2.2. Методы исследования.
По метод В.Н. Шабалина и С.Н. Шатохина
на обезжиренное предметное стекло, наносим
каплю плазмы крови в объеме 50мкл .Каплю
высушивают при комнатной температуре
и при минимальной подвижности окружающего
воздуха. Капля высушивалась в течение
24 часов. Для более детального изучения
фации проводилось сканирование ( hpScanjet
2400) и изучением полученных изображений
на компьютере в системе ACDSee 5.0 при частоте
монитора не менее 85 Гц, области экрана
не менее чем 1024 на 768 точек и цветовой
палитре True Color ( 32 бита).
Для описании фасции предлагается следующие
параметры:
- Наличие
четкости зон в фасции: краевой, промежуточной
и центральных зон;
Рис.
5 Наличие трех зон: краевой, промежуточной,
центральной.
- Характер
линий растрескивания: форма, симметричность,
четкость, густота;
Рис.
6 Аркадное растрескивание.
- Наличие
и характер аморфных областей: мелкие,
средние, крупные;
Рис.
7 Аморфная область в центральной зоне.
- Наличие,
расположение, размеры и количество конкреций;
Рис.
8 Конкреции.
- Наличие,
расположение и характер патологических
структур ( структуры типа листа, жгута,
бляшкообразные структуры, штриховые
трещины).
3. Результаты исследования
и их обсуждение
3.1 Особенности характера
формирования кристаллографической картины
венозной крови здоровых детей.
Тезиограмма крови здоровых детей характеризовались
наличием трех зон: краевой, промежуточной
и центральной. Фация характеризовалась
высокой густотой растрескивания. Краевая
зона является прозрачным кольцом органических
веществ, преимущественно белкового происхождения
и также отмечается наличие большого количества
округлых конкреции правильной формы.
Центральная зона представлена в виде
пленки, содержащей липиды, минеральные
вещества, и небольшое количество белков.
Промежуточная зона представлена преимущественно
белками и нормальными белковыми комплексами
с минеральными веществами. Конкреции
располагаются на периферии и представляют
собой округлые ровные образования.
Рис. 9 Тезиограмма плазмы крови здорового
ребенка.
3.2 Типичная тезиографическая картина
плазмы крови детей с кардиомиопатиями.
При изучение тезиографической картины
плазмы крови детей с кардиопатиями характеризовались
наличием: полной или частичной утраты
краевой зоны, характеристики центральной
зоны, симметричность картины, густота
трещин, порядок их ветвления, аморфные
области, количество конкреций, их размеры
и структуры виде «жгута». По литературным
данным данная структура указывает на
гипоксическое состояние клеток.
Тезиограмма плазмы крови ребенка с кардиопатией,
развившейся в результате гипоксии представляла
собой следующую картину: были различимы
краевая, промежуточная и центральная
зоны. Промежуточная зона представлена
аморфной полосой, что может свидетельствовать
о физико-химических изменениях макромолекул
плазмы крови, в основном белков, приводящих
к снижению их онкотической активности,
а также к появлению и увеличению патологических
связей белка с минеральным компонентом
плазмы, что приводит к снижению количества
свободных солей. Фация характеризуется
высокой густотой растрескивания. Однако
радиальная структура нарушена, что говорит
об изменении характера взаимодействия
между белковыми компонентами плазмы
крови, что может происходить либо в результате
их неферментативного гликозилирования,
либо вследствие окислительной модификации
белков. В краевой и промежуточной областях
присутствуют мелкие округлые конкреции.
Рис.10 Тезиограмма плазмы крови ребенка
с кардиомиопатией, развившейся в результате
гипоксии.
3.3Типичная тезиограмма плазмы крови
ребенка с кардиоцеребральным синдромом,
развившимся в результате гипоксии.
На данной
тезиограмме представлена следующая картина:
четко различимы две зоны- краевая и центральная.
Промежуточная зона представлена слабо.
Центральная зона представляет собой
обширную аморфную область, не содержащую
конкреций. Периферическая зона содержит
большое количество конкреций округлой
и палочковидной формы. Растрескивание
носит несимметричный характер. Можно
отметить дисбаланс между белковой и липидной
составляющими плазмы крови, а также изменение
осмолярности и онкотической активности
компонентов плазмы крови.
Рис. 11 Тезиограмма плазмы крови ребенка
с кардиоцеребральным синдромом, развившимся
в результате гипоксии.
3.4 Типичная тезиографическая
картина плазмы крови новорожденных с
кардиопатией после терапии L-карнитином.
Федосеев. На данной тезиограмме плазмы
крови пациента после лечения L-карнитином,
мы наблюдаем следующую картину: представлены
все три зоны. Фация характеризуется высокой
густотой растрескивания, радиальный
рисунок растрескивания сохранен. Краевая
зона представлена в виде прозрачного
кольца органических веществ, преимущественно
белкового происхождения и также отмечается
наличие большого количества конкреции.
Центральная зона представлена в виде
пленки, содержащей липиды, минеральные
вещества, и небольшое количество белков.
Промежуточная зона представлена преимущественно
белками и нормальными белковыми комплексами
с минеральными веществами.
На данном примере мы отчетливо видим
улучшение общей картины метаболических
процессов пациента после лечения L-карнитином.
Рис.12 Тезиограмма плазмы крови новорожденного
с кардиопатией, развившейся в результате
гипоксии. После лечения L-карнитином.
3.5 Типичная тезиографическая картина
плазмы крови новорожденных с кардиоцеребральным
синдромом после терапии L-карнитином.
После
лечения L-карнитином вид фации значительно
изменился. Промежуточная зона исчезла,
центральная зона представлена в виде
обширной аморфной области. Присутствует
растрескивание краевой зоны высокой
густоты. Также в краевой зоне представлено
большое количество округлых маленьких
конкреций. Следуя этой тезиографической
картине мы предполагаем, что в этой плазме
отмечаются системные и подсистемные
нарушения структуры капли, свидетельствующие
об изменении характера взаимодействия
белковых и липидных компонентов плазмы
крови. Также нужно отметить, что у этих
групп новорожденных отмечается дисбаланс
между белковой и липидной составляющими
плазмы крови, а также изменение осмолярности
и онкотической активности компонентов
плазмы пуповинной крови.
Рис. 13 Тезиограмма плазмы крови ребенка
с кардиоцеребрадьным синдромом, развившимся
в результате гипоксии. После лечения
L-карнитином
Исходя
из полученных результатов можно вынести
следущее объяснение тезиографической
картины плазмы крови детей с кардиомиопатиями
и цереброкардиальным синдромом до и после
терапии Картаном.
На тезиограммах
плазмы крови детей с кардиомиопатиями
мы отчетливо видим изменения белково-липидных
взаимодействий и изменение солевого
компонента.
В условиях ишемии при прекращении доставки
О2 к миокарду поисходит быстрое истощение
резерва О2, связанного с гемоглобином и миоглобином,
снижается уровень субстратов окисления
в тканях, повреждается структура мембран
митохондрий, снижается активность
ферментов последних. В результате этого
в митохондриях нарушаются процессы окислительного
фосфорилирования, а также транспорт АТФ
из митохондрий к местам ее использования.
При длительной и тяжелой гипоксии происходит
переход метаболизма на анаэробный путь
с увеличением утилизации различных субстратов
и прекращение синтетических процессов,
о чем свидетельствует интенсификация
перекисного окисления липидов. Однако
при активации гликолиза вследствие накопления
недоокисленных продуктов образуется
лактат и повышается концентрация ионов
водорода. В аэробных условиях продукты
метаболизма обычно используются в митохондриях,
однако при выключении функции этих клеточных
органелл в условиях ишемии происходит
накопление недоокисленных продуктов.
Таким образом, происходит сдвиг рН клетки
в кислую сторону. Развитие жесткого ацидоза
(рН<6,6), который отмечается при ишемии
миокарда, вызывает высвобождение катехоламинов,
способствующее на фоне гипоксии возникновению
так называемого пероксидного стресса
(накопление Н2О2, стимуляция перекисного окисления
липидов). Также выброс катехоламинов
провоцирует увеличение содержания свободных
жирных кислот в крови.
В крови
новорожденных, рожденных в асфиксии или
же испытывающих гипоксию, отмечалось
повышения уровня свободных жирных кислот.
Реультатом их неполного окисления являлось
увеличение концентрации малонового диальдегида
и диенового конъюгата. В результате гипоксии
происходит активация системы кальпаина
(кальций-зависимых протеаз), что приводит
к выходу из кардиомиоцитов белка, связывающего
жирные кислоты и , следовательно, нарушению
их транспорта.
Также наблюдается
нарушения транспорта липидов.У новорожденных,
испытывающих хроническую гипоксию плода,
дислипопротеинемия выявляется в первые
месяцы после рождения. Гиполипопротеинемия
новорожденных характеризуется отсутствием
хиломикронов и значительным уменьшением
концентрации липопротеинов очень низкой
плотности. Основным классом липопротеинов
в крови новорожденных являются липопротеины
высокой плотности. Липопротеины очень
низкой плотности содержат больше белка
и меньше триглицеридов, чем у взрослых.
В липопротеинах низкой плотности выше
содержание белка и свободного холестерина.
Липопротеины высокой плотности по сравнению
с материнскими отличаются большим содержанием
фосфолипидов, свободного холестерина
и меньшим - этерифицированного холестерина
и триглицеридов.
Эти
изменения липидного обмена хорошо
прослеживаются на тезиограмме.
Центральная зона, содержащая липиды и
небольшое количество белка у детей с
кардиомиопатиями подвержена хаотическому
растрескиванию, содержит небольшое количество
конкреций.
Нарушение энергетического обмена клеток
приводит к снижению анаболизма протеинов.
Происходит явное снижение уровня аминокислот
тирозина и гистидина, активно участвующих
в синтезе белка и увеличение содержания
аминокислот, участвующих в энергетическом
обмене - аспарагиновой и глутаминовой.
Данные изменения методом клиновидной
дегидратации можно выявить обратив внимание
на характер растрескивания фации. Фация
характеризуется высокой густотой растрескивания.
Однако радиальная структура нарушена,
что говорит об изменении характера взаимодействия
между белковыми компонентами плазмы
крови, что может происходить либо в результате
их неферментативного гликозилирования,
либо вследствие окислительной модификации
белков.
Нарушение энергетического обмена клеток
приводит к массивному изменению электролитного
состава крови.
Для детей с ХВУГ или асфиксией характерны
отличия электролитного состава крови
от здоровых новорожденных. Так, у детей,
родившихся в асфиксии обнаруживается
ранняя гипокальциемия. Для новорожденных
характерны волнообразные увеличения
уровня кальцитотонина и высокая концентрация
паратгормона. Таким образом, в основе
ранней неонатальной гипокальциемии лежит
усиление физиологических сдвигов в метаболизме Са+2, обусловленное действием различных
регуляторных механизмов.
Наряду с изменением концентрации кальция
обнаруживается гипонатриемия.
Содержание натрия в организме регулируют
минералокортикоиды коры надпочечников,
антидиуретический гормон, атриопептин
и некоторые другие факторы.
В первые сутки жизни недоношенные
и дети с асфиксией более интенсивно теряют
натрий, что может привести к гипонатриемии.
У новорожденных снижена реакция канальцев
почек на альдостерон, т.е. у них своеобразный
псевдогипоальдостеронизм. Чем более
интенсивен стресс у новорожденного, тяжелее
асфиксия, тем выше у него уровень в крови
антидиуретического гормона. И во всех
случаях это приводит к гипонатриемии
в сочетании с гиперкалиемией.
У детей, перенесших ХВУГ, отмечается
уровня магния в крови: наиболее высокий
уровень магния с понижением на первые
сутки и постепенным повышением до начальных
значений на пятые сутки.
Аналогичная ситуация наблюдается и
с динамикой уровня фосфора у новорожденных
с ХВУГ или асфиксией.
Содержание меди увеличивается начиная
с первых суток жизни в течении всего периода
адаптации, причем наиболее высокие показатели
характерны для детей с ХВУГ.
У новорожденных, перенесших гипоксию,
уровень селена в 2 раза ниже, чем у здоровых
детей.
На тезиограмме отчетливо видны изменения
взаимосвязи белкового и солевого компонентов
на примере конкреций. Конкреции присутствуют
как в промежуточной, так и в краевой зонах.
Имеют небольшой размер и округлую форму.
После терапии Картаном тезиографическая
картина плазмы крови детей с кардиомиопатиями
явно меняется. Поскольку у детей с кардиомиопатиями
в крови содержится высокий уровень жирных
кислот, то использование их в качестве
энергетического источника является эффективным.
Роль карнитина заключается в транспорте
длинноцепочечных жирных кислот в митохондрии
через их внутреннюю мембрану, в которых
происходит их β -окисление до ацетил-КоА
с последующей его утилизацией. Из митохондрий,
мембрана которых в обратном направлении
непроницаема для карнитина, транспорт
ацетил-КоА в цитоплазму осуществляется
с помощью цитрата, а поступающий в митохондрии
карнитин декарбоксилируется до β -метилхолина
с последующим удалением.
Показано,
что при использовании L-карнитина восстанавливается
содержание АТФ и креатинфосфата. Следовательно
нормализуется энергетический обмен тканей
и последующие компенсаторные механизмы
приходят к норме.
После терапии Картаном мы видим, что
тезиограммы детей с кардиомиопатиями
по своей картине приближаются к тезиограммам
здоровых детей. На тезиограмме представлены
три зоны. Фация характеризуется высокой
густотой растрескивания, радиальный
рисунок растрескивания сохранен. Краевая
зона представлена в виде прозрачного
кольца органических веществ, преимущественно
белкового происхождения и также отмечается
наличие большого количества конкреции.
Центральная зона представлена в виде
пленки, содержащей липиды, минеральные
вещества, и небольшое количество белков.
Промежуточная зона представлена преимущественно
белками и нормальными белковыми комплексами
с минеральными веществами.