Анализ однокомпонентных и многокомпонентных препаратов, содержащих аналгин и дротаверина гидлохлорид

Таким образом, результаты экспериментов показали, что выбранные варианты методики практически равноценны, а различия между ними не оказывают существенного влияния на результаты анализа. В связи с чем можно сделать вывод о нецелесообразности внесения изменений в известную и широко распространенную титриметрическую методику количественного определения  анальгина.

Учитывая вышеизложенные результаты экспериментальных исследований, для количественного определения анальгина в таблетках была принята за основу методика титрования, выбранная для субстанции анальгина. На модельных смесях установлено, что вспомогательные вещества не мешают определению анальгина в однокомпонентных таблетированных лекарственных формах.

С привлечением процедуры  валидации по вышеописанной схеме проведен сравнительный анализ методик количественного определения: титриметрическим, спектрофотометрическим  и хроматографическим методами. Проведенные исследования показали, что используемые методы дают равнозначные результаты и могут с одинаковым успехом применяться для количественного определения анальгина в его однокомпонентных таблетированных лекарственных формах

При разработке методики количественного определения анальгина  в таблетках «СПАЛГИН форте» возникли некоторые трудности, связанные с присутствием в растворах 2-го компонента -  дротаверина гидрохлорида. Для количественного определения анальгина в препаратах чаще всего, как сказано выше, используется йодометрическое титрование без индикатора (точка эквивалентности определяется по появлению желтой окраски раствора, устойчивой в течение 30 секунд).

Привычный вариант методики определения анальгина в присутствии дротаверина гидрохлорида оказался неприемлемым, поскольку испытуемый раствор в кислой среде исходно имеет желтый цвет. Поэтому стандартная методика была несколько модифицирована – в качестве индикатора использовали раствор крахмала, причем в значительно больших, чем предписано ГФ, объемах (точку эквивалентности определяли по появлению бурого окрашивания в растворе).

Что касается спектрофотометрического  определения анальгина в комплексном препарате «СПАЛГИН форте», то использование простого в выполнении метода прямой спектрофотометрии не представляется возможным в связи с присутствием дротаверина гидрохлорида, который, как было показано выше, поглощает в той же области длин волн, смещая максимум анальгина в его спектре поглощения. 

Таким образом, для определения  содержания анальгина  в комбинированном  препарате «СПАЛГИН форте» выбран метод йодометрического титрования с использованием в качестве индикатора – крахмала.

Для количественного  определения дротаверина гидрохлорида в субстанциях обычно  используется метод неводного титрования, для определения его в таблетках – спектрофотометрия и ВЭЖХ. Соответствующие известные методики не имеют существенных различий.

Для количественного  определения дротаверина гидрохлорида в таблетках «СПАЛГИН форте» была использована традиционная спектрофотометрическая методика с рабочей длиной волны 353 нм, при которой анальгин не поглощает энергию и, следовательно, не мешает определению.

Для отечественного комбинированного препарата «СПАЛГИН плюс» таблетки, покрытые оболочкой, находящегося в стадии разработки и включающего в состав также фенпивериния бромид, как показали наши исследования, применимы методики количественного определения дротаверина гидрохлорида и анальгина, выбранные для  таблеток «СПАЛГИН форте». Для фенпивериния бромида была разработана экстракционно-фотометрическая методика определения его содержания в препарате без использования традиционного в таких случаях ядовитого вещества – калия цианида. Условия определения: концентрация фенпивириния бромида в растворах 6,4 мкг/мл, краситель – тропеолин 00, водная фаза – боратный буфер с рН 9.2,  органическая фаза – хлороформ, длина волны, при которой проводятся измерения оптической плотности – 545 нм.

 

3. Определение  содержания посторонних примесей в субстанциях, однокомпонентных и комбинированных таблетированных лекарственных формах

Важной задачей фармацевтического  анализа является определение содержания посторонних примесей в лекарственных  препаратах. В этой связи представляло интерес провести экспериментальную работу по выбору условий совместного определения посторонних примесей компонентов отечественного оригинального препарата «СПАЛГИН форте» таблетки, покрытые оболочкой. Одновременно перед нами стояла задача выбора и оптимизации условий определения содержания родственных примесей в субстанциях и однокомпонентных таблетированных лекарственных формах анальгина и дротаверина гидрохлорида.

  Предварительно был проведен анализ известных методик определения чистоты препаратов изучаемых веществ. Установлено, что  для этих целей обычно используются хроматографические методы – ТСХ и ВЭЖХ.

Варианты методик ВЭЖХ для определения посторонних  примесей в субстанциях  и однокомпонентных препаратах анальгина и дротаверина  гидрохлорида не отличаются большим разнообразием по сравнению с методиками ТСХ, в связи с этим больший объем сравнительных исследований нами проведен с использованием метода ТСХ.

Анализ чистоты  анальгина.

С целью выбора оптимальных  условий определения посторонних  примесей, главными из которых являются 4-метиламиноантипирин, 4-аминоантипирин и антипирин, методом ТСХ в субстанции и таблетированных формах анальгина были проведены экспериментальные исследования по параметрам методики, перечисленным ниже.

 Для хроматографирования выбраны пластины с нанесенным тонким слоем  сорбента  Silicagel 60 F254 на стеклянной или алюминиевой подложке (Merck). На пластинах марок «Силуфол» и «Сорбфил» в большинстве случаев оказалось невозможным получить хроматограммы с четким контуром пятен, что резко снижает чувствительность определения. Кроме того, четкого разделения пятен на этих пластинах также, как правило, не было.

 Определен способ  детектирования – в ультрафиолетовом  свете при 254 нм

 Изучена хроматографическая  подвижность анальгина и его возможных примесей в системах растворителей, включенных в действующие НД на различные препараты, содержащие анальгин, и составленные нами:

1) Циклогексан-ацетон (40:50)

2) толуол-ацетон-этанол (1:1:1)

3) трихлорэтан-метанол-диэтиловый  эфир (65:35:6)

4) хлороформ-метанол-эфир-диэтиламин (60:30:16:0.5)

5) хлороформ – спирт-метиловый (8:2)

6)   10 % раствор аммиака – вода- н-бутанол - ацетон - бутилацетат (1:9:30:40:50)

7) бензол-метанол- концентрированный раствор аммиака (20:4:0.1)

8) хлороформ -спирт метиловый (9:1)

9) хлороформ-спирт метиловый  (7:3)

10) трихлорэтан-метанол-эфир (65:35:6) с насыщением  парами аммиака  в течение 1 часа.

11)ацетон-вода (80:20)

12) бензол –метанол (70:30)

13) ацетон-абсолютный  этанол-толуол (30:30:30)

14) хлороформ-этанол-диэтиламин (80:20:1)

Изучена возможность использования в качестве растворителей проб хлороформа, безводного хлороформа,  спирта метилового, а также смесей указанных растворителей. Отмечено, что в метанольном растворе анальгина происходит  частичное его разрушение с образованием примеси 4-метиламиноантипирина, содержание которой увеличивается во времени (характерно и для смешанных растворителей). Поэтому в дальнейшем использовались хлороформные растворы анальгина (лучшие результаты получены с безводным хлороформом), при этом следует отметить, что сам анальгин в хлороформе практически нерастворим, но хорошо растворимы его примеси.

Антипирин - продукт глубокой деструкции (окисления) анальгина, не был обнаружен ни в одной из проконтролированных серий субстанции, а также моно- или многокомпонентных лекарственных форм анальгина с различным остаточным сроком годности  при хроматографировании в ПФ (3, 13), в которых он четко отделяется от 2-х других наиболее вероятных примесей – 4-метиламиноантипирина и 4-аминоантипирина. Последние разделяются в ПФ (3, 4, 5, 6, 8, 14).

На основании результатов  проведенных исследований для определения  примесей в анальгине выбрана ПФ - хлороформ, спирт метиловый – 80:20, в которой пятна 4-аминоантипирина и 4-метиламиноантипирина расположены по центру пластинки (Rf 0,48 и 0,56 соответственно), компактны, имеют четкие границы и достаточную степень разделения (в других ПФ пятна либо слабо выражены – «размыты», либо недостаточно отделены друг от друга).

  В качестве СОВС  выбран 4-аминоантипирин, учитывая его доступность и одинаковую чувствительность обнаружения (0,25 мкг) с 4–метиламиноантипирином (основной возможной примесью). Использование анальгина для этих целей неприемлемо, поскольку приводит к необъективной оценке результатов анализа, так как чувствительность обнаружения анальгина составляет около  0,5мкг, то есть в 2 раза ниже аналогичного параметра для указанных примесей анальгина.

Проверка пригодности хроматографической системы проводится по хроматограмме образца, содержащего по 0,4 мкг 4-аминоантипирина и 4-метиламиноантипирина: пятна должны быть четко видны на хроматограмме и разделяться между собой.  

Стандартный образец 4-метиламиноантипирина (основной примеси анальгина) не производится в промышленном масштабе, поэтому возникла необходимость выбора условий его в лабораторных условиях. Полученное соединение было охарактеризовано с помощью спектральных методов анализа в инфракрасной и ультрафиолетовой областях, а также с помощью хроматографии (ТСХ и ВЭЖХ) в сравнении со стандартом 4-метиламиноантипирина, предоставленным фирмой «Софарма», Болгария; при этом получено совпадение спектров и профиля хроматограмм указанных образцов.

Анализ чистоты  дротаверина гидрохлорида

Сравнительный анализ имеющихся условий определения посторонних примесей дротаверина гидрохлорида методом ТСХ, включенных в действующие НД, показал, что:

- анализ, как правило, проводится на  пластинах Kieselgel F254 (предварительно активированных или неактивированных).

- оценка результатов проводится в ультрафиолетовом свете при длинах волн 254 нм (фиолетовые пятна на желтовато-зеленоватом фоне), редко - при 366 нм (пятна голубого цвета на темном фоне), очень редко – с использованием модифицированного реактива Драгендорфа и 0,05М раствора серной кислоты.

- используется около десятка подвижных фаз, включающих в себя такие растворители, как татрагидрофурвн, этилацетат, спирты, амины, органические кислоты, бензол и его гомологи, хлороформ, н-гексан и др. В одном НД предусмотрено последовательное хроматографирование в 2-х подвижных фазах.

- в качестве растворителей проб используется хлороформ, метанол, буферные растворы с различным рН

- в роли вещества свидетеля, как правило, используется дротаверин, редко – дротавералдин (основной продукт окисления)

Для выбора оптимальных  условий оценки содержания примесей в дротаверина гидрохлориде методом ТСХ нами было изучено хроматографическое поведение дротаверина в следующих ПФ:

 1. бензол-спирт метиловый-концентрированный раствор аммиака (40:8:0.1)

2.   ксилол- метилэтилкетон- спирт метиловый- диэтиламин (20:20:3:1)

3. дихлорэтан- спирт метиловый-ацетон-диэтиламин (80:10:5:5)

4. бензол-спирт  метиловый-раствор аммиака концентрированный  (20:4:0,1) .

Оптимальной оказалась подвижная фаза: бензол, спирт метиловый, раствор аммиака концентрированный - 20:4:0,1.

 В качестве  базового растворителя проб использован  хлороформ, поскольку дротаверина  гидрохлорид в нем  легко  растворим, а возможность его гидролиза в данном случае минимальна.

 Изучено  влияние активирования  пластин  на результат хроматографирования. Экспериментально установлено, что активирование пластин в течение 1 часа при 110^оС  не оказывает существенного влияния на характер хроматограммы, поскольку расположение пятен дротаверина и примесей на активированных и неактивированных пластинах практически ничем не отличается.

 Выбран  способ детектирования и вещество-свидетель. В качестве вещества свидетеля был использован непосредственно дротаверин, так как в РФ стандарты дротавералдина, либо других известных примесей дротаверина не являются широко доступными, а чувствительность определения как для основного, так и для примесных веществ составляет 0,25 мкг. Для детектирования был выбран наиболее распространенный способ – оценка в ультрафиолетовом свете при 254нм

Для определения  посторонних примесей в комбинированном препарате «СПАЛГИН форте» в качестве основной выбрана подвижная фаза: бензол, спирт метиловый, раствор аммиака концентрированный - 20:4:0,1, которая, как показано выше, пригодна для определения содержания примесей как дротаверина гидрохлорида, так и анальгина.

В качестве растворителя использовали хлороформ (применяемый в анализе посторонних примесей каждого индивидуального  компонента препарата).

         Однако в процессе исследований было отмечено, что  присутствие дротаверина гидрохлорида улучшает растворимость анальгина в хлороформе. Хроматографирование хлороформного экстракта модельной смеси таблеток СПАЛГИН форте показало, что дротаверина гидрохлорид частично разрушается в растворе. Этот факт, вероятно, обусловлен влиянием анальгина.