Характеристика нейроиммунного взаимодействия у больных ревматоидным артритом

 

На  правах рукописи

 

 

 

 

АБРАМОВ

Сергей Валерьевич

 

 

 

 

ХАРАКТЕРИСТИКА НЕЙРОИММУННОГО

ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ

У БОЛЬНЫХ РЕВМАТОИДНЫМ АРТРИТОМ

 

 

 

14.03.09 –  клиническая иммунология, аллергология

 

 

 

Автореферат

диссертации на соискание  ученой степени 

кандидата медицинских наук

 

 

 

 

 

НОВОСИБИРСК – 2012

Работа выполнена  в Федеральном государственном бюджетном  учреждении «Научно-исследовательский институт клинической иммунологии» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук

 

 

 

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор                         Кожевников Владимир Сергеевич

 

 

 

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор                         Шурлыгина Анна Вениаминовна

доктор  медицинских наук, профессор                   Гайдуль Константин Валентинович

 

 

 

Ведущая организация:

Федеральное государственное  бюджетное  учреждение «Научно-исследовательский институт психического здоровья» Сибирского отделения Российской академии

медицинских наук

 

 

 

Защита состоится  «30» марта 2012 г. в            часов на заседании диссертационного совета Д 001.001.01 в НИИ клинической иммунологии СО РАМН по адресу: 630099, г. Новосибирск, ул. Ядринцевская, 14.

 

 

 

 

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИ клинической  иммунологии СО РАМН

 

 

 

 

Автореферат разослан «___» _______________ 2012 г. 

 

 

 

 

 

 

Ученый секретарь

диссертационного совета

доктор медицинских наук            Колесникова Ольга Петровна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы исследования. Ревматоидный артрит (РА) - самое распространенное заболевание аутоиммунной природы.  РА страдают 1-2% взрослых независимо от расы и климатогеографических условий, 70% больных - женщины. Не только широкая распространенность, но и быстрая инвалидизация - в течение 5 лет почти 50% заболевших становятся инвалидами, обусловливает социальную значимость изучения  данного заболевания. (Нац. рук-во, 2010; Ревматология, 2006; Harris E.D.,1990; Gabriel S.E., 2001; Avouac J., e.a., 2006)    Известно, что ревматоидный артрит, являясь системным воспалительным заболеванием соединительной ткани с преимущественным поражением суставов по типу хронического прогрессирующего деструктивного полиартрита (Насонов Е.Л., 2007; Turesson C., e.a., 2007; Mjaavatten M.D., e.a., 2009), относится к истинным, то есть связанным с органическими изменениями, психосоматическим заболеваниям (Alexander G.E. 1992; Александер Ф., 2002; De Brouwer SJ, e.a., 2011). Тем не менее, двойственный - аутоиммунный и психосоматический  генез РА, практически не влияет на методы, схемы и принципы лечения данного заболевания (Ревматология. 2010; Scott D.L., 2007; Van der Helm-van Mil A.H.M. e.a., 2007). Современная терапия РА увеличивает продолжительность и повышает качество жизни, но не способна вылечить больного и обладает серьезными осложнениями, что свидетельствует о том, что  изучение РА требует новых подходов и как психосоматическая патология нуждается в комплексном исследовании нервной и иммунной систем больного.

В последние десятилетия, как в России, так и за рубежом  активно развивается научное направление, изучающее  механизмы, принципы, закономерности и значение для организма человека взаимодействия иммунной, эндокринной и нервной систем (Корнева Е.А., и др. 1999; 2009; Абрамов В.В., и др. 1996; 2004; 2009;  Девойно Л.В., и др. 2009; Elenkov Ilia J., e.a. 2000). Результаты этих исследований позволили обозначить взаимозависимый характер этого взаимодействия как интеграцию систем (Абрамов В.В., 1992; Абрамов В.В., и др.2004, 2009). Интеграционный характер взаимодействия, в свою очередь,  предполагал участие высшей нервной деятельности (ВНД) в указанном процессе. Далее была установлена роль ВНД в формировании иммунологической разнородности, существовании нейро-иммунных типов среди здоровых людей, выявленных на основе билатерально-асимметричной организации мозга, как фактора, детерминирующего особенности ВНД (Абрамова Т.Я., 2004).

В настоящее время известно, что люди с доминированием правого  полушария головного мозга достоверно чаще болеют аутоиммунными и аллергическими заболеваниями (Geschwind N., Behan P.,1984). Дебют РА, его обострения и особенности клинического течения также связывают с межполушарными взаимоотношениями, состоянием нейроэндокринной и вегетативной систем (Абрамова Т.Я., 1995; Лещинская В.В., 2007; Труфакин С.В., 2007; Paliienko I., 2001; Doria A., e.a. 2005, 2006; Сalcaqni E., Elenkov I., 2006; Shahabi S., 2006).

Считается доказанным ведущее значение иммунных расстройств  в развитии РА. Известно, что нарушения функций иммунокомпетентных клеток, в частности, дисбаланс T1/T2 популяций и формирование клеточных иммунных реакций являются одной из основных причин развития ревматоидного артрита (Doria A., 2006; Moudgil KD, e.a., 2011; Herman S, e.a. 2011; Munoz-Suano A, e.a. 2011; Karonitsch T, e.a. 2011). Вместе с тем, именно «неврологический» компонент  этого психосоматического заболевания, а также связь между функциональным состоянием нервной системы и основного патогенетического звена аутоиммунного воспаления (на уровне баланса T – клеток первого и второго типа) изучены в меньшей степени. 

Таким образом, двойственный – аутоиммунный и психосоматический  генез ревматоидного артрита, свидетельствующий о роли особенностей личности больного  в возникновении и течении хронического аутоиммунного воспаления, делает актуальными исследования, включающие нейроиммунологическую характеристику больных РА.

Цель  исследования: Определить фенотипические, функциональные и генетические параметры иммунокомпетентных клеток и изучить характер взаимодействия иммунной и нервной систем больных ревматоидным артритом женщин, характеризующихся разными вариантами психонейроиммунных связей.

 

 

Задачи  исследования:

1. Определить фенотипические характеристики иммунокомпетентных клеток больных РА, характеризующихся разными вариантами психонейроиммунных связей (CD4⁺,СВ8⁺(CD45RO⁺/ ^-, СD45RA⁺/^-),  экспрессию активационных маркеров).

2. Изучить функциональные свойства иммунокомпетентных клеток периферической крови у больных РА с разными вариантами психонейроиммунных связей (пролиферация, апоптоз, продукция цитокинов 1-го и 2-го типа).

3. Установить длину теломерных районов ДНК иммунокомпетентных клеток периферической крови больных РА с разными вариантами психонейроиммунного взаимодействия.

4. Выявить взаимосвязи фенотипических, функциональных и генетических параметров иммунокомпетентных клеток в условиях нарушений Т–клеточного звена иммунной системы у больных РА с учетом психонейроиммунной конституции.

Научная новизна. Впервые установлено, что патогенетическая разнородность ревматоидного артрита у женщин связана с функциональной межполушарной асимметрией мозга (ФМА). На основе выявления характера церебральной асимметрии определены три клинико-иммунологических варианта течения РА. Установлены, зависящие от ФМА, особенности дисбаланса Т - клеточного звена иммунной системы в группе больных РА: повышение CD4⁺ и дефицит CD8⁺ лимфоцитов в первой группе с доминантным левым полушарием и напротив, дефицит CD4⁺ и умеренная активация CD8⁺ лимфоцитов в третьей группе с преимущественно доминантным правым полушарием. Определены  имеющие промежуточное значение и не отличающиеся от контралатеральных групп больных параметры Т - звена во 2 группе пациентов с активностью обоих полушарий. Впервые исследованы особенности иммунного ответа больных РА с различной ФМА относительно здоровых людей с аналогичной доминантностью на уровне параметров пролиферации и дифференцировки Т - клеточного звена иммунной системы. Установлен дефицит субпопуляции CD8⁺CD45RO⁺ - лимфоцитов во всех группах больных независимо от ФМА, при этом, степень выраженности этого дефицита и функциональная активность CD8⁺ клеток в группах больных проявлялась в разной степени. Пациентов первой группы характеризовал дефицит Т - клеток 2 типа (CD4⁺/IL4⁺; CD8⁺/IL4⁺). Повышение у пациентов 1 группы содержания CD4⁺ - лимфоцитов, несущих ранние маркеры активации,  не сопровождалась адекватным увеличением экспрессии поздних маркеров активации, а также увеличением процессов пролиферации и дифференцировки и было сопряжено с дефицитом Тh. Для больных РА второй группы были характерны нарушения в процессах пролиферации и дифференцировки обеих Т - клеточных субпопуляций. При этом, у больных второй группы установлен избыток малодифференцированных и дефицит дифференцированных Т - лимфоцитов. Тем не менее, Т- лимфоциты пациентов 2 группы обладали значимым пролиферативным потенциалом, о чем свидетельствовала нормативная длина теломерных районов ДНК в иммунокомпетентных клетках. В третьей группе пациентов, с преимущественной доминантностью правого полушария, установлено значимое снижение Т-лимфоцитов 1 типа (CD4⁺/IFNγ⁺; CD8⁺/IFNγ⁺). Определены особенности вегетативного обеспечения висцеральных функций у больных РА, зависящие от характера ФМА и определяющие in vitro  «чувствительность» МНК больных к ацетилхолину и адреналину на уровне параметров пролиферации и апоптоза, а также дифференцировки Т- клеток первого и второго типа  в общей группе больных. Впервые установлен различный эффект терапии обострения РА у больных с различной ФМА (по критерию DAS28). В частности, хороший эффект терапии был выявлен в 3 группе с преимущественной доминантностью правого полушария. Удовлетворительный во второй, с активностью обоих полушарий и неудовлетворительный в первой группе больных РА с доминирующим по четырем парным функциям левым полушарием.

Теоретическая значимость и практическая ценность работы. 

Теоретическая значимость работы заключается в расширении знаний о  патогенетической роли нейроиммунного взаимодействия и механизмах его реализации у больных ревматоидным артритом. Полученные данные вносят вклад в исследование иммунопатологического процесса в рамках нейроиммунологии и ревматологии.

Практическая ценность работы заключается в обосновании необходимости комплексной оценки и учета состояния иммунной и нервной систем больных РА, как патологии, имеющей двойственный генез – аутоиммунный и психосоматический. Выявленные в работе закономерности создают условия для контроля над динамикой заболевания и эффективностью терапевтического воздействия, что, в целом, позволяет прогнозировать характер течения заболевания. Полученные данные служат основанием для разработки дифференцированных схем лечения, учитывающих роль индивидуальных характеристик нервной системы больного в течении РА.

Положения, выносимые на защиту:

1. У больных РА женщин нарушение субпопуляционной структуры и функциональной активности иммунокомпетентных клеток сопряжено со снижением функциональной активности нервной системы на уровне высшей нервной деятельности (память, способность к обучению), типологических свойств нервной системы (силы нервных процессов, силы возбуждения) и вегетативной нервной системы (на уровне нейровегетативной и гуморально-метаболической составляющей).
2. У больных РА функциональная межполушарная асимметрия мозга связана с патогенетической разнородностью заболевания, а также вариантами клинических проявлений и эффективностью лечения.
3. Вегетативная нервная система опосредует зависящее от ФМА взаимодействие нервной и иммунной систем у больных РА.

Апробация материалов диссертации. Основные положения диссертации доложены и обсуждены: 1. на семинаре лаборатории нейроиммунологии НИИ КИ СО РАМН (Новосибирск, октябрь 2008); 2. на 28 (LI) СЕССИИ ОБЩЕГО СОБРАНИЯ СИБИРСКОГО ОТДЕЛЕНИЯ РОССИЙСКОЙ АКАДЕМИИ МЕДИЦИНСКИХ НАУК (Новосибирск, 16 декабря 2008); 3. на Всероссийской конференции с международным участием «Современные направления исследований функциональной межполушарной асимметрии и пластичности мозга» (Москва, 2-3 декабря 2009); 4. на семинаре ИКИ СО РАМН (Новосибирск, май 2010);   5. на Всероссийской научной конференции "Молекулярно-генетические основы функционирования цитокиновой сети в норме и при патологии" (Новосибирск 15-17 сентября, 2010); 6. на 8 отчетной конференции НИИ КИ СО РАМН «Иммунопатогенез и иммунотерапия основных заболеваний человека: от эксперимента к клинике» (Новосибирск, июнь 2011).

Публикации.  По материалам исследований опубликовано 14 печатных работ, в том числе 3 статьи в журналах, рекомендованных ВАК для публикации результатов работ соискателей ученой степени кандидата наук.

Объем и структура  диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, глав собственных исследований, обсуждения полученных результатов, заключения и выводов. Материал изложен на 150 страницах машинописного текста, включающего 39 таблиц и 14 рисунков. Прилагаемая библиография содержит ссылки на 339 литературных источника, в том числе 257 зарубежных.

 

МАТЕРИАЛЫ И  МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объекты исследования. В обследование было включено 95 женщин больных РА (средний возраст 48±1,2; min 18, max 69 лет). Все пациенты проходили лечение и наблюдались врачами отделения ревматологии клиники УРАМН НИИ КИ СО РАМН г Новосибирска. Диагноз РА был выставлен и верифицирован в соответствии с критериями ACR 1987 г, а с 2008 года, в соответствии с переработанным проектом классификации РА 2007 г. Клиническое течение РА оценивалось по активности болезни, рентгенологической стадии и функциональному классу. В группе сравнения было обследовано 123 условно здоровые женщины, не имевших аутоиммунных, аллергических и острых воспалительных заболеваний, в возрасте от 19 до 69 лет (средний возраст 43,3±0,9).

Иммунологические  методы

Определение субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови проводилось методом проточной цитофлюориметрии с помощью аналитической системы FACS Calibur фирмы Becton Discinson (США) согласно инструкции по эксплуатации. Применялись моноклональные антитела против CD3; CD4; CD8; CD16; CD19; CD20; HLA-DR фирм «МедБиоСпектр» и «Сорбент» (Москва), а также антитела CD45RO⁺ и CD45RA⁺ фирмы Becton Discinson (США) в соответствии с описаниями, представленными в инструкциях производителя антител.

 Клеточные эффекторные функции определяли в тесте гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) по интенсивности продукции фактора торможения миграции и фактора торможения распластывания в ответ на митогенную стимуляцию (ФГА) мононуклеаров (МНК) in vitro. (Кожевников В.С., 1998).

Определение активности моноцитов (ПАМ) и нейтрофилов (ПАН) по продукции эффекторных молекул. Принцип метода: выделенные клетки инкубируются с опсонизированным зимозаном, который является стимулятором процессов in vitro. В результате такого взаимодействия происходит кислородный взрыв – выделение пероксидов. Вводится ортофенилдиамин (ОФД), происходит его окисление вследствие разложения перекиси водорода. Оценивали по интенсивности окрашивания пробы на анализаторе «Multiskan MS» (Кожевников В.С.1998).