Автор работы: Пользователь скрыл имя, 07 Февраля 2015 в 23:44, курсовая работа
Метод електрофорезу , запропонований ще на початку ХХ століття , зараз широко використовують в біології та медицині для розділення білків в дослідницьких і клінічних цілях. За допомогою електрофорезу можна розділити на окремі компоненти білкову суміш , що дозволяє встановити молекулярну масу білка або його субодиниць , підтвердити чистоту виділеного білка.
Електрофорезом називають рух заряджених частинок в розчині під дією електричного поля.
ВСТУП.......................................................................................................
5
РОЗДІЛ 1. ЗАГАЛЬНІ ВІДОМОСТІ ПРО МЕТОД ЕЛЕКТРОФОРЕЗУ..........................................................................
6
1.1. Принцип методу електрофорезу білків та електрофоретична рухливість
7
1.2. Класифікація методів електрофорезу ..........................
1.3. Практичне значення електрофорезу в біології …………….
РОЗДІЛ 2. ВИКОРИСТАННЯ РІЗНИХ ВИДІВ ЕЛЕКТРОФОРЕЗУ ПРИ ДОСЛІДЖЕННІ БІОЛОГІЧНИХ ОБ’ЄКТІВ
12
2.1. Особливості електрофорезу в поліакриламідному гелі..................................................................
12
2.2. Нативний і SDS- ПААГ - електрофорез ………………………………………..
17
РОЗДІЛ 3. ПРАКТИЧНЕ ВИКОРИСТАННЯ ЕЛЕКТРОФОРЕЗУ …
22
3.1. Проведення нативного вертикального диск- електрофорезу в пластині ПААГ з використанням приладу Стадіера…………………………………..
3.2. Проведення нативного вертикального диск- електрофорезу в пластині ПААГ з використанням камери VE- 10
………………………………...
3.3. Плоскошарова хроматографія…………………………………
3.4. Хромато-мас-спектрометрія…………………………………..
3.5. Конструктивно-технологічні елементи хроматографії………
3.6. Алгоритми хроматографічного аналізу……………………….
22
24
25
27
29
35
Висновки…..........................................................................................
38
Список використаної літератури.........................................
39
20 мкл ТЕМЕД , 160 мкл ПСА .
Отриманий розчин швидко струшують ( для перемішування ) і відразу заливають між склом за допомогою автоматичної піпетки.
Для приготування концентрирующего гелю змішують : 1 мл розчину АБ , 1 мл трис - HCl буфера , рН 6,8 , 3 мл води , 20 мкл ТЕМЕД , 160 мкл ПСА , струшують і швидко заливають . Відразу між стеклами поміщають гребінку .
Рис. 17 Заливка гелю в заливальному столику
Третій етап. Внесення проб і підготовка камери до роботи.
Після застигання гелів дістають гребінку, в утворилися лунки внсят проби і барвник, як в Лабораторній роботі № 1. Столик розбирають, камеру дістають і, не знімаючи затискачів, поміщають в ванночку (камера повинна стійко стояти у ванні). Зверху надягають кришку з електродами (рис. 18), стежачи за дотриманням полярності (колір клем на камері повинен збігатися з кольором електродів на кришці).
Рис . 18 Підготовка камери до роботи
Камеру з ванночкою поміщають в холодильник. Електродний буфер наливають у ванночку і у внутрішній простір камери до внутрішньої межі стекол (він на кілька міліметрів повинен покривати гель).
Четвертий етап . Проведення електрофорезу .
Підключають джерело живлення Ельф - 4 , задають потрібні параметри подається напруги або сили струму і запускають процес . Зазвичай електрофорез проводять при значенні напруги 120-140 В в концентруйте гелі і 180 В - в розділяючому . Після того , як фронт барвника підійде до нижнього краю пластини (рис. 19 ), прилад відключають від електроживлення , гель обережно виймають із стекол , розрізають на рівні частини.
Рис . 19 Гель з кордоном бромфенолового синього після закінчення електрофорезу
Информация о работе Метод електрофорезу в дослідженні біологічних об’єктів