Бруцеллез сельскохозяйственных животных

Определение стерильности аллергена проводили путем высева на  эритрит - агаре  и  мясо - пептонном  бульоне.  В  результате  проведенных  исследований  высевы  оставались  в  течении  10  дней ( период  наблюдения) стерильными, что свидетельствуют об отсутствии бактериальной  загрязнённости  аллергена.

При  испытании  безвредности  из  общей  пробы  аллергена  стерильной  пипеткой  взяли  3-4 см³ и  ввели  подкожно  по  0,5 см³  5  белым  мышам  массой  18-20г  в  области  паха. При этом аллерген не вызывал  воспалительных реакций  на  месте  введения, общее  состояние  животных  были нормальные, случаи  их заболевания и гибели в течении 10 дней не отмечались, что  свидетельствует о безвредности испытуемого аллергена.

Определение специфичности предлагаемого аллергена проводили на 10 здоровых морских свинках массой 350-400г, путем внутрикожного введения его в дозе 0,1 см³ в депилированный участок на боковой поверхности туловища.

Одновременно на симметричном участке другой стороны туловища вводили по 0,1 см³ противопоставляемого аллергена (известного аллергена). Учет реакции проводили через 24-48 часов.

Оба аллергена не вызвали воспалительной реакции у опытных животных в течении 48 часов, что свидетельствовало о специфичности аллергенов.

Определение активности проводили на 10 сенсибилизированных морских свинках массой 350-400г, сенсибилизированных путем подкожного введения двухсуточной агаровой культуры B. abortus 19 в дозе 1 млрд. микробных клеток по оптическому стандарту мутности ГНИИСК им. Л.А. Тарасевича. Через 25-30 суток после прививки на морских свинках проводили определение активности аллергена. Животные с этой целю использовались в опытах не более 6 месяцев с интервалом между испытаниями не менее 25 суток. Предлагаемый и противопоставленный противобруцеллезные аллергены вводили 10 морским свинкам внутрикожно в депиллированные участки в дозе 0,1см³ в разные стороны туловища. Иглу вводили в складку кожи морской свинки, зажатую между большим и указательным пальцами, параллельно поверхности кожи с таким расчетом, чтобы иглы были не менее 3мм погружено в кожу. Затем складку кожи отпускали и нажимом на поршень вводили точно 0,1см³ препарата. На месте инъекции образовалась припухлость величиной с маленькую горошину. С целью предупреждения вытекания аллергена иглу после введения задерживали на 2-3 секунды в коже и затем извлекали. Для введения аллергенов применяли маркированные вместимостью 1 см³ шприцы, не пропускающие раствор под поршень или иглу. Каждый аллерген вводили отдельным шприцем, в том числе иглой. Интенсивность реакций проверяли через 48 час. После введения аллергенов, измеряя два взаимно перпендикулярных диаметра отеков, образующихся в месте введения, и вычисляли среднее значение, которое и является показателем интенсивности реакции. При этом на месте введения аллергенов у морских свинок появлялись воспалительные реакции в виде различной отечной припухлости различного размера и гиперемии кожи. Следует отметить, что реакция на предлагаемый и противопоставленный аллерген была идентичными, размеры, которых в среднем составляли соответственно 4,5+ 0,25 и 4,4 + 0,21мм, что свидетельствует об их достаточной активности (таблица 3).

Для определения специфичности и чувствительности предлагаемого аллергена в различных по эпизоотологической характеристике агроформированиях (благополучный, условно благополучный) исследовали сельскохозяйственных животных на бруцеллёз. Работа проводилась на территории Успеновского сельского округа Бурлинского района (КХ «Асем»; КХ «Еркешбай»; КХ «Нур»; ТОО «Бумакол»). Бруцеллезные аллергены вводили крупному рогатому скоту внутрикожно в среднюю треть шеи безыгольным инъектором БИ – 7М.

Учет и оценку реакции у животных на внутрикожное введение аллергена учитывали через 48 часов путем осмотра и пальпации складки кожи на месте введения препарата в сравнении со складкой кожи из нормального участка тела.

При этом через 48 часов у больных бруцеллезом животных на месте введения аллергена появлялась воспалительная реакция в виде плотного отека с ярко выраженным контуром и достаточной плотной консистенцией, обычно хорошо видимого при визуальном осмотре. У здоровых животных местная аллергическая реакция не возникала.

Оценку реакции проводили по схеме:

Положительная реакция - утолщение кожной складки против физиологической нормы на  10мм и более;

Сомнительная реакция – утолщение кожной складки против физиологической нормы от 4мм и более;

Отрицательная реакция – отсутствие каких-либо признаков на введение аллергена.

Полученные данные отражены в таблице 4.

 

                                                                                                                                                                                              Таблица 3

Результаты испытания аллергена на активность

№ п/п	Сроки постановки аллергопробы, сенсибилизированным морским свинкам, в сут.
	25		50		90		120		150		180
	аллергены
	Испытуем.	Против. постав.	Испытуем.	Против. постав.	Испытуем.	Против. постав.	Испытуем.	Против. постав.	Испытуем.	Против. постав.	Испытуем.	Против. постав.
	Утолщение кожной складки в мм.
1	3,0	3,0	4,2	4,2	4,6	4,5	5,2	4,9	5,0	5,0	4,2	4,2
2	3,5	3,6	4,5	4,5	4,5	4,5	5,1	4,9	5,1	5,2	4,7	4,6
3	4,2	4,0	4,4	4,5	4,8	4,9	4,9	5,2	5,2	5,2	4,6	4,6
4	4,0	3,9	4,6	4,3	5,0	4,9	5,2	5,3	5,3	5,4	4,3	4,2
5	3,7	3,7	4,2	4,4	5,0	5,1	5,4	5,1	5,2	5,1	4,5	4,5
6	4,3	4,2	4,4	4,5	4,8	4,8	4,9	5,4	5,5	5,4	4,3	4,3
7	4,0	4,1	4,5	4,2	4,6	4,9	5,0	5,1	5,3	5,2	4,0	4,0
8	3,7	3,6	4,0	4,0	4,7	4,7	4,9	5,0	5,1	5,0	4,0	3,9
9	3,5	3,5	4,2	4,3	4,9	4,9	4,9	5,1	5,1	5,2	4,3	4,2
10	3,2	3,2	4,2	4,2	4,5	4,6	5,0	5,0	5,0	5,1	4,4	4,4
М±m	3,71	3,68	4,32	4,31	4,74	4,78	5,05	5,1	5,18	5,18	4,33	4,29

 

                                                                                                                        Таблица 4

Результаты сравнительных исследований животных на бруцеллез предлагаемым и противопоставленным аллергеном

№ п/п	Вид животных	Эпизоотологи- ческая характеристика	Количество	Результаты исследований аллергенами:
				положи- тельно		сомни- тельно		отрица- тельно
				предлагаемый	противо- поставленный	предлагаемый	противо- поставленный	предлагаемый	противо- поставленный
1	крупный рогатый скот	благополучный по бруцеллезу гурт	10
2	крупный рогатый скот	благополучный по бруцеллезу гурт	45
3	крупный рогатый скот	благополучный по бруцеллезу гурт	27
4	мелкий рогатый скот	благополучная по бруцеллезу отара	120
5	крупный рогатый скот	неблагополучный по бруцеллезу гурт	98	6	5		1	92	93
6	крупный рогатый скот	неблагополучный по бруцеллезу гурт	44	4	4			40	40
7	мелкий рогатый скот	неблагополучная по бруцеллезу отара	187	13	11		2	174	176
Всего:			531	23	20		3	306	309

Примечание: 1-3 – КХ «Асем»; 4 – КХ «Еркешбай»; 5-6 – КХ «Нур»; 7 – ТОО «Бумакол».

 

Как видно из таблицы 4, при аллергическом исследовании крупного и мелкого рогатого скота, находящиеся в благополучных по бруцеллёзу хозяйствах, получены отрицательные результаты, что свидетельствуют о специфичности аллергена.

При исследовании животных разных видов из неблагополучного по бруцеллёзу хозяйств предлагаемым аллергеном на 4 (21,1%) положительных результатов получено больше, чем противопоставленным аллергеном.

Сомнительных результатов с предлагаемым аллергеном не было, тогда, как с известным аллергеном они отмечены у 4 (21,1%) животных.

Эти данные свидетельствуют о специфичности и большей чувствительности предлагаемого аллергена.

Использование предлагаемого аллергена позволит быстро и эффективно выявить заражённых бруцеллезом животных, тем самым ускорить сроки оздоровления неблагополучных по бруцеллёзу хозяйств.

Новизну на способ изготовления аллергена для диагностики бруцеллеза сельскохозяйственных животных Комитет по правам интеллектуальной собственности Министерства юстиции Республики Казахстан подтвердил выдачей инновационного патента за № 19907, зарегистрированный в Государственном реестре изобретений Республики Казахстан 28.05.2011 года.

 

5.3. Результаты изучения аллергической реакции при бруцеллезе крупного рогатого скота

До сих пор в ветеринарной практике не нашло признания аллергическая диагностика бруцеллёза животных особенно в хозяйствах, содержащих большое количество животных или наоборот (малое количество).

Первостепенное значение при мониторинге эпизоотической ситуации, проведение диагностических исследований, оздоровительных мероприятий принадлежит средствам диагностическим. Среди них особое место можно отвести аллергической диагностике. Это связано с высокой их специфичностью, активностью, показательностью, простотой постановки и меньшими физическими, экономическими затратами.

Аллергическая реакция у инфицированных животных может проявляться на внутрикожное введение, конъюнктивальное, внутривенное введение.

Нами было поставлено изучить значение аллергической реакции на внутрикожное введение.

В этой связи перед нами были поставлены следующие задачи:

- изучить безвредность, сенсибилизирующие свойства, активность;

- изыскать оптимальное место введения препарата;

- определить влияние сезонности на проявление аллергической реакции в           западно-Казахстанской области у крупного рогатого скота.

Также эффективность аллергена для диагностики бруцеллёза животных при оздоровлении неблагополучных хозяйств.

Разработанный аллерген при проверке на стерильности, безвредности на 10 белых мышах показал себя как стерильный безвредный препарат.

При проверке аллергена на сенсибилизирующие свойства в опыте было использовано 10 голов коров из благополучного стада КХ «Нур» Бурлинского района. Животным, испытуемый аллерген вводили подкожно в области средней треть шеи в дозе 1,0 см3 трехкратно с интервалом между введениями 25-30 дней. Через каждые 25-30 дней после первичного, а также же последующих введениях у животных брали кровь и исследовали по классическим серологическим тестам (РБП, РА, РСК). Результаты проведенной работы представлены в таблице 5.

                                                                                                              Таблица 5

Результаты испытания сенсибилизирующих свойств аллергена в опытах на крупном рогатом скоте «КХ «Нур»

№ п/п	Идентиф. №	РБП			РА			РСК
		Исследовано после введения аллергена, через дней
		30	60	90	30	60	90	30	60	90
1	0516	-	-	-	-	-	-	-	-	-
2	07072	-	-	-	-	-	-	-	-	-
3	07075	-	-	-	-	-	-	-	-	-
4	05013	-	-	-	-	-	-	-	-	-
5	05999	-	-	-	-	-	-	-	-	-
6	09116	-	-	-	-	-	-	-	-	-
7	07165	-	-	-	-	-	-	-	-	-
8	07241	-	-	-	-	-	-	-	-	-
9	05514	-	-	-	-	-	-	-	-	-
10	00898	-	-	-	-	-	-	-	-	-