Переливание крови

1. В исследуемых эритроцитах  не обнаружены агглютиногены  А и В, исследуемая сыворотка  агглютинирует стандартные эритроциты группы А(II) и В(III), что указывает на наличие в ней агглютининов α и β – это Оαβ(I) группа крови.

2. В исследуемых эритроцитах  выявлен агглютиноген А, исследуемая  сыворотка содержит агглютинирующие  эритроциты группы В(III), в сыворотке обследуемого обнаружен агглютинин β – это Аβ(II) группа.

3. В исследуемых эритроцитах выявлен агглютиноген В, исследуемая сыворотка содержит агглютинирующие эритроциты группы А(II), что указывает на присутствие в ней агглютинина α – это В(III) группа.

4. Реакция со стандартными сыворотками находит в эритроцитах исследуемой крови агглютиногены А и В, в сыворотке исследуемой крови агглютинации со стандартными эритроцитами нет – это АВ(IV) группа крови.

 

Оценка результатов:

Наличие агглютинации при реакции со стандартными сыворотками				Наличие агглютинации при реакции со стандартными эритроцитами			Группы крови
О(I)	А(II)	В(III)	АВ(IV)	О(I)	А(II)	В(III)
-	-	-	-	-	+	+	Оαβ(I)
+	-	+	-	-	-	+	Аβ(II)
+	+	-	-	-	+	-	Вα(III)
+	+	+	-	-	-	-	АВ0(IV

 

III. Определение группы крови моноклональными антителами (цоликлонами)

Цоликлоны анти А и анти В (антитела) представляют собой разведенную асептическую жидкость мышей-носителей соответствующей опухоли гибридомы, в которой содержатся специфические иммуноглобулины класса М, направленные против группоспецифических антигенов А или В человека.

Цоликлоны не содержат антител иной специфичности и поэтому не вызывают неспецифической полиагглютинации эритроцитов, определение групы крови как обычно на планшетах в течение 3 минут. Для получения моноклональных антител используется гибридомная технология. Гибридома – это клеточный гибрид, образованный путем слияния клетки опухоли костного мозга (миеломы) с иммунным лимфоцитом, синтезирующим специфические моноклональные антитела. Гибридома приобретает свойства обоих «родителей»: способность к неограниченному росту, характерную для опухолевой клетки, и возможность синтезировать антитела, присущую иммунному лимфоциту; наблюдают на планшете в течение 2,5 минут.

 

Ошибки при определении групповой принадлежности крови

и меры их предупреждения

Несоблюдение вышеизложенных правил может привести к ошибочным заключениям о групповой принадлежности исследуемой крови. отступлением от правил могут явиться: ошибочный порядок расположения стандартных сывороток или эритроцитов в штативах, ошибочный порядок их нанесения на пластину, неправильное соотношение количества сыворотки и эритроцитов, несоблюдение времени и температурного режима, необходимого для проведения реакции (5 минут, комнатная температура), недостаточное освещение, неиспользование контрольной реакции с сывороткой группы АВ(IV)о, загрязнение или применение мокрых пипеток, пластинок, палочек, а также использование недоброкачественных стандартов, например, сыворотки с истекшим сроком годности (недостаточно активной), загрязненной или частично высохшей сыворотки, которая может вызвать неспецифическую реакцию агглютинации и т.д. Ошибки, возникающие при определении групповой принадлежности крови, бывают двух родов.

Ошибки первого рода возникают в том случае, если реакция агглютинации не учитывается там, где она фактически есть или должна быть Это может произойти:

1) когда агглютинация начинается  поздно или бывает слабо выражена  при низкой активности стандартной  сыворотки, или оттого, что эритроциты  исследуемого лица обладают слабой специфичностью. При одновременном наличии этих двух причин агглютинация может совсем не появиться; например, если малоактивная сыворотка группы В(III)α не даст агглютинации с эритроцитами группы А(II), если специфичность последних низкая, например, подгруппа А2.

Во избежание этой ошибки необходимо наблюдать за ходом реакции не более 5 минут и особенно внимательно за теми каплями, в которых еще не наступила агглютинация, а также работать только с активными сыворотками, агглютинирующая способность которых проверена, соответствует требованиям инструкции и в пределах срока ее годности;

2) при избытке крови, если взята  слишком большая капля.

Во избежание этой ошибки следует соблюдать соотношение объема исследуемой крови и стандартной сыворотки (или стандартных эритроцитов и исследуемой сыворотки) приблизительно 1:10;

3) при высокой температуре (выше +25°С) окружающего воздуха, например, в жаркую погоду.

Во избежание этой ошибки пластинку, на которой определяется группа крови, следует охладить.

Ошибки второго рода возникают в том случае, если реакция агглютинации учитывается там, где ее нет или не должно быть. Это может произойти:

1) когда эритроциты испытуемой  крови складываются в «монетные  столбики», которые невооруженным  глазом можно принять за агглютинаты.

Во избежание этой ошибки необходимо добавление изотонического раствора хлорида натрия с последующим покачиванием пластинки, что, как правило, устраняет «монетные столбики»;

2) когда исследуемые эритроциты  дают феномен ауто- или панагглютинации.

Во избежание этой ошибки необходимо не допускать определения групп крови ниже +15°С ти обязательно использовать контрольные сыворотки группы АВ(IV)о;

3) при использовании недоброкачественной  сыворотки, дающей неспецифическую агглютинацию.

Во избежание этой ошибки следует просматривать ампулы (флаконы) со стандартной сывороткой и не использовать ее, если в ней имеются помутнение или признаки высыхания;

4) при использовании инфицированного  образца крови больного (взята  в грязную пробирку).

Во избежание этой ошибки необходимо, соответственно, использовать чистую посуду;

5) когда пластину со смесью эритроцитов и сыворотки не покачивают. В этом случае эритроциты, оседая на дно, могут образовывать отдельные скопления, симулирующие агглютинацию.

Во избежание этой ошибки следует периодически покачивать пластинку, на которой проводится исследование.

Однако и при правильной оценке реакции в каждой отдельной капле можно сделать неправильное заключение о групповой принадлежности, если спутать порядок расположения стандартов в штативе или на пластинке. Поэтому каждый раз в начале работы по определению групповой принадлежности следует тщательно проверять расположение в штативе пробирок со стандартными эритроцитами, а также всех ампул (флаконов) с сывороткой, их групповую принадлежность, титр, номер серии и дату годности.

Во всех случаях нечеткого или сомнительного результата необходимо повторное определение группы крови при помощи стандартных сывороток других серий. Если результаты также остаются неясными, а определение проводилось только при помощи стандартных сывороток, то следует определить группу крови также и перекрестным способом.

Другие особенности. Определение группы крови АВО и резус-принадлежности может быть затруднено у больных в связи с изменением свойств эритроцитов при различных патологических состояниях. Это может выразится в повышенной агглютинабельности эритроцитов, наблюдаемой у больных с циррозом печени, при ожогах, сепсисе. Агглютинабельность может быть столь высока, что эритроциты склеиваются в собственной сыворотке и физиологическом растворе. При лейкозах наблюдается снижение агглютинабельности эритроцитов, в результате чего значительной их количество остается не вовлеченным в агглютинацию даже при использовании высокоактивных стандартных реагентов (ложная кровяная химера). У некоторых новорожденных, в отличие от взрослых людей, антигены А и В на эритроцитах выражены слабо, а соответствующие агглютинины в сыворотке крови отсутствуют.

Общая характеристика системы Rh-Hr

После АВО важнейшей в практике переливания крови является антигенная система Rh-Hr, В 1940 г. Ландштайнер и Винер у обезьян Macacus rhesus обнаружили новый антиген в эритроцитах и назвали его резус-фактором (Rh). Он присутствует в крови 85% людей, у 15% людей его нет. Система антигенов резус-фактора представлена 6 основными антигенами в различных сочетаниях, образующих 27 групп системы резус.

Резус-фактор передается по наследству. При отсутствии его у родителей резус-фактор не может быть и у детей. Наличие резус-агглютиногена выявляется уже у 3-4 месячного эмбриона и у новорожденных кровь имеет вполне четкую резус-принадлежность, которая является вполне постоянной в течение всей жизни. В дальнейшем выяснилось, что представление о резус-факторе не может быть ограничено только одним агглютиногеном Rh. Последний тесно связан с другим агглютиногеном, обозначаемым как «Hr» и составляет с ним общую систему «Rh-Hr», включающую три разновидности Rh агглютиногена – Rhо, rh', rh'' и три разновидности Hr агглютиногена – Hro, hr', hr'' (номенклатура Винера, 1942 г.).

Фишер и Рейс (1944) предложили более простые буквенные обозначения, где агглютиноген Rh обозначается прописными буквами DCE, а агглютиногены Hr – dce. В России принята двойная (аналогично систем АВО) номенклатура обозначения принадлежности системы резус:

Rhо(D)-Hro(d)

rh'(C)- hr'(c)

rh''(E)-hr''(e),

причем антиген d серологически не выявляется, его существование предполагается теоретически.

Эритроциты каждого человека содержат комплекс антигенов резус, из которых наиболее доступны для определения антигена Rhо(D), rh'(C), rh''(E). Они могут находится в эритроцитах человека вместе или порознь, образуя различные сочетания, образуя 8 основных групп системы резус:

 

Резус- положительные Rh+		Резус-отрицательные Rh-
RH'o''(CDE)		Rh-(cde)
RH'o''(CDe)	86%	rh'(Cde)	14%
RH''o(cDE)		rh''(cdE)
RHo(cDe)		rh'rh''(CdE)

 

Наиболее ангигенным и наиболее частой причиной изосерологических конфликтов при гемотрансфузиях и беременности является антиген D(Rho), менее антигенным – С(rh'), затем Е(rh''); наиболее слабым антигеном является e (hr''). Случаев иммунизации по антигену d(Hr0) еще не обнаружено.

Практически при гемотрансфузиях пользуются весьма упрощенным и условным делением доноров и реципиентов на группы крови, которое, однако, позволяет с минимальным риском осложнений осуществлять переливание крови. Когда речь идет о реципиентах, прежде всего следует учесть, что чаще всего вызывает иммунизацию при гемотрансфузиях антиген D(Rho), поэтому при переливании крови необходимо предупредить введение этого антигена с кровью донора реципиенту, у которого антигена D нет. В связи с этим среди реципиентов можно выделить лишь две группы крови: резус-положительную (R+), к которой относится кровь всех лиц, имеющих в эритроцитах антиген D, и резус-отрицательную (R-), к которой относится кровь всех лиц, не имеющих в эритроцитах антигена D. При таком принципе выделения групп крови наличия у реципиента других антигенов системы Rh-Hr не учитывается.

Среди европейцев 85% имеют резус-положительную кровь и 15% резус-отрицательную.

При таком разделении на группы, переливая резус-положительную кровь реципиентам с резус-положительной кровью, а резус-отрицательную кровь реципиентам с резус-отрицательной кровью, можно предупредить иммунизацию по антигену D и избежать возможности тяжелых посттрансфузионных осложнений.