно быть воздуха между реагентами). Затем капилляр, заполненный на 2/3 длины, протирают ватой, покачивают 10-12 раз, перемещая жидкость от одного конца к другому, и устанавливают его в штатив. Перед установлением капилляра в штатив его следует наклонить, чтобы конец, через который набирали сыворотку, был свободен на 15мм. Затем этот конец погружают в пластилин штатива так, чтобы уровень жидкости в нем был выше поверхности пластилина на 10мм. Реакция проходит при комнатной температуре. Предварительно результаты реакции учитывают через 4 часа, после чего капилляр со штативом оставляют на сутки при комнатной температуре или ставят на то же время в холодильник. Через 24 ч окончательно учитывают результат реакции. Выпадение преципитата (хлопья, осадок) в капилляре указывает на наличие С- реактивного белка в исследуемой сыворотке. В норме С- реактивный белок должен отсутствовать [49].

 

ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Общеизвестно, что ССЗ являются основными причинами инвалидности и смерти населения экономически развитых стран. В 2002 г. в России ССЗ среди трудоспособного населения 25-64 лет составили среди мужчин 36%, у женщин-41% всех причин смерти. В структуре смертности от ССЗ ишемическая болезнь сердца и мозговой инсульт явились причинами смерти в 55 и 24% у мужчин и в 41 и 36% у женщин соответственно [50].

Согласно данным, представленным в отчете Шадринской Городской Больницы Скорой Медицинской помощи, за период с 2003г. по 2005г. отмечается увеличение числа людей, обращающихся в ШГБСМП по поводу сердечно-сосудистых заболеваний.

Таблица 8

Количество человек с сердечно-сосудистыми заболеваниями, обратившихся в ШГБСМП в период 2003-2005 гг.

Год Группы	2003г.	2004г.	2005г.
	Чел.	Чел.	Чел
Болезни, характеризующиеся повышенным АД	191	221	234
Стенокардия	431	446	534
Хронические болезни  сердца	89	34	30

 

Из табл.8 видно, что число пациентов с болезнями, характеризирующимися повышенным артериальным давлением, увеличилось в 2004г., по сравнению с 2003г., на 15,7% и на 22,5% в 2005г. Увеличение количества больных стенокардией  составило в 2004г., по сравнению с 2003г., на 3,48% и на 22,5% в 2005г. Вместе с тем отмечается снижение количества больных кардиосклерозом. Так, в 2004г. было зарегистрировано 34 случая,  а в 2005г. 30 случаев, что меньше уровня 2003г. на 38,2%и 33,7% соответственно. Из таблицы 8 видно, что за последнее время наблюдается увеличение числа заболевших стенокардией.

Были изучены показатели пожилых мужчин и женщин, страдающих артериальной гипертензией, стенокардией, кардиосклерозом, а также показатели здоровых мужчин и женщин пожилого возраста. Все показатели групп условно здоровых людей соответствовали клиническим нормам. Данные по исследованию показателей красной и белой крови у мужчин и женщин пожилого возраста представлены в таблицах 9 и 10.

Таблица 9

Показатели периферической красной крови у пожилых людей с различными заболеваниями сердечно-сосудистой системы (М± m)