Бруцеллез сельскохозяйственных животных

В связи с этим мы пришли к выводу, что опытный антиген вполне  можно использовать при постановке моно реакции (РА).

Таким образом разработанный антиген вполне заменяет антиген единый бруцеллезный для РА, РСК (РДСК).

Особо важное значение в борьбе с бруцеллезом имеет своевременная диагностика этого инфекционного заболевания, в частности мониторинг бруцеллеза можно эффективно осуществлять при контроле молока на молочно-товарных фермах, на рынках молочно-заготовительных пунктах.

Наряду с производством коровьего и козьего молока в последнее время все большее значение стало приобретать промышленное производство  кобыльего молока, которое идет на изготовление кумыса – традиционного национального напитка, обладающего хорошими столовыми и лечебными свойствами.

Эффективным методом диагностики бруцеллеза является кольцевая реакция с молоком, которая позволяет подтвердить происхождение молока от животного зараженного бруцеллезом в кратчайшие сроки (30 мин). Основное отличие этой серологической реакции заключается в том, что для ее постановки используется цветной бруцеллезный антиген, который при агглютинации с бруцеллезными антителами образует над слоем молока окрашенное кольцо. В настоящее время для кольцевой реакции с молоком используется цветной антиген, окрашенный гематоксилином в синий цвет. Окрашивание бруцеллезного антигена гематоксилином позволяет сохранить его антигенную структуру, а следовательно, обеспечить высокую чувствительность, специфичность и стабильность диагностикума.

Однако гематоксилин обладает значительной стоимостью, а технология окрашивания антигена указанным красителем довольно сложна. Кроме того, как оказалось применение такого антигена для исследования козьего и кобыльего молока вызывает значительные затруднения. Это связано с другим составом молока, в частности более низким рН и иным белково - липидным комплексом. В результате во многих случаях гематоксилиновый антиген или меняет окраску, или вообще не образует отслаивающегося кольца.

Это побудило нас к поиску более дешевых окрашивающих агентов, менее зависимых от значения рН, более инертных по отношению к белково- липидному комплексу молока, по возможности безвредных, щадящих структуру антигена и обеспечивающих его консервацию и стабильность.

С этой целью нами испытывались полифенольные вещества растительного происхождения. Для того чтобы максимально упростить технологию получения и снизить себестоимость диагностикума, было решено использовать вытяжки непосредственно из растительного сырья. Растительные танины более всего были приемлемы на роль окрашивающего агента, так как легко экстрагируются водой без применения токсичных органических растворителей.

В качестве метода экстрагирования было избрано получение растительных отваров. Чтобы исключить присутствие в отваре большого количества посторонних веществ в качестве сырья использовали в основном корневища или кору. 20-25г. Воздушно сухого сырья кипятили в 500мл. дистиллированной воды в течении 1 часа. После охлаждения фильтровали отвар. К отвару добавляли 0,1г. Ацетата железа (II) и перемешивали. Через 30 минут раствор для отделения осадка центрифугировали 10 минут при 6000 об/мин. К темно- синему надосадочному раствору добавляли 0,5г.  инактивированного бруцеллезного антигена и взбалтывали в течении 20 часов.

Окрашенный антиген отделяли центрифугированием в течение 10 минут при 5000 об/мин., промывали последовательным взбалтыванием в физиологическом растворе и центрифугированием три раза. К 1г. отмытого осадка добавляли 25 мл физиологического раствора.

Для испытания полученного окрашенного антигена на чувствительность использовали позитивную бруцеллезную сыворотку, 0,2 мл которой смешивали 4мл кобыльего молока от заведомо здорового животного. После перемешивания из смеси отбирали пипеткой 2мл, переносили в другую пробирку, где вновь смешивали с 2 мл молока. Таким образом, был получен ряд разведений: 1; 1:2; 1; 4; 1:8; 1:16 и т.д. В каждый из полученных растворов 0,1г испытуемого цветного антигена. В качестве контроля реакции служило кобылье молоко без добавления позитивной бруцеллезной сыворотки. Все пробирки выдерживали в течение 30 мин. на водяной бане при температуре 37°С.Реакция проявлялась в виде окрашенного серовато-синего кольца над слоем белого молока. Наглядность реакции оценивалось по 5 бальной системе. То есть четкое серовато - синее кольцо с выраженной границей раздела, проявляющееся в реакции с цветным антигеном соответствовало 5 баллам, а отсутствие таковой  приравнивалась к 0 баллам.

При этом было отмечено, что антигены, окрашенные растительными танинами, проявляют достаточную чувствительность и их показания находятся в прямой корреляции с расчетной концентрации бруцеллезной сыворотки в полученных разведениях.

В рамках исследований были испытаны следующие виды растительного сырья: Вяз узколистый, Клен татарский, Манжетка тяньшанская, Гравилат городской, Лапчатка прямостоячая, Лапчатка закаспийская, Репешок азиатский. Наилучшую наглядность в виде черно-синего кольца и оцененную в 4 балла показали антигены окрашенные танинами из Репешок азиатского и Гравилата городского и, хотя, наглядность реакции уступает гематоксилиновому антигену, применяемому в кольцевой реакции с коровьим молоком, выигрыш в себестоимости и возможность применения для кобыльего молока указывает на существенные преимущества. Весьма ценным также является изыскание способов изготовления цветных антигенов для пластинчатой реакции агглютинации, в состав которых входили бы химические или растительные красители и другие вещества, повышающие специфичность, активность, показательность реакции.

Таким образом, при приготовлении антигена для реакции агглютинации, в которые добавляются красители химического или  растительного происхождения, повышается скорость реакции показательность.

5.4.2. Испытание разработанных средств диагностики и профилактики в хозяйствах с различной эпизоотической ситуацией по бруцеллезу крупного рогатого скота.

Борьба с бруцеллезной инфекцией эффективна при условии четкого планирования всех выполняемых для этого мероприятий. При этом основой успешной борьбы является планирование работ, включающих в себя организационно -  хозяйственные, ветеринарно-санитарные, специальные ветеринарные мероприятия.

Существующая система разведения животных не позволяет в полной степени (полноценно) проводить организационно-хозяйственные мероприятия в Западно-Казахстанской области. Так, как мелкие фермерские хозяйства не в состоянии выполнять зоогигиенические требования, проводить пастеризацию молока, не имеют помещений для карантина, для выращивания животных по половым, видовым признакам, дезоковриков, дезобарьеров ветсанпропускников и. т.д. А также обеспечение в полном объеме территории ферм ветеринарно-санитарными защитными объектами. Повсеместно слабо налажен учет животных, контроль миграции их как на определенном участке, так и по региону. Пастьба животных в основном проводится с реагирующими и скрытыми бруцеллоносителями животными, где не учитывается система водопоя из-за низкой культуры животноводства, распространение бруцеллеза может достичь глобальных размеров.

Применяемые мероприятия не дают должного эффекта, т.к. мероприятия, применяемые в настоящее время весьма дороги, сложны при проведении.

Проверка профилактической противобруцеллезной эффективности стимулятора пролонгированного действия в условиях производства.

Пример 1: Поголовья крупного рогатого скота (94 гол.) благополучного  хозяйства КХ «Асем», выпасалось  совместно с животными других условно благополучных хозяйств (вл.Хусанов – 71 гол., Алибековов Б. – 62 гол., Сериков М.- 26 гол.,  Дарбаев К. – 10 гол), где раннее наблюдались единичные   выделения, реагирующие на бруцеллез. Несмотря на то, что на пастбище находились отрицательно  реагирующие животные  возможны случаи заражения так как среди животных условно благополучных хозяйств находились скрытые бруцеллоносители. Кроме того, существующие диагностикумы на 100% не выявляют животных, это зависит от многих факторов (физиологическое состояние животных, активности препаратов).

Поэтому нами решено было имеющиеся в КХ «Еркешбай»  поголовье  разделить на 3 группы животных,  по 15 животных в каждой. Животным 1 –ой группы  вводили 4-х кратно стимулятор пролонгированного действия без антибиотика, а  животным 2 группы  -    этот же препарат с антибиотиком по вышеописанной схеме. В обеих  случаях интервал между введениями препарата составил 7-8 дней .

Животные 3 группы были контрольными поэтому им препарат не вводили.

Кроме того осуществляли мониторинг  эпизоотической ситуаций по бруцеллезу  в агроформированиях, крупный рогатый скот, которых контактировали на пастбище и водопое со скотам вышеназванного крестьянского хозяйства.

Спустя 20,40,60 и 90 дней после выгона на пастбище, все животные указанных агроформировании были исследованы на бруцеллез. Результаты проведенной работы представлены в таблице 9.

                                                                                                              Таблица 9

Исследование животных в различные сроки после выгона их на пастбище.

Из данных таблицы 9 видно, что при контакте на пастбище  здоровых животных с больными происходит заражение их. Так в крестьянском хозяйстве «Еркешбай» среди опытных групп в сроках нашего наблюдения реагирующих на бруцеллез животных не выявили, тогда, как среди животных контрольной группы через 20 и 40 дней после выгона их на пастбище было выявлено 2 (13,3%) и 1 (7,9%). Следовательно, стимулятор пролонгированного действия с антибиотиком и без последнего предохраняет здоровых животных от заражения при контакте их со скотом условно благополучных хозяйств.  В хозяйстве № 6 благополучном по бруцеллезу выявлено 3 реагирующих животных (21,4), что также свидетельствует о возможности заражения животных в пастбищный период  при контакте со скотом  условно благополучного стада.

При этом необходимо отметить, что все животные находились в равных условиях на пастбище (кормление, водопой и др.) за исключением индивидуального кормления в подворье.

Таким образом, стимулятор пролонгированного действия с антибиотиком предохраняет крупный рогатый скот при контакте с инфицированными бруцеллезной инфекцией животными.

Пример 2. В крестьянском хозяйстве «Еркешбай» в котором содержалось 100 голов крупного рогатого скота длительное время наблюдалось незначительное выделение, реагирующих на бруцеллез животных.

При этом оздоровление проводили следующим методом:

- диагностическое исследование;

- выделение реагирующих животных;

- очистка территории, дезинфекция, вакцинация шт В abortus 82 в сентябре каждого года, а молодняк при достижении 5 -8 месячного возраста, телочек случного возраста при достижении 16-18 месяцев.

Описанные мероприятия ощутимых результатов не давали. Поэтому авторами было решено для искоренения животных дополнительно к общему комплексу мероприятий включить некоторые методы диагностического тестирования, стимулятор пролонгированного действия.

Перед началом работ все животные (99) были исследованы на бруцеллез (2007 год), при этом реагировало позитивно 2 коровы (2%). После выделения реагирующих всем животным был введен разработанный нами профилактический препарат для ускоренной элиминации бруцелл из организма и профилактики распространения бруцеллезной инфекции. При этом препарат вводили всем животным 4-х кратно с интервалом 7-10 дней, подкожно, в области задней треть шеи в дозе 5 см3. После четвертого введения названного препарата (август 2007 года) все животные были  повторно исследованы на бруцеллез по предложенной нами методике (аллерго-серологическое исследование). Данные исследования показали, что реагировало позитивно 1 корова (1%), которая была сдана на убой.