Бруцеллез сельскохозяйственных животных

 

Из данной таблицы 5 видно, что во всех сроках исследований сывороток крови опытных животных получены негативные серологические показания.

Полученные результаты показывают, что испытуемый препарат не обладает сенсибилизирующими свойствами.

Таким образом, проверка сенсибилизирующих свойств аллергена показало, что испытуемый аллерген не обладает сенсибилизирующей активностью, на трехкратное введение его с интервалом 25-30 дней не наблюдается проявления иммунологических реакции (РБП, РА, РСК).

Согласно данным многих исследователей было определено, что активность препарата зависит от штамма, из которого приготовлен аллерген. Несмотря на это нами в качестве материала для изготовления аллергена был использован авирулентный штамм B. abortus 19. Причиной этому послужило то, что названный штамм достаточно изучен, относится к производственному штамму (готовят вакцину, диагностикумы).

Далее нами решено было изыскать оптимальное место введения аллергена. Для этого определено три следующих места:

- подхвостовую складку (внутрикожно);

- пальпебральную пробу (подкожно);

- среднюю треть шеи (внутрикожно).

При проведении исследования (одному животному препарат вводился в 3 точки) было определено, что при введении в подхвостовую складку потребовалось на 50 животных времени в среднем 60 минут, пальпебральная проба заняла в среднем 50 минут на 50 животных, а в среднюю треть шеи вся манипуляция на 50 коров заняла 15 минут (препарат вводился при помощи безыгольного инъектора «Овод»).

Необходимо отметить, что хронометраж проводился без учета времени на загон животных в раскол, фиксация животных.

Согласно полученным данным определено, что оптимальным местом введения аллергена является средняя треть шеи, так при этом не было необходимости фиксировать животных, и времени на проведение одной манипуляции ушло 18 секунд, тогда как при введении в подхвостовую складку 1,2 мин, пальпебрально- 1 минута.

Таким образом, оптимальным местом введения препарата является средняя треть шеи.

Далее нами определялось качество (показательность) реакции. При чистке реакции определено, что наиболее показательная реакция была в средней трети шеи, нежели пальпебрально и в подхвостовую складку.

 

      

Рис-6. Показатели аллергической реакции у животных

 

При наблюдении места введения было определено, что у всех животных наблюдался болезненный отек, который в основном при неспецифической реакции рассасывается в течении 12-15 часов, а к 24-25 часам угасает на 100%, специфическая реакция максимума достигает к 48 часам, и просматриваются в виде четко очерченных круглых, овальных отеков. Важно отметить, что реакции были настолько показательны, что в основном кутиметром затруднительно было пользоваться, так как у многих животных толщина кожной складки была более 15мм, а диаметр отека был равен 4,5см, а часто превосходил 10см.

Согласно полученным данным мы пришли к заключению, что показатели реакции при туберкулинизации менее выражены, чем показатели реакции при бруцеллезе и поэтому при оценке результатов реакции при бруцеллезе могут быть подразделены следующим образом:

- толщина складки до 4мм - отрицательная (−)

- толщина складки от 4 до 10мм – сомнительная реакция (±),

- толщина складки от 10 до 12мм - положительная реакция (+),

- толщина складки от 12 до 14мм - положительная  (+ +),

-толщина складки от 14 до17мм – положительная (+ + +),

- толщина складки более 17мм - положительная (+ + + +).

Животных, показавших сомнительные результаты, через 20 дней необходимо переисследовать, в случае повтора показаний их считать положительными.

 

          5.4. Реакция агглютинации

5.4.1. Разработка антигена для РА

Диагностика бруцеллеза является важным звеном при проведении профилактических и оздоровительных мероприятий, так как своевременное выявление реагирующих животных – залог успеха при проведении вышеназванных работ.

Нами для этого было найдено интересное решение. Ранее осадок (корпускулы) выделенные при получении бруцеллёзного аллергена уничтожал как балласт. К балласту мы добавили физиологический раствор и использовали как антиген для РА, который консервировали формалином из расчета 0,2 см3 на 100,0 см3 препарата.

Испытуемый антиген проверен на стерильность. При этом препарат был стерильным.

Далее препарат проверялся на активность в сравнении с коммерческим единым антигеном  для РА и РСК и РДСК. В результате проверки испытуемый  антиген для РА показал себя идентично как единый бруцеллёзный антиген для РА, РСК и РСДК.

Полученные результаты подтверждают оригинальность решения тем, что нами найден безотходный путь получения двух препаратов, нет необходимости дважды получать бакмассу для производства аллергена и для производства антигена для РА.

Таким образом, при приготовлении бруцеллёзного аллергена, осадок, являвшийся балластом можно использовать как антиген для РА. При разработке нового препарата весьма важно знать его активность. Поэтому нами проверялась активность его. С этой целью антиген разведен физиологическим раствором до разведений: 1:10, 1:20, 1:30, 1:40, 1:50, 1:60, 1:70, 1:80, 1:90, 1:100. При этом реакция ставилась в обычном режиме согласно наставления по постановке РА, сыворотки позитивная и негативная разведены 1:10, 1:20.

Результаты работы по определению активности опытного антигена представлены в таблице 6.

                                                                                                              Таблица 6

Активность опытного антигена.

№ п/п	Разведения  антигенов	Разведения сывороток
		Негативная		Позитивная
		1:10	1:20	1:10	1:20
1	1:10	-	-	+	+
2	1:20	-	-	+	+
3	1:30	-	-	+	+
4	1:40	-	-	+	+
5	1:50	-	-	+	+
6	1:60	-	-	+	+
7	1:70	-	-	+	±
8	1:80	-	-	±	-
9	1:90	-	-	-	-
10	1:100	-	-	-	-

 

Из данных таблицы 6 видно, что испытуемый антиген с негативной сывороткой не вступает в взаимодействие (результаты негативные). Испытуемый антиген с позитивной сывороткой разведенной 1:10 в разведении его 1:70, а с сывороткой разведенной до концентрации 1:20, в разведении его 1:60 создавая комплекс антиген + антитело показывает положительные результаты. Согласно полученным результатам можно сделать вывод, что антиген в разведении 1:40 является рабочим.

Таким образом, диагностический титр разработанного моноантигена равен 1:40.

Далее нами изучалась специфичность опытного антигена. В этих целях  были подобраны сыворотки коммерческие: позитивная бруцеллезная, негативная бруцеллезная; позитивные: патереллезная, кампилобактериозная, сальмонеллезная, хламидиозная, лептоспирозная, овисная, также в качестве контроля был использован физиологический раствор. Результаты проведенной работы представлены в таблице 7.

                                                                                                              Таблица 7

Данные определения специфичности опытного антигена в РА.

% п/п	Наименование сыворотки	Опытный               антиген	Коммерческий            антиген
1	Позитивная	+	+
2	Негативная	-	-
3	Пастереллезная	-	-
4	Кампилобактериозная	-	-
5	Сальманеллезная	-	-
6	Хламидиозная	-	-
7	Лептоспирозная	-	-
8	Овисная	-	-
9	0,9% р-р NaCl	-	-

Примечание:   + - положительная реакция;     - - отрицательная реакция.

Из данных таблицы 7 видно, что на позитивную бруцеллезную сыворотку получены положительные результаты с антигенами опытным и коммерческим. На сыворотки: негативная бруцеллезная, пастереллезная, кампилобактериозная, сальмонеллезная, хламидиозная, лептоспирозная, овисная и на физиологический раствор показания были негативные на опытный

и коммерческий антигены. Полученные результаты говорят о специфичности испытуемого препарата.

Таким образом, антиген, разработанный по предложенной методике, удостоверяет специфичность его.

Разработанный антиген был проверен в  благополучных и условно благополучных  по бруцеллезу крупного рогатого скота хозяйствах в сравнении с коммерческим единым бруцеллезным антигеном для РА, РСК (РДСК). Результаты сведены в таблице  8.

 

                                                                                                              Таблица 8

Результаты испытания антигена в благополучных и условно благополучных по бруцеллезу хозяйствах в сравнительном опыте.

№ п/п	Наименование хозяйства	Исп. голов	Антигены
			Испытуемый		Коммерческий
			абс	%	абс	%
1	КХ «Асем»	64	-	-	-	-
2	КХ «Еркешбай»	60	-	-	-	-
3	КХ «Нур»	57	1	1,75	1	1,75
4	ТОО «Бумакол»	51	7	13,7	7	13,7
5	Итого	222	8	15,45	8	15,45

 

Из таблицы 8 видно, что в результате проверок было получены практически идентичные результаты с обеими антигенами.