Анализ однокомпонентных и многокомпонентных препаратов, содержащих аналгин и дротаверина гидлохлорид

Анальгин представляет собой производное пиразола, дротаверина  гидрохлорид является синтетическим  аналогом папаверина гидрохлорида, а  с точки зрения химического строения является производными бензилизохинолина. Оба вещества обладают ярко выраженными  восстановительными свойствами и образуют окрашенные продукты окисления, что часто используется для их идентификации. Из множества известных реакций для подтверждения подлинности анальгина и дротаверина гидрохлорида в субстанциях и однокомпонентных таблетированных лекарственных формах выбраны реакции с перекисью водорода, йодатом калия (анальгин) и хлоридом окисного железа (дротаверина гидрохлорид) как одни из самых наглядных, экспрессных и не требующие использования редких реактивов. Для комбинированного препарата «СПАЛГИН форте» для обоих компонентов использованы реакции с хлоридом окисного железа (для дротаверина гидрохлорида – после предварительного удаления анальгина из раствора). Достоинством этого выбора является универсальность реактива, наглядность и простота выполнения реакций.

Для идентификации анальгина  и дротаверина гидрохлорида широко применяются их спектральные характеристики в инфракрасной, ультрафиолетовой и  видимой областях.   При этом спектры поглощения в ультрафиолетовой и видимой областях используются как для субстанций, так и для готовых лекарственных форм, содержащих изучаемые вещества.

При попытке использования  их для подтверждения подлинности  компонентов комбинированного препарата «СПАЛГИН форте» возникли предсказуемые трудности, связанные с частичным наложением спектров действующих веществ.

Индивидуальные спектры поглощения анальгина и дротаверина гидрохлорида в 0,1М хлористоводородной кислоте, а также тех же спектры поглощения при совместном присутствии этих соединений представлены на рисунках 1-4.

 

Рис.1 Спектр поглощения анальгина (0,02 мг/мл)

 

Рис.2 Спектр поглощения анальгина (0,02 мг/мл) в присутствии дротаверина гидрохлорида

 

Рис.3 Спектр поглощения дротаверина гидрохлорида (0,015 мг/мл)

 

Рис.4 Спектр поглощения дротаверина гидрохлорида (0,016 мг/мл) в присутствии анальгина

 

На рисунках 3 и 4 видно, что присутствие большого количества анальгина видоизменяет спектр дротаверина гидрохлорида (концентрации компонентов в растворе 0,1мг/мл и 0,016мг/мл соответственно), маскируя максимумы в области 210-400 нм, при этом выражен лишь один характерный максимум (354 нм). В связи с чем подтверждение подлинности дротаверина гидрохлорида в двухкомпонентном препарате проводилось именно по этому максимуму после снятия спектра поглощения раствора препарата в области 300-420 нм.

Присутствие дротаверина  гидрохлорида в растворе смещает максимум поглощения анальгина в коротковолновую область спектра (рис.1 и 2). Поэтому в целях обеспечения возможности использования спектрофотометрического метода для подтверждения подлинности анальгина в комбинированном препарате возникла необходимость компенсации этого эффекта.  Чтобы решить поставленную задачу, спектр раствора препарата снимали относительно раствора сравнения, представляющего собой раствор дротаверина гидрохлорида в той же концентрации, что и в испытуемом растворе препарата.

2. Количественное  определение анальгина и дротаверина  гидрохлорида в субстанциях, однокомпонентных  и комбинированных таблетированных лекарственных формах

Для выбора условий определения содержания активных компонентов в новом отечественном препарате «СПАЛГИН форте» таблетки, покрытые оболочкой, были проанализированы известные методики, используемые для этих целей. Отдельным важным этапом этого исследования был выбор и оптимизация методик определения количественного содержания анальгина и дротаверина гидрохлорида в субстанциях и однокомпонентных таблетированных лекарственных формах.

 Количественное определение анальгина чаще всего проводится методом йодометрического титрования.

В готовых лекарственных формах анальгина для этих целей иногда используется ВЭЖХ и редко -  спектрофотометрия.

В результате сравнительного анализа действующей нормативной документации отмечено, что условия йодометрического титрования имеют различия по следующим параметрам:

1. Среда проведения титрования:  чаще всего анализируемый образец растворяют в спирте и подкисляют 0,01М раствором хлористоводородной кислоты, реже  - растворяют  непосредственно в 0,01М растворе хлористоводородной кислоты, в единичных случаях -  в 0,1М растворе гидроксида натрия с последующим добавлением разведенной серной кислоты.

2. Температурный режим проведения титрования:  обычно анализ проводят при комнатной температуре, но иногда  - с охлаждением реакционной смеси до 10^оС.

3. Способ фиксации точки эквивалентности: без индикатора до появления желтой окраски раствора, не исчезающей в течение 30 секунд, либо с использованием в качестве индикатора раствора крахмала до появления синей окраски, не исчезающей в течение 1-2минут.

С целью оценки значимости этих различий составлено порядка 10 методик, основанных на комбинации вышеуказанных  параметров. В результате экспериментальных исследований отобраны 3 варианта методики количественного определения:

1 - методика без охлаждения, растворитель -  спирт этиловый, подкисленный 0,01М раствором хлористоводородной  кислоты, титрование до желтого  окрашивания раствора, не исчезающего  в течение 30 секунд;

2 - без охлаждения, растворитель - 0,01М раствор хлористоводородной кислоты, окончание титрования – после появления желтого окрашивания раствора, не исчезающего в течение 30 секунд;

3  - аналогична методике 1, но для создания среды используется 0,005 М раствор серной кислоты.

 С целью сравнения проведена валидация отобранных методик, для чего поставлен трехуровневый эксперимент, по 3 опыта на каждом уровне. Диапазон измерения выбран в соответствии с рекомендациями ICH для субстанций и с учетом возможного варьирования навесок исследуемого вещества: 0,15г±20%. Полученные результаты и их метрологические характеристики приведены в таблицах 1и 2.

Таблица 1

Результаты количественного  определения анальгина в субстанции в условиях методик 1-3

 

Уровень диапазона	Методика  1			Методика 2			Методика 3
	Навеска, г	Объем титранта, мл	Найден-ное количество, %	Навеска, г	Объем титран-та, мл	Найденное количество, %	Навеска, г	Объем титран-та, мл	Найден-ное количество, %
Нижний	0,1198 0,1213 0,1201	6,76 6,86 6,80	99,01 99,23 99,34	0,1221 0,1215 0,1187	6,92 6,86 6,72	99,44 99,06 99,33	0,1189 0,1222 0,1187	6,72 6,92 6,70	99,16 99,36 99,04
Среднее значение уровня	0,1204	6,81	99,19	0,1208	6,83	99,28	0,1199	6,78	99,19
Средний	0,1460 0,1490 0,1509	8,24 8,42 8,50	99,02 99,15 98,83	0,1489 0,1511 0,1500	8,42 8,54 8,50	99,22 99,17 99,43	0,1478 0,1525 0,1496	8,36 8,62 8,46	99,24 99,18 99,22
Среднее значение уровня	0,1486	8,39	99,0	0,1500	8,49	99,27	0,1500	8,48	99,21
Верхний	0,1789 0,1801 0,1815	10,12 10,18 10,28	99,25 99,20 99,38	0,1822 0,1801 0,1798	10,28 10,20 10,18	98,99 99,40 99,34	0,1805 0,1779 0,1811	10,20 10,02 10,24	99,15 98,82 99,21
Среднее значение уровня	0,1802	10,19	99,28	0,1807	10,22	99,24	0,1798	10,15	99,06

  

Таблица 2

Метрологические характеристики результатов количественного йодометрического определения анальгина в субстанции

Уровень	Метрологические характеристики
	Xср,%	S2	S	Sxср	Sr	±Dx	±Dxср	±ε	±εср
Методика 1
Нижний	99,19	0,29	0,17	0,10	0,17	0,74	0,43	0,74	0,43
Средний	99.0	0,03	0,16	0,09	0,16	0,69	0,40	0,70	0,40
Верхний	99.28	0,01	0,09	0,05	0,09	0,39	0,22	0,39	0,22
Диапазон измерения	99,16	0,02	0,13	0,04	0,13	0,30	0,10	0,30	0,10
Методика 2
Нижний	99,28	0,04	0,19	0,11	0,19	0,83	0,48	0,84	0,48
Средний	99,27	0,02	0,14	0,08	0,14	0,59	0,34	0,59	0,34
Верхний	99,24	0,05	0,22	0,13	0,22	0,94	0,54	0,94	0,54
Диапазон измерения	99,26	0,03	0,16	0,05	0,16	0,38	0,13	0,38	0,13
Методика 3
Нижний	99,19	0,03	0,16	0,09	0,16	0,70	0,40	0,70	0,41
Средний	99,21	0,00	0,03	0,02	0,03	0,15	0,09	0,15	0,09
Верхний	99,06	0,04	0,21	0,12	0,21	0,89	0,52	0,90	0,52
Диапазон измерения	99,15	0,02	0,13	0,04	0,13	0,31	0,10	0,32	0,11

 

Полученные результаты эксперимента были проверены на однородность с помощью критерия Qi, при этом установлено, что они не отягощены грубой погрешностью: значения Q во всех случаях оказались меньше табличного (Q_9;95%=0,46)

Все рассматриваемые  методики по сопоставимости результатов (прецизионности) и дисперсности практически  не различаются.

Зависимость между навеской исследуемого образца и объемом  использованного титранта в диапазоне  измерения во всех случаях оценивалась с   помощью непарного коэффициента корреляции (r).  Во всех трех случаях он был более 0,99 (r₁=0,999976, r₂=0,99999 , r₃=0,999996). Согласно ГФ XI зависимость считается линейной, если r ≥ 0,98, этому критерию полностью соответствуют все три исследованные методики.

Уравнения зависимости  между навеской субстанции и объемом  титранта имеют следующий вид:

Y₁=56,693x-0,0263

Y₄=56,523x+0,0076

Y₈=56,316x+0,0287

При построении линии  тренда для каждой из методик (рисунки 5-7) по точкам, соответствующим средним значениям результатов, полученных на трех уровнях диапазона, и продлении ее до пересечения осей координат установлено, что линия тренда проходит через начало координат, что свидетельствует об отсутствии систематических погрешностей в методиках.

 

Рис.5. Зависимость объема титранта от навески анальгина для  методики 1

 

Рис.6. Зависимость объема титранта от навески анальгина для методики 2

Рис. 7. Зависимость объема титранта от навески анальгина для  методики 3

Для выбора оптимальной  методики провели сравнение их по воспроизводимости (коэффициент Фишера) и средним результатам (критерий Стьюдента). Результаты представлены в таблице 3.

Таблица 3

Сравнение методик количественного  определения анальгина титриметрическим методом с помощью коэффициента Фишера и критерия Стьюдента

Методики	Коэффициент Фишера (F99%,8,8 = 6,03)	Критерий Стьюдента (t95%,8 = 2,36)
1/2	1,5	1,34
1/3	S22 =S23	0,15
2/3	1,5	1,47

Полученные значения коэффициентов Фишера и критериев  Стьюдента меньше табличных значений, то есть методики дают равнозначные результаты и могут считаться гармонизированными.