Сопоставительный анализ корректоров метаболизма костной ткани

Таблица 4. Модификатор подвижной фазы.

Проявление хроматографических зон

Для проявления пластин после  хроматографирования использовали нингидрин:

Обе равновесные формы вступают в реакцию:

 

 

Проявленную хроматограмму сканировали и строили градуировочную зависимость, по которой определяли содержание 4-аминобутановой кислоты в субстанции алендроната натрия.

 

 

 

C0           C1                    C2         C3

Рис.1. Хроматограмма фармакопейногостандарта

алендроната натрия и растворов стандарта 4-

амино-бутановой кислоты (подвижная фаза:

0,02 моль/л ЦПХ,0,05 моль/л Бридж 35, 5%

(по объему) этанола рН 2, HCl).

2. Спектроскопия ядерного магнитного резонанса Рис.2. ЯМР спектр алеандроната.

Узел	Сдвиг
ОН	4.80
ОН	4.80
ОН	2.0
ОН	4.80
ОН	4.80
NH2	2.0
NH2	2.65
CH2	1.7

Таблица 5. Протокол прогноза спектра H -1 ЯМР

 

1Н спектр алеандроната был исследован при комнатной температуре с использованием Брукер Эванс 400 Мгц, калибруется с помощью растворителя сигналов 7,25 частей на миллион. Спектр снимается  в хлороформе.

Количественное  определение

1. Потенциометрическое титрование

Реагенты

Фармакопейный стандарт субстанции алендроната натрия тригидрата; стандартный раствор хлороводородной кислоты с концентрацией 0.1 М

готовили из стандарт-титра и дополнительно стандартизовали по навескам карбоната натрия; стандартный, свободный от карбонатов, 0.1 М раствор КОН стандартизовали по навескам адипиновой кислоты. Рабочие растворы НСl и КОН готовили разбавлением непосредственно перед титрованием. Рабочий раствор тетраэтиламмоний гидроксида готовили из 10 % раствора (С2Н5)4NOH. В качестве фонового электролита использовали КСl «чда» В качестве катионного поверхностно-активного вещества использовался цетилпиридиний хлорид моногидрат.

 

Аппаратура и  условия потенциометрического титрования

Потенциометрические титрования выполнены при температуре 25.0±0.1 ⁰С в ячейке с жидкостным соединением в виде агар-агарового мостика (3 % по массе агар-агара в 2.5 М растворе КСl), стеклянным электродом ЭСЛ-63-07 и электродом сравнения ЭВЛ-1М3. рН-метрическую ячейку градуировали по стандартным буферным растворам с рН 1.68, 3.56 или 3.56, 6.86, 9.18 в зависимости от значений рН при кислотно-основном титровании. Электродвижущую силу (э.д.с.) измеряли по компенсационной схеме (потенциометр Р-307, нуль-инструмент рН-метр рН 121) с погрешностью не выше 0.2 мВ.

Титровали раствором 5•10^-3 М HCl. Для определения значений рК_а2 - рК_а4 раствор алендроната натрия титровали раствором 1.5•10^-2 М КОН. Фоновым электролитом для создания ионной силы (0.1 М) в водных растворах был КСl.

Мицеллярные растворы ЦПХ с концентрацией 0.1 М титровали без введения других электролитов.

 

	1	2	3	4	Δ = pKa (4) − pKa (3)
pKa1	2.72±0.05	1.7±0.4	2.24±0.01	2.34±0.02	0.10
pKa2	8.73±0.05	6.1±0.5	6.38±0.03	5.97±0.02	-0.41
pKa3	10.5±0.1	9.9±0.5	10.68±0.06	10.25±0.03	-0.43
pKa4	11.6±0.1	10.6±0.1	11.4±0.2	10.5±0.1	-0.90
pKa5		14.4±0.3

Таблица 6. Значения показателей констант ионизации алендроновой кислоты в водных растворах и мицеллярных растворах ЦПХ

 

1- 0.1 М KCl, 25.0 ⁰C, 1.0·10^-3 M алендроната натрия;

2- Расчетные значения pK_a в воде (ACD/ pK_a DB 4.0);

3- 0.1 М KCl, 25.0 ⁰C, 5.0·10^-3 M алендроната натрия;

4- 0.1 М ЦПХ, 25.0 ⁰C, 5.0·10^-3 M алендроната натрия.

Определение pK_a1 алендроновой кислоты

Для оценки коэффициента активности протонов в водной среде использовали уравнение:

 

где I – ионная сила, а  и b – коэффициенты, изменяющиеся для  различных фоновых электролитов (для KCl a = 6.1; b = 0.113).

Эти же значения коэффициента активности использовали и для мицеллярных растворов ЦПХ. Таким образом, полученные нами значения показателей (Таблица 6, строка 1, столбец 3 и 4) относятся к концентрационным константам ионизации алендроновой кислоты.

Влияние мицеллярной среды ЦПХ на протолитические свойства алендроновой кислоты

Мицеллярные растовры ПАВ можно рассматривать как двухфазную систему, в которой динамические микроагрегаты мицелл ПАВ представляют псевдофазу. Тогда константы ионизации, определяемые в такой системе, являются «кажущимися» (pK_a^app):

 

где pH_w - значение рН, измеренное в мицеллярном растворе ПАВ и относящееся к объему водной фазы; [HA]_w , [HA]_m и [A]_w , [A]_m — равновесные концентрации протонированной и депротонированной форм, находящихся в водной и мицеллярной фазе, соответственно.

 

2. Инфракрасная спектрофотометрия

ИК-спектрометрия приводится в Японской Фармакопее как метод тестирования на соответствие качества. Подчеркивается, что образцы должны готовится методом таблетирования с KBr, в масле Nujol или методом жидкой пленки.

Рис.3. ИК-спектр алеандроната

 

 

Характеристика назначения группы алендроната инфракрасного спектра

3430                      γOH колебания межмолекулярных водородных связей

2960                      γC-H(алифатические) колебания

2490-2245              ν N-Н – колебания NH₂ группы

1995                       δCH2 –O колебания колебания СН₂- алкильной группы 

 

Хранение

Список Б. Хранить при  комнатной температуре (15-25°С) в сухом, защищенном от света месте.

 

При неправильном хранении происходит гидролиз с отщеплением  фосфорных групп, что приводит к  полной потере фармакологической активности.

 

 

 

 

 

Клодроновая кислота (Clodronate acid).

 

 

ИЮПАК:

(дихлор-фосфоно-метил) бифосфоновая кислота и в виде динатриевой соли тетрагидрата.

МНН:

Клодроновая кислота и динатриевая соль клодроновой кислоты.

Фармакологическая группа вещества:

Корректоры метаболизма  костной и хрящевой ткани

Изомерия

Для данного вещества не характерна ни структурная изомерия, ни изомерия по функциональным группам, ни оптическая изомерия.

 

 

Получение

Способ получения препарата клодроната включает следующие стадии:

 

А) клодронат кристаллизуется в виде тетрагидрата клодроната динатрия из водного раствора динатрийклодроната,

                        

 

Б) динатрийклодронат тетрагидрат сухой гранулированный сжимают таким образом, что кристаллическая структура тетрагидрата клодроната динатрия сохраняется. Осуществляется дробление и фракционирование массы до получения гранул подходящего размера.

Клодронат сначала кристаллизуют в виде тетрагидрата динатрийклодроната из водного раствора динатрийклодроната. За счет выбора условий кристаллизации получается стабильный динатрийклодронат с четырьмя молекулами кристаллической воды. В обоих случаях состав кристаллической фазы такой же (СН₂Cl₂O₆ P₂Na ₂ ,4H₂O). Один из атомов натрия координирован с одним атомом хлора. Структура состоит из четырех цепей, которые параллельны оси и соединены друг с другом водородными мостиками.

Кристаллизацию можно  проводить путем добавления органического  растворителя, который полностью  или частично растворим в воде, но в котором динатрийклодронат плохо растворим, и постепенным понижением температуры при перемешивании, в результате чего клодронат динатрия кристаллизуется в виде тетрагидрата. В качестве водорастворимых органических растворителей используют, например, водорастворимый низший спирт, такой как метанол или этанол, н-пропанол, изопропанол, трет-бутанол, гликоль, гликолевые эфиры, тетрагидрофуран, диоксан, ацетон, особенно этанол, метанол, монометиловый и этиловый эфиры гликолей, тетрагидрофуран, диоксан или ацетон. В частично растворимый в воде органический растворитель, например, хлористый метилен, хлороформ, метилэтилкетон, этилацетат, бутанол или смеси этих и полностью водорастворимые растворители также могут быть использованы. Начальная температура выше комнатной температуры, например, 30 ° -120 ° С, предпочтительно 60 ° -100 ° С, в частности 70 ° -90 ° С и наиболее предпочтительно от примерно 80 ° С. Скорость и способ добавления растворителей должны быть такими, чтобы клодронат не осаждался преждевременно. Конечная температура составляет 0 ° -20 ° С, предпочтительно около 15 ° С. Температура может быть снижена непрерывно или ступенчато.

Кристаллизация может  также осуществляться путем испарения  водного раствора динатрийклодроната медленно, так что количество воды уменьшается, в присутствии или в отсутствии водорастворимого или частично растворимого в воде органического растворителя, а также в присутствии органического растворителя, который плохо растворим в воде, в двухфазной системе при температуре по меньшей мере около 20 ° С, но не более чем примерно 100 ° С, предпочтительно 40 ° -70 ° С, в то время Раствор перемешивают. При желании испарение может быть выполнено при пониженном давлении, в результате чего температура может быть ниже, соответственно. В качестве водорастворимого органического растворителя, например, водорастворимый низший спирт, такой как этанол, н-пропанол, изопропанол, трет-бутанол, гликоль или гликолевый эфир может быть использован. В качестве органического растворителя, который плохо или частично растворимых в воде, например хлористый метилен, хлороформ, метилэтилкетон, этилацетат, бутанолы, такие как 1 - и изобутанол, или смесь этих и упомянутые выше оказаться под вопросом, особенно метиленхлорид, хлороформ, 1-бутанол, гликоль или монометиловый или моноэтиловый эфир гликоля.

Возможные остатки органических растворителей могут быть удалены, например, путем промывки этанолом. Путем кристаллизации таким образом, динатрийклодронат тетрагидрат получают в виде мелкого кристаллического порошка с хорошими эксплуатационными характеристиками.

 

Примеси (по Европейской фармакопее)

 

А   [дихлор [гидрокси (1 - метилэтокси) фосфиноилметил] метил] фосфоновая кислота

В   (хлорметилен)бисфосфоновая кислота

С Фосфорная кислота

Таблица 7. Примеси клодроновой кислоты.

 

 

 

 

 

Сопоставительный  анализ оригинального препарата  и дженериков

Препарат	Состав	Фармакокинетика
Бонефос – оригинальный препарат;   Производитель: Шеринг, Финляндия	Активное вещество: динатрия клодроната тетрагидрат 500 мг Вспомогательные вещества: тальк — 22,8 мг; кальция стеарат — 2,85 мг; кремния диоксид коллоидный безводный — 2,85 мг; лактозы моногидрат — 41,5 мг. Капсула: краситель железа оксид красный — 0,008%, краситель железа оксид желтый — 0,008%, титана диоксид — 2%, желатин — до 100%	Всасывание клодроновой кислоты в ЖКТ составляет приблизительно 2%. Cmax в сыворотке крови достигается через 30 мин. Относительная биодоступность составляет 91%. Vd — 20–50 л. Выводится из организма главным образом почками. Почечный клиренс составляет приблизительно 75% от плазменного клиренса.
Клобир,   Производитель: Синдан-Фарма, Румыния	Тот же	Та же

Таблица 8. Сопоставительный анализ оригинального препарата и дженериков.

Проанализировав оригинальный препарат и дженерики , можно сделать вывод, что данные препараты аналогичны.

 

 

Биотрансформация

Не подвергается в организме  биотрансформации, выводится почками в неизменном виде. Но, исходя из особенностей химического строения, можно предположить протекание следующих реакций.

Ферментативный гидролиз:

 

 

Физико-химические свойства

Внешний вид: белый или  почти белый кристаллический  порошок.

Растворимость: легко растворим  в воде, практически не растворим в этаноле (96 процентов), мало растворим в метаноле.

Обладает низкой липофильностью.

 

 

 

 

 

Химические свойства:

1. Кислотно-основные:

2. Реакция на ковалентно-связанный галоген: