Маркетинговые исследования локального фармацевтического рынка адаптогенных лекарственных средств в аптеках города Пятигорск

Исходя из вышеуказанных результатов социологического опроса посетителей аптеки и фармработников, нами установлено, что адаптогенные и общетонизирующие ЛС имеют достаточно высокий спрос и используется всеми возрастными группами населения.

Выводы по главе II.

 

1. Проведен контент-анализ номенклатуры ГЛС, обладающих общетонизирующим и адаптогенным действием.
2. Изучены прайс-листы дистрибьюторов, реализующих адаптогенные ЛС на фармрынке Ставропольского края.
3. Проанализирован пятигорский локальный рынок ЛС адаптогенного действия. Установлено, что ассортимент данных ЛС составляет 13 наименований или 34,2% от общей номенклатуры, разрешенной к применению в РФ.
4. Выполнен стоимостной анализ адаптогенных средств, присутствовавших в аптеках – базах исследования. Определено, что средняя стоимость отечественных ГЛС, обладающих адаптогенным действием, составляет 33,38 руб., импортных – 212,83 руб., т.е. в 6,4 раза дороже.
5. Изучен спрос на адаптогенные ЛС, имеющиеся в аптеках г. Пятигорска. По результатам социологического опроса посетителей аптеки и фармработников установлено, что адаптогенные и общетонизирующие ЛС имеют достаточно высокий спрос и используются всеми возрастными группами населения.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Глава III. Исследование полисахаридов, содержащихся в лекарственном препарате «Бефунгин».

 

3.1. Выделение полисахаридов из лекарственного препарата «Бефунгин».

 

С целью детального изучения полисахаридов, содержащихся в лекарственном препарате «Бефунгин» было произведено их выделение по следующей схеме: в мерную колбу вместимостью 50 мл помещали 10 г бефунгина (точная навеска), затем доводили водой до метки и перемешивали содержимое колбы. Полученное извлечение переносили в делительную воронку и экстрагировали хлороформно - бутанольной смесью в соотношении 5:1 3 раза по 30 мл. К водному извлечению добавляли 100 мл 95 % спирта этилового для осаждения полисахаридов и оставляли в холодильнике. Содержимое колбы фильтровали через бумажный фильтр (или центрифугировали со скоростью 3000 об/мин.). Осадок с фильтра переносили стеклянной палочкой на стекло, равномерно распределяли на его поверхности и оставляли до высушивания. Результаты гравиметрического определения полисахаридов, содержащихся в бефунгине приведены в табл. 6.

 

Таблица 6 - Результаты гравиметрического определения полисахаридов, содержащихся в бефунгине

№	а	Х%	Метрологические характеристики
1	10,1211	3,27	=3,21 =0,034 e%= ±2,7%
2	10,1324	3,22
3	10,1257	3,15
4	10,1282	3,24
5	10,2058	3,08
6	10,0623	3,31

 

Таким образом, гравиметрический анализ показал, что содержание полисахаридов, выделенных из бефунгина составляет 3,2%, с относительной погрешностью ±2,7%.

 

3.2. Хроматографическое изучение полисахаридов, содержащихся в лекарственном препарате «Бефунгин».

 

С целью изучения моносахаридного состава полисахаридов, выделенных из бефунгина, была использована бумажная хроматография.

Для хроматографического исследования полисахаридов, проводили их кислотный гидролиз. Для этого к навеске полисахаридов (0,1 г), добавляли 10 мл серной кислоты разведенной. Гидролиз проводили на водяной бане в течение 4 часов. Гидролизат нейтрализовали натрия гидроксидом 10% до рH 7. Затем на линию старта хроматографической бумаги наносили в виде пятна диаметром не более 5 мм по 50 мкл 1% растворов моносахаридов: глюкозы, манозы и ксилозы и такое же количество гидролизата полисахаридов, выделенных из бефунгина. Хроматограмму высушивали в течение 12 часов и помещали в хроматографическую камеру с системой растворителей: изопропанол - ледяная уксусная кислота-вода в соотношении 27:18:13. Хроматографировали методом восходящей хроматографии в течение 48 часов. Затем хроматограмму вынимали, высушивали и просматривали в УФ-свете. На хроматограмме наблюдали несколько пятен.

Далее хроматограмму проявляли анилинфталатным реактивом. На хроматограмме гидролизата полисахаридов, выделенных из бефунгина, наблюдали два пятна коричневого цвета со значениями Rf 0,46 и 0,52±0,02 (рис. 22).

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Рисунок 22 - Хроматограмма гидролизата полисахаридов, выделенных из бефунгина (2), глюкозы (1), ксилозы (3) и маннозы (4)

 

Стандартные образцы имели следующие значения Rf: ксилозы – 0,44±0,02; глюкозы – 0,5±0,02; маннозы – 0,7±0,02.

Таким образом, проведенные исследования позволили идентифицировать в составе полисахаридов, выделенных из лекарственного препарата «Бефунгин», глюкозу и ксилозу.

 

3.3. Идентификация полисахаридов, содержащихся в бефунгине с помощью химических реакций.

 

Методом бумажной хроматографии было достоверно подтверждено, что в структуре полисахаридов, выделенных из бефунгина присутствуют глюкоза и ксилоза, поэтому для идентификации дополнительно использовали химические реакции.

Согласно литературным данным для идентификации углеводов в растительных объектах с помощью химических реакций используются различные реактивы [].

Для идентификации нами были выбраны реакции с резорцином и антроном в присутствии концентрированной серной кислоты. Суть реакций заключается в том, что концентрированная серная кислота обеспечивает гидролиз полисахаридов до моносахаров с последующим образованием 5-оксиметилфурфурола (из гексоз), которые дают характерное окрашивание с указанными реактивами [].

Для проведения реакций предварительно готовили раствор из бефунгина для чего 1 мл лекарственного препарата растворяли в 30 мл воды.

Методика обнаружения. К 10 мл извлечения прибавляли 2 мл разведённой хлористоводородной кислоты. Образовавшийся осадок отфильтровывали через бумажный фильтр. Определение чувствительности проводили методом разбавления.

1.1. К 1 мл полученного фильтрата  прибавляли 1 мл 0,2 % раствора резорцина, приливали 5 мл концентрированной  серной кислоты и осторожно  перемешивали.

1.2. К 1 мл фильтрата прибавляли 2 мл 0,2% раствора антрона в концентрированной серной кислоте (табл. 7).

 

Таблица 7 - Результаты химических реакций на полисахариды, содержащиеся в бефунгине

Реактив	Результат	Предел обнаружения, г/мл
Раствор резорцина 0,2%	Розовое окрашивание	3×10-5
Раствор антрона 0,2% в концентрированной серной кислоте	Зелёное окрашивание	12×10-5

 

Предложенные реакции характеризуются выраженным аналитическим эффектом и высокой чувствительностью.

Таким образом, разработаны методики идентификации полисахаридов, содержащихся в бефунгине характеризующиеся простотой выполнения, малой трудоёмкостью и высокой чувствительностью.

 

3.4. Спектрофотометрический анализ полисахаридов, выделенных из лекарственного препарата «Бефунгин»

 

С целью подтверждения полученных результатов было проведено фотометрическое изучение выделенной группы биологически активных веществ. Для этого в мерную колбу вместимостью 25 мл вносили 0,1 г полисахаридов (точная навеска), доводили водой до метки, 1 мл полученного раствора переносили в мерную колбу вместимостью 25 мл и также доводили водой до метки. К 1 мл полученного раствора приливали 1 мл раствора резорцина 0,2% и 5 мл конц. серной кислоты, осторожно перемешивали. Оптическую плотность полученного раствора измеряли на СФ-2000 в области 250-550 нм. В качестве раствора сравнения использовали 0,2% раствор резорцина с тем же количеством конц. серной кислоты. На полученной спектральной кривой наблюдали два максимума при длинах волн 490±2 нм (рис.23).

 

 

 

 

 

 

 

 

Рисунок 23 - Спектр поглощения продуктов взаимодействия полисахаридов, содержащихся в бефунгине с резорцином в присутствии концентрированной серной кислоты

Идентичный спектр имеет раствор глюкозы, поэтому полученные результаты подтвердили наличие глюкозы в составе полисахаридов, содержащихся в лекарственном препарате «Бефунгин».

Содержание полисахаридов рассчитывали по калибровочному графику, построенному для стандартных растворов глюкозы, так как она является структурным элементом полисахаридов, выделенных из бефунгина, что доказано проведёнными нами хроматографическими.

Для построения калибровочного графика 0,1400 г (точная навеска) глюкозы, высушенной до постоянной массы при 100-105°С, растворяли в воде в мерной колбе вместимостью 100 мл и доводили водой до метки (раствор А).

Переносили 2 мл полученного раствора в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводили объём раствора водой до метки (раствор Б).

В 10 пробирок вносили раствор Б и воду в количествах, указанных в табл. 8.

 

Таблица 8 – Условия приготовления стандартных растворов глюкозы для построения калибровочного графика

Объём раствора Б (мл)	Объём воды, мл	Содержание глюкозы, мкг/мл
0,1	0,9	11,2
0,2	0,8	22,4
0,3	0,7	33,6
0,4	0,6	44,8
0,5	0,5	56
0,6	0,4	67,2
0,7	0,3	78,4
0,8	0,2	89,6
0,9	0,1	100,8
1,0	0	112

 

Калибровочный график приведён на рис. 24.

Рисунок 24 - Калибровочный график зависимости оптической плотности от концентрации глюкозы

 

Расчёт содержания полисахаридов, содержащихся в полисахаридном комплексе бефунгина, проводили по калибровочному графику и по формуле:

где С – количество глюкозы, определённое по калибровочному графику г/мл;

а – навеска лекарственного препарата, г;

W, W1 - объёмы мерных колб, мл;

V1 – аликвота, мл;

Результаты определения полисахаридов в бефунгине, рассчитанные по калибровочному графику, представлены в табл. 9.

 

 

 

 

 

Таблица 9 - Результаты фотометрического определения полисахаридов, содержащихся в бефунгине

№	А	Х%	Метрологические характеристики
1	0,736	2,91	=2,9 =0,257 e%=±2,3%
2	0,732	2,87
3	0,773	2,82
4	0,749	2,95
5	0,766	2,84
6	0,750	2,98

 

 

Таким образом, содержание полисахаридов составило 2,9%. Относительная погрешность определения составляет ±2,3%.

 

3.5. Разработка методики фотометрического анализа полисахаридов, содержащихся в лекарственном препарате «Бефунгин»

 

Так как гравиметрический метод является достаточно трудоёмким и продолжительным, нами была разработана методика фотометрического анализа бефунгина по выделенной группе биологически активных веществ.

Для спектрофотометрического анализа 1,0 (точная навеска) лекарственного препарата «Бефунгин» помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл. Доводили водой до метки, перемешивали. К 1 мл полученного раствора приливали 1 мл раствора резорцина 0,2% и 5 мл конц. серной кислоты, осторожно перемешивали. Оптическую плотность полученного раствора измеряли на СФ-2000 в области 250-550 нм. В качестве раствора сравнения использовали 0,2% раствор резорцина с тем же количеством конц. серной кислоты. На полученной спектральной кривой наблюдали максимум при длине волны 490±2 нм (рис. 25).