Микрофлора почвы

2) прямым санитарно-бактериологическим  показателям эпидемической опасности  почвы — обнаружение возбудителей  кишечных инфекций (возбудители  кишечных инфекций, патогенные энтеробактерии, энтеровирусы);

3) почву оценивают  как чистую без ограничений  по санитарно-бактериологическим  показателям при отсутствии патогенных  бактерий и индексе санитарно-показательных  микроорганизмов до 10 клеток на 1 г почвы.[11]

О возможности загрязнения  почвы сальмонеллами свидетельствует  индекс санитарно-показательных организмов (БГКП и энтерококков) 10 и более  клеток в 1 г почвы.

Наличие кишечной палочки  в титрах 0,9 и ниже свидетельствует  о несомненном фекальном загрязнении  почвы, притом свежем. Одновременно могут  быть зарегистрированы низкие титры  Cl. perfringens, нитрификаторов. Однако следует иметь в виду, что в первое время после имевшего места органического загрязнения, нитрификаторов может быть мало — необходимо время, чтобы они успели размножиться.

В процессе самоочищения на разных этапах возникают различные  количественные соотношения этих показателей. Наиболее быстро отмирает кишечная палочка, поэтому при сравнительно высоких  ее титрах титры Cl. perfringens и нитрифицирующих бактерий низкие. Это показывает, что в почве интенсивно протекают процессы самоочищения как от патогенных микроорганизмов, так и от органического загрязнения.

Высокий титр (1,0 и  выше) кишечной палочки при низких титрах остальных 3 показателей характеризует  почву как свободную от возбудителей кишечных инфекций, но в которой  еще не закончились процессы распада  и минерализации органических веществ.

Высокие титры всех показателей свидетельствуют о  законченных процессах самоочищения и характеризуют почву как  чистую, свободную от патогенных энтеробактерии и органических загрязнений.[12]

 

2.1 Отбор проб и предварительная обработка почвенных образцов для анализа.

 

Основными объектами, территории которых подлежат контролю органов санитарного надзора  с применением санитарно-микробиологических методов исследования, требующими проведения ряда мероприятий по предотвращению загрязнения почвы, являются: детские  и лечебно-профилактические учреждения; сельские и неканализованные районы городских населенных пунктов; территории первого пояса зоны санитарной охраны источников хозяйственно-питьевого водоснабжения; зоны свалок; отвальные площадки; сельскохозяйственные поля, орошаемые водой из открытых водоемов, стоками животноводческих ферм; земледельческие поля орошения городскими и промышленными сточными водами.

Обязательным предварительным  этапом при санитарно-бактериологическом исследовании является санитарное обследование и составление паспорта обследуемого участка с сопроводительным талоном.

Паспорт обследуемого участка:

1. Номер участка.

2. Адрес участка  и его привязка к источнику  загрязнения.

3. Дата обследования.

4. Размер участка.

5. Название почв.

6. Рельеф.

7. Уровень залегания  грунтовых вод.

8. Растительный  покров территории.

9. Характеристика  источника загрязнения (характер  производства, используемое сырье,  мощность производства, объем газопылевых  выбросов, жидких и твердых отходов,  удаление от жилых зданий, игровых  площадок, мест водозабора и т.  д.).

10. Характер использования  участка (детская площадка, предприятие  и т. д.).

11. Сведения об  использовании участка в предыдущие  годы (мелиорация, применение средств  химизации и др.). Исполнитель,  должность. Личная подпись. Расшифровка  подписи.

На основании  результатов санитарного обследования территории и ее описания составляется схематический план земельного участка с нанесением источников загрязнения. Это позволяет правильно обосновать выбор точек отбора проб почвы.

На изучаемой  территории при наличии одного источника  загрязнения выделяют два участка 25 м2 каждый: один вблизи источника загрязнения (опытный), другой — вдали (контрольный). Контрольный выбирают с таким расчетом, чтобы он был заведомо незагрязненным и имел одинаковый почвенный состав с опытным.[13]

 

2.2 Отбор образцов почвы.

 

Пробы почвы отбираются на каждом из участков в его пяти точках по диагонали или по «конверту» (четыре точки по углам и одна в центре).

Если исследователя  интересуют последствия непосредственного  внесения химического вещества в  почву, то пробы отбираются поверхностно (0—1 см) стерильным инструментом (нож, шпатель) в количестве 0,3—0,5 кг в  одной точке.

Если изучается  воздействие химического вещества на микрофлору почвенного горизонта, то для отбора проб почвы пользуются следующей методикой. Каждая точка, в которой проводится отбор проб почвы, представляет собой центр выбранного для исследования 1 м2 территории. Здесь выкапывается шурф размером 0,3 х 0,3 м и глубиной 0,2 м. Поверхность одной из стенок шурфа очищают стерильным ножом. Затем из этой стенки вырезают почвенный образец, размер которого обусловлен заданной навеской. Так, если необходимо отобрать 200 г почвы, размер образца 20 см х 3 см х 3 см; 500 г — 20 см х 5 см х 30 см.

Для приготовления  среднего образца объемом 0,5 кг почву  всех образцов одного участка высыпают на стерильный плотный лист бумаги, тщательно перемешивают стерильным шпателем, отбрасывают камни и  прочие твердые предметы. Затем почву  распределяют на месте ровным тонким слоем в форме квадрата.

Диагоналями почву  делят на 4 треугольника. Почву из двух противоположных треугольников  отбрасывают, а оставшуюся вновь  перемешивают, опять распределяют тонким слоем и делят диагоналями  и так до тех пор, пока не останется  примерно 0,5 кг.

Перед посевом почву  диспергируют, т.е. почву с соблюдением условий стерильности просеивают через сито диаметром 3 мм. При просевании сито сверху покрывают стерильной бумагой.

Для учета почвенных  микроорганизмов и энтеровирусов достаточно навески от 1 до 10 г, для санитарно-показательных микроорганизмов от 1 до 30 г, для патогенных энтеро-бактерий (50—50,5 г). Первое разведение навески почвы (1 : 10) делают в стерильной посуде, добавляя стерильную водопроводную воду в соотношении 1 : 10 к весу почвы (например: 1 г воды, 10 г почвы — в 100 мл воды и т. п.).

Далее проводят предварительную  обработку почвы, целью которой  является извлечение клетки микроорганизмов  из почвенных агрегатов.

Основными приемами предварительной обработки почвы  являются:

1) 10-минутное вертикальное  встряхивание почвенной суспензии  первого разведения в пробирках  с резиновыми пробками — при  навеске почвы 1 г;

2) 3-минутная обработка  почвенной суспензии на механической  мешалке.

Почвенную суспензию, содержащую в 1 мл 0,1 г почвы, через 30 секунд после предварительной обработки (за это время оседают грубые минеральные  частицы) используют для приготовления  последовательно убывающих концентраций почвы. Для этого из первого разведения, находящегося во флаконе, с содержанием  почвы 0,1 гмл стерильной пипеткой отбирают 1 мл и переносят в пробирку с 9 мл стерильной водопроводной воды. При этом получают второе разведение, содержащее 0,01 гмл почвы. Повторяя эту операцию, доводят разведение почвы до 0,0001—0,00001 гмл.

Приготовленные  разведения используются для посева на различные питательные среды  с целью определения микробиологических показателей.

К методам определения  микробиологических показателей, характеризующих  фекальное загрязнение почвы, относятся  следующие:

1. Определение количества  бактерий группы кишечных палочек,  энтерококков, энтеровирусов.

2. Определение кишечных  палочек в почве титрационным методом.

3. Определение кишечных  палочек в почве методом мембранных  фильтров.

4. Прямой поверхностный  посев на агаризованные питательные среды для учета кишечных палочек в почве.

5. Определение в  почве общего количества бактерий,

6. Определение Clostridium perfringens в почве.

7. Определение термофильных  бактерий.

8. Определение в  почве нитрифицирующих бактерий.[14]

3. Схема и санитарно-микробиологические показатели исследования почвы.

 

В настоящих Методических указаниях  приведен полный набор микробиологических показателей и методов их определения, использование которых позволяет  дать комплексную санитарно-микробиологическую оценку почвенного покрова. Одни показатели (бактерии группы кишечных палочек, термофильные, нитрифицирующие, общее количество бактерий и Cl. perfringens) указывают на степень фекального загрязнения. Изучение состояния почвенного биоценоза по этим показателям и дополнительно по ряду групп и видов почвенной микрофлоры позволяет более глубоко определять изменения в почве, происходящие в результате бактериального, органического и химического загрязнений.

В соответствии с целями исследований в каждом конкретном случае можно  использовать определенную группу показателей. В таблице 1 приведены 4 группы показателей. При проведении текущего санитарного  надзора за состоянием почвы целесообразно  ограничить исследования проведением  краткого санитарно-микробиологического  анализа, указывающего на наличие и  степень фекального загрязнения  почвы. По показателям, включенным в  эту группу, можно определять и  самоочищение почвы от энтеробактерий и органических веществ.

Таблица 1 СХЕМА САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ ПОЧВЫ

Группы методов

---------------+----------------+------------------

¦              ¦                ¦                 ¦

\/             \/               \/                \/

-------------- --------------- ------------------- ---------------

¦Краткий са- ¦ ¦Полный сани- ¦ ¦Методы определе- ¦ ¦Индикация и ¦

¦нитарно-мик-¦ ¦тарно-микро- ¦ ¦ния влияния хими-¦ ¦выделение па-¦

¦робиологиче-¦ ¦биологический¦ ¦ческих веществ на¦ ¦тогенных мик-¦

¦ский анализ ¦ ¦анализ       ¦ ¦микроорганизмы   ¦ ¦роорганизмов ¦

-------------- --------------- ------------------- ---------------

- бактерии      - краткий са-   - постановка опы-   - определение

группы кишеч-   нитарно-микро-  тов по определе-    сальмонелл в

ной палочки;    биологический   нию влияния хими-   почве;

- общее коли-   анализ;         ческих веществ на   - индикация и

чество бакте-   - общая чис-    отдельные микро-    выделение па-

рий;            ленность сап-   организмы;          тогенных клос-

- cl. per-      рофитов;        - постановка экс-   тридий;

fringens;       - общее число   периментальных и    - определение

- термофиль-    и процент спор; натурных опытов     сибиреязвенной

ные бактерии;   - количество    и наблюдений;       палочки;

- нитрифици-    актиномицетов   - определение       - санитарно-

рующие бак-     и грибов;       способности мик-    вирусологичес-

терии           - аэробные      роорганизмов к      кое исследова-

целлюлозные     метаболизму  хими-   ние почвы

микроорганизмы; ческих веществ

- аммонифика-

торы;

- токсичность

почв к микро-

организмам

Исследование почвы по полному  санитарно-микробиологическому анализу  показано при осуществлении предупредительного санитарного надзора при выборе территорий для размещения населенных пунктов, отдельных объектов, ЗПО  и др., а также при проведении научных исследований. Проведение анализа  почвы по полной схеме позволяет  получать наиболее полные данные о  степени фекального и органического  загрязнения и течении процессов  самоочищения.

Определение влияния химических веществ  на почвенный биоценоз предусматривает  дополнительные исследования, позволяющие  дать более быструю характеристику антибактериального действия химических соединений, а также их действия на активность почвенной микрофлоры.

В необходимых случаях, а также  по эпидемическим показаниям можно  проводить индикацию и выделение  из почвы патогенных микроорганизмов, в распространении которых почва  играет важную роль.[14]

3.1 Оценка санитарного состояния почвы по микробиологическим показателям.

 

Имеющиеся в литературе данные (1, 2, 3) и исследования, проведенные Молдавским НИИ гигиены и эпидемиологии, позволили разработать схему  оценки санитарного состояния почвы  по 4-м микробиологическим показателям (табл. 2).