Разработка лабораторного регламента производства изотонического раствора натрия хлорида 0,9% для инъекций (на 1000 л в ампулах по 10 мл)

5 Пирогенность.

Испытание на пирогенность проводится в бактериологической лаборатории  биологическим методом. Метод основан  на измерении температуры тела кроликов после введения раствора испытуемого  вещества.

Испытуемый изотонический  раствор натрия хлорида подогревают  до 37°С и вводят в ушную вену кролика  в объеме 10 мл в течение 2 минут. Перед  введением дважды через каждые 30 минут измеряют температуру тела кроликов, результаты должны отличаться не более чем на 0,2°С. Результат  последнего измерения принимают  за исходную температуру. После введения испытуемого раствора температуру  измеряют трижды через 1 час. Раствор  лекарственного вещества считают не пирогенным, если сумма повышений  температуры меньше или равна 1,4°С. Если эта сумма превышает 2,2°С, то раствор считают пирогенным.

6 Бактериальные эндотоксины.

Испытание на бактериальные  эндотоксины проводят для определения  наличия эндотоксинов, источником которых  являются грамотрицательные бактерии, с использованием лизата амебоцитов мечехвоста Limulus polyphemus.

Существует три принципа проведения данного испытания: принцип  гель-тромба, основанный на образовании  геля; турбидиметрический принцип, основанный на помутнении в результате расщепления  эндогенного субстрата; хромогенный  принцип, основанный на появлении окраски  после расщепления синтетического пептидно-хромогенного комплекса.

Испытание выполняют в  условиях, не допускающих загрязнения  посторонними эндотоксинами. Всю стеклянную посуду и другую термоустойчивую  аппаратуру депирогенизируют в сухожаровом  шкафу с использованием процесса с подтвержденной эффективностью. Общеприняты  минимальные значения времени и  температуры обработки, составляющие 30 минут и 250°С, соответственно. При  использовании пластиковой аппаратуры, например, микротитрационных планшетов  и наконечников для автоматических пипеток, следует продемонстрировать отсутствие на ней поддающихся определению  эндотоксинов и мешающих факторов.

Исходный стандартный  раствор эндотоксина готовят  и хранят, следуя спецификациям, приведенным  на листке-вкладыше и этикетке.

Приготовление испытуемых растворов. Испытуемые растворы готовят путем  растворения или разбавления  активных субстанций или медицинской  продукции с использованием воды для испытания на бактериальные  эндотоксины ИБЭ.

При необходимости, доводят  значение рН испытуемого раствора (или  его разведения) так, чтобы рН его  смеси с лизатом находилось в  интервале, предписанном производителем лизата.

Определяют максимально  допустимое разведение (МДР) - максимальное разведение образца, при котором  может быть определено предельное содержание эндотоксина.

Предел эндотоксина для  активных субстанций, предназначенных  для парентерального введения, указывается  в частных статьях и выражается в таких единицах, как МЕ/мл, МЕ/мг, МЕ/(единица биологической активности) и т.д.

Принцип гель-тромба.

Гель-тромб-методы позволяют  определять наличие и количество эндотоксинов и основываются на эффекте  свертывания лизата в присутствии  эндотоксинов. Концентрация эндотоксинов, требующаяся для свертывания  лизата в стандартных условиях, представляет собой указанную на этикетке чувствительность лизата. Для обеспечения точности и достоверности испытания указанную  чувствительность лизата следует подтвердить, а также провести испытание на мешающие факторы.

Предварительные испытания: подтверждение заявленной чувствительности лизата. Перед использованием лизата в испытаниях указанную на этикетке чувствительность, выраженную в МЕ/мл, следует подтвердить в четырех  повторностях.

Готовят стандартные растворы не менее, чем четырех концентраций. В каждой из пробирок смешивают раствор  лизата с равным объемом одного из стандартных растворов (например, по 0,1 мл каждого). Если используются одноразовые  флаконы или ампулы с лиофилизированным  лизатом, растворы добавляют непосредственно  в ампулу или флакон. Реакционную  смесь инкубируют в течение определенного  периода, в соответствии с рекомендациями производителя лизата (обычно 37±1°  С в течение 60±2 минут), избегая  вибрации. Исследуют целостность  геля: при использовании пробирок каждую из них по очереди извлекают  из инкубатора и переворачивают одним  плавным движением приблизительно на 180° . Если образуется твердый гель, остающийся на своем месте после  переворачивании, результат записывают как положительный. Результат отрицательный, если неповрежденного геля не образуется.

Результаты испытания  считают достоверными, если низшая концентрация стандартных растворов  во всех повторностях дает отрицательный  результат.

За конечную точку принимают  последний положительный результат  в нисходящем ряду концентраций эндотоксина. Вычисляют среднее значение логарифмов концентраций в конечных точках и, затем, антилогарифм этого среднего значения. Среднее геометрическое концентраций в конечных точках представляет собой  измеренную чувствительность раствора лизата (МЕ/мл). Если это значение составляет не менее 0,5λ и не более 2λ, чувствительность, указанную на этикетке, считают подтвержденной и используют в испытаниях, выполняемых  с этим лизатом.

Предельное испытание. Методика. Готовят растворы A, B, C и D в соответствии с Таблицей в ГФРБ и выполняют  испытание для этих растворов  в соответствии с указаниями подраздела “Предварительные испытания”, “Подтверждение чувствительности лизата, указанной  на этикетке”.

Растворы А и В (положительный  контроль с препаратом) готовят в  разведениях не выше МДР и обрабатывают в соответствии с указаниями подразделов  “Предварительные испытания”, “ Определение  мешающих факторов”. Растворы В и  С (положительные контроли) содержат стандарт эндотоксина в концентрации, соответствующей двукратной заявленной чувствительности. Раствор D (отрицательный контроль) представляет собой воду для ИБЭ.

Интерпретация. Результаты испытания  считают достоверными, если положительные  контрольные растворы В и С  в обеих повторностях дают положительный  результат, а раствор D – отрицательный  результат.

Испытуемый препарат выдерживает  испытание, если для раствора А в  обеих повторностях получен отрицательный  результат. Если для раствора А в  обеих повторностях получен положительный  результат:

- если при этом испытуемый  раствор разбавлен до МДР, он  не выдерживает испытание,

- если степень разведения  препарата менее МДР, испытание  повторяют с использованием разведения, не превышающего МДР.

В случае, если для одной  из повторностей раствора А получен  положительный результат, а для  другой – отрицательный, испытание  повторяют.

ТП 5 Этикетирование

Нанесение надписи на ампулы производится на полуавтомате, устройство которого изображено на рисунке 8.

В бункер (7) загружают ампулы и барабаном подачи (8) направляют к офсетному цилиндру, на котором  нанесены буквы и цифры надписи, вдавленные виде углубления в 40-50 мкм. Формный цилиндр (5) , вращаясь в ванне  с быстровысыхающей краской для  глубокой печати, подает ее на офсетный цилиндр. Избыток краски с помощью  ракеля (4) и регулирующего устройства снимается с поверхности офсетного  цилиндра и остается в глубине  надписи. При контакте надпись наноситься на ампулу и быстро высыхает.

 

УМО Упаковка, маркировка

Ампулы нейтрального стекла АС-3 с раствором упаковывают в  коробки из картона по 10 штук. В  каждую коробку вкладывают нож для  вскрытия ампул. На коробку наклеивают этикетку из бумаги этикетной или  писчей. Далее упаковывают в транспортную тару.

 

7 Материальный  баланс

 

Таблица 4. Состав

Наименование	Состав на 1 л:	Состав на 1 000 л:
Натрия хлорида	9 г	9000 г
Воды для инъекций	1000 мл	1000000 мл
Количество ампул	100 шт	100000 шт

 

Номинальный объем заполнения ампул—10 мл.

Фактический объем—10,5 мл.

Соответственно  состав на 1 000 л:

Натрия хлорида 9 450г

Воды для инъекций 1 050 000 мл

Количество ампул 100 000 шт.

Материальные  потери на различных стадиях производства:

Приготовление раствора 0,15%

Ампулирование0,25%

Стерилизация0,30%

Контроль качества0,50%

Этикетирование0,10%

Материальные потери на каждой стадии можно рассчитать по следующей  формуле:

 

W = mо × и, где

 

W — материальные потери  на данной стадии;

mо — масса вещества  в начале стадии;

и — потери в долях от единицы.

Результаты расчетов приведены  в таблице.

 

Таблица 5. Материальные потери

Ингридиенты	Взято	Получено	Потери
ТП 1 Приготовление раствора
Натрия хлорид	9450	9435,82	14,18
Вода для инъекций	1050000	1048425	1575
ТП 2 Ампулирование
Натрия хлорид	9435,82	9412,23	23,59
Вода для инъекций	1048425	1045803,94	2621,06
Ампулы	100000	99750	250
ТП 3 Стерилизация раствора
Натрия хлорид	9412,23	9383,99	28,24
Вода для инъекций	1045803,94	1042666,53	3137,41
Ампулы	99750	99450,75	299,25
ТП 4 Контроль качества
Натрия хлорид	9383,99	9337,07	46,92
Вода для инъекций	1042666,53	1037453,2	5213,33
Ампулы	99450,75	98953,5	497,25
ТП 5 Этикетирование
Натрия хлорид	9337,07	9327,73	9,34
Вода для инъекций	1037453,2	1036415,75	1037,45
Ампулы	98953,5	98854,55	98,95

 

Уравнение материального  баланса:

 

mн=mк+mп,

 

где mн—масса исходного  продукта; mк—масса конечного продукта; mп—масса потерь.

Технологический выход:

 

η= mк /mн ∙ 100%

 

Технологическая трата:

 

Ε= mп/ mн ∙ 100%

 

Расходный коэффициент:

 

κ = mн /mк 

 

Уравнение материального  баланса для натрия хлорида:

9450=9327,73+122,27

η =9327,73/9450 ∙ 100%=98,71%

Ε=122,27/9450 ∙ 100%=1,29%

Κ=9450/9327,73=1,013

Уравнение материального  баланса для воды для инъекций:

1050000=1036415,75+13584,25

η =1036415,75/1050000 ∙ 100%=98,71%

Ε=13584,25/1050000 ∙ 100%=1,29%

Κ=1050000/1036415,75=1,013

Уравнение материального  баланса для ампул:

100000=98854,55+1145,45

η =98854,55/100000 ∙ 100%=98,85%

Ε=1145,45/100000 ∙ 100%=1,15%

Κ=100000/98854,55=1,012

Расходная пропись:

Натрия хлорида 9450 ∙ 1,013=9572,82 г

Воды для инъекций 1050000 ∙ 1,013=1063650 мл

Количество ампул 100000 ∙ 1,012=101200 шт.

 
 

Таблица 6. Материальный баланс

Израсходовано		Получено
Наименование сырья и  полупродуктов	Количество	Наименование конечного  продукта, потерь	Количество
Натрия хлорид	9572,82 г	Раствор натрия хлорида 0,9% для  инъекций	1036415,75 мл
Вода для инъекций	1063650 мл
		Потери	27234,25
Итого:	1063650 мл	Итого:	1063650 мл

 

 

Получено 100 000 ампул раствора натрия хлорида 0,9% для инъекций.

 

8 Переработка  и обезвреживание отходов производства

 

В процессе производства раствора натрия хлорида для инъекций отходов  не образуется.

 

9 Контроль производства и управление технологическим процессом

 

Обязанность по контролю и  управлению технологическим процессом  возлагается на главного инженера соответствующим  приказом руководства.

Растворы для инъекций должны готовиться при соблюдении всех правил ассептики. Растворы должны быть прозрачными и свободными от частиц, а также выдерживать испытания  на бактериальные эндотоксины и  пирогенность.

 

10 Охрана труда  и техники безопасности, пожарная  безопасность, производственная санитария  и условия труда работников

Общие требования к безопасному  ведению технологического процесса должны обеспечиваться, в соответствии со стандартами системы безопасности труда (ССБТ), «Правилами безопасности для фармацевтической промышленности», «Правилами устройства электроустановок» (ПУЭ), «Правилами техники безопасности при эксплуатации электроустановок потребителей (ПТБ), «Санитарными правилами  организации технологических процессов  и гигиеническими требованиями к  производственному оборудованию» (СанПин 11-04-74), «Санитарными нормами микроклимата производственных помещений» ( СанПин №11-13-94), «Перечнем регламентированных в воздухе рабочей зоны вредных  веществ» (СанПин №11-19-940, и инструкциями по охране труда и рабочими инструкциями для производства.

К работе допускаются лица, достигшие 18 лет, не имеющие медицинских  противопоказаний, прошедшие обучение безопасным методам работы в соответствии с «Положением об обучении, инструктаже  и проверке знаний по вопросам охраны труда», и сдавшие экзамен на допуск к самостоятельной работе. Все  работники лаборатории должны проходить  медицинское освидетельствование  в сроки, установленные МЗ РБ.