Микробиология лекарственных средств

Контрольная работа № 3

ТЕМА: Микробиология  лекарственных средств

 

Контрольные вопросы.

 

1. Значение контаминации патогенными, условно-патогенными, сапрофитными микроорганизмами воздуха различных помещений аптек.
2. Антибиотикорезистентность микроорганизмов. Механизмы развития, ее значение.

 

ТЕСТОВЫЕ ЗАДАНИЯ, ЗАДАЧИ

 

Вариант «j».

 

1. Выбор метода консервации лекарственных средств зависит от:

а) свойств  лекарственного средства и цели консервации

б) возможностей предприятия-изготовителя

в) предполагаемых условий  хранения

г) стоимости лекарственного сырья

д) желания потребителя

2. Цель контроля санитарно-бактериологического состояния воздуха в аптеке:

а) профилактика воздушно-капельных  инфекций среди сотрудников

б) предупреждение контаминации лекарственных средств

в) контроль текущей дезинфекции

г) контроль заключительной дезинфекции

д) изучение микрофлоры воздуха

3. В составе нормальной микрофлоры носа доминируют:

а) стрептококки

б) стафилококки

в) энтеробактерии

г) лактобациллы

д) энтеровирусы

 

Задача. При проверке аптеки работниками Роспотребнадзора при исследовании основного сырья, используемого для производства стерильных препаратов, были обнаружены МАФАМ в количестве 250 КОЕ/мл, P. аeruginosa в количестве 19 КОЕ/мл.

• Пригодно ли сырье для использования?

• Назовите возможные источники и причины микробной контаминации.

• Какие мероприятия необходимо провести для выяснения этих причин?
• Следует ли проверять лекарственные средства, изготовленные в асептическом блоке накануне?

 

 

1. Значение контаминации патогенными, условно-патогенными, сапрофитными микроорганизмами воздуха различных помещений аптек.

 

Контаминация микроорганизмами – первичное загрязнение, внесенное воздушным потоком; вторичное – в результате несоблюдения требований асептики.

Асептика – условия и комплекс мероприятий, направленных на предотвращение микробного и другого загрязнения при получении стерильной продукции на всех этапах технологического процесса.

Асептический блок – территория аптеки, специально сконструированная, оборудованная и используемая таким образом, чтобы снизить проникновение, образование и задержку в ней микробиологических и других загрязнений.

Воздушный шлюз – установленное в замкнутом пространстве устройство, предотвращающее проникновение механических частиц или микроорганизмов, или замкнутое пространство между помещениями различной чистоты, отделенное от них дверьми.

Микробное загрязнение  воздуха различных помещений  аптек может быть причиной микробного обсеменения готовых лекарств. Микробная  контаминация лекарственного препарата  может вызвать заболевание у принимающего его человека. Кроме того, располагая набором различных ферментов, микроорганизмы способны использовать соединения, входящие в состав лекарственных средств, и в значительной степени изменять их физические и химические свойства. Размножение микроорганизмов может привести к снижению активности препарата или к полной его инактивации, а иногда и к превращению действующего вещества в токсический продукт.

Возможные источники  загрязнения:

• персонал,
• лекарственное сырье,
• вода,
• посетители аптек,
• уличный воздух,
• оборудование и вспомогательные материалы.

Для предотвращения попадания стафилококков в воздух необходимо строгое соблюдение санитарного режима:

• соблюдение правил работы в асептическом блоке,
• правильная организация помещений аптек,
• соблюдение графика и технологии уборок,
• выявление и лечение больных и бактерионосителей среди персонала аптек,
• дезинфекция воздуха и различных поверхностей в асептических помещениях и т. д.

Обычно, для определения  содержания бактериальных клеток (спор) используют стандартные концентрированные питательные среды: Агар Питательный (ПА) или Агар Мясопептонный (МПА). Экспонированные чашки термостатируют порядка 3-х суток при температуре 36 ⁰С. Грибы (плесени) при этой температуре не растут. Бактериальные колонии хорошо разрастаются, их легко сосчитать.

Для определения плесневых  контаминантов, как правило, используют среду Сабуро. Экспонированные чашки  термостатируют 3 – 5 суток при температуре 24 – 26 ⁰С. Колонии за это время хорошо разрастаются и их легко можно сосчитать. Сравнивая чашки, экспонированные на улице и в различных помещениях, в различное время, можно количественно и качественно оценить эффективность проводимых санитарных мероприятий, работы фильтров, чистоты помещений.

Контроль  воздуха на обсемененность проводят седиментационным или аспирационным методом.

Пробы воздуха отбирают в следующих помещениях:

• в асептическом блоке;
• в ассистентской,
• фасовочной,
• материальной.

Отбор проб воздуха производят при соблюдении следующих условий:

• чистое подготовленное к работе помещение;
• закрытые форточки и двери;
• определение в помещении процентной относительной влажности воздуха;
• уровень высоты отбора проб воздуха – соответствует высоте рабочего стола;
• не ранее чем за 30 мин. после влажной уборки помещения.

Пробы воздуха отбирают аспирационным методом с помощью приборов для бактериологического анализа воздуха: прибор Кротова, ПОВ, ПАЕ. Скорость протягивания воздуха должна составлять 25 литров в минуту, количество пропущенного воздуха – 100 литров для определения общего количества бактерий; для определения золотистого стафилококка 250 литров и для определения плесневых и дрожжевых грибов 250 литров. При невозможности использования аппарата Кротова разрешается применять седиментационный метод по Омелянскому Б.П.

Седиментационный метод – осаждение микробов на поверхность плотной питательной среды под действием силы тяжести (гравитации). В двух точках помещения на высоте рабочего стола ставят открытые чашки Петри с питательным агаром на 5 минут. После экспозиции чашки закрывают, переворачивают и инкубируют в термостате при температуре 37⁰С в течение 24 часов. После инкубации проводят подсчет количества выросших колоний микроорганизмов. Допускается пророст не более 3 колоний на чашке при исследовании седиментационным методом. С помощью этого метода можно ориентировочно определить микробную обсемененность воздуха, используя формулу Омелянского: на 100 см² поверхности агара за 5 минут оседают бактерии из 10 л воздуха (10 дм³).

Сранивая, оба метода можно сделать вывод, что для бактериологического исследования лучше использовать аппарат Кротова, т.к. при седиментационным методом результаты получаются заниженными примерно в 3 раза по сравнению с аспирационным.

Микробная контаминация воздуха производственных помещений – общее количество жизнеспособных микроорганизмов, содержащихся в 1 м³ воздуха.

КОЕ (Колониеобразующие  Единицы) – показатель, характеризующий микробиологическую "чистоту" или, напротив, степень бактериальной загрязненности. Оценивается по числу живых микроорганизмов, содержащихся в определенных объемах исследуемых проб по проросшим единичным колониям на плотных питательных средах.

Общее микробное число (ОМЧ) воздуха – количество колониеобразующих единиц (КОЕ) в 1 м³ воздуха (подсчитывают колонии, вырастающие на поверхности питательного агара при посеве определенного объема воздуха и инкубации в течение 24 часов при 37 °С и 24 часа при комнатной температуре).

Присутствие Staphylococcus aureus. В определенном объеме воздуха определяют наличие золотистого стафилококка (воздух засевают на желточно-солевой агар, где вырастают характерные колонии грамположительных кокков, обладающих ферментом плазмокоагулазой).

Присутствие патогенных микроорганизмов. По эпидемиологическим показаниям в воздухе определяют наличие сальмонелл, микобактерий, вирусов.

Для определения общего содержания бактерий в 1 м³ отбор производят на 2% питательный агар, разлитый в чашки по 12-15 мл.

Среда Сабуро (R. J. A. Sabouraud) – селективная питательная среда для выращивания патогенных грибков, дрожжей и ацидофильных бактерий. Предназначена для культивирования грибков медицинского значения, а также для длительного хранения их культур.

Входящий в состав среды микологический пептон, гидролизат казеина и пептический перевар  животной ткани служат источником необходимых питательных веществ для роста. Глюкоза является источником энергии. Низкое значение рН способствует росту грибов и подавляет рост бактерий, контаминирующих клинический материал.

Присутствие грибов. Определяют наличием в воздухе дрожжеподобных и плесневых грибов – подсчитывают количество колоний, вырастающих на среде Сабуро за 72 часа инкубации при 22 – 28 °С.

Доставленные чашки  с посевами на питательном агаре  и желточно-солевом агаре инкубируют в термостате при 37°С в течение 24 часов, посевы на желточно-солевом агаре дополнительно выдерживают еще 24 часа при комнатной температуре.

Для определения общей  бактериальной обсемененности через 48 часов посевы просматривают, подсчитывают количество выросших колоний и производят пересчет на 1 м³.

Для определения количественного содержания золотистого стафилококка просматривают посевы на желточно-солевом агаре после 48-ми часов инкубации, колонии подозрительные на стафилоккок подсчитывают и проводят идентификацию. После идентификации производят пересчет полученных результатов на 1 м³ воздуха.

Для количественного  определения плесневых и дрожжевых  грибов после 72 часов инкубации подсчитывают количество выросших колоний плесневых  и дрожжевых грибов и производят пересчет на 1 м³.

В соответствии с «Методическими указаниями по микробиологическому контролю в аптеках» (МЗ СССР, 1985 г.) плановые исследования воздуха на общую бактериальную обсемененность, стафилококк и грибы проводятся не реже четырех раз в год.

 

2. Антибиотикорезистентность микроорганизмов. Механизмы развития, ее значение.

 

Известно, что устойчивость к антибиотикам существовала всегда. До сих пор не был (и, вероятно, едва ли когда-нибудь будет) создан антибиотик, эффективный в отношении всех патогенных бактерий.

Под антибиотикорезистентностью понимают способность микроорганизма противостоять действию антибиотика.

Антибиотикорезистентность возникает  спонтанно вследствие мутаций и  под воздействием антибиотика закрепляется в популяции. Сам по себе антибиотик не является причиной появления резистентности.

Резистентность микроорганизмов к антибиотикам может быть истинной и приобретенной. Истинная (природная) устойчивость характеризуется отсутствием у микроорганизмов мишени действия антибиотика или недоступностью мишени вследствие первично низкой проницаемости или ферментативной инактивации. При наличии у бактерий природной устойчивости антибиотики клинически неэффективны.

Под приобретенной устойчивостью  понимают свойство отдельных штаммов  бактерий сохранять жизнеспособность при тех концентрациях антибиотиков, которые подавляют основную часть микробной популяции. Появление у бактерий приобретенной резистентности не обязательно сопровождается снижением клинической эффективности антибиотика. Формирование резистентности во всех случаях обусловлено генетически – приобретением новой генетической информации или изменением уровня экспрессии собственных генов.

В целом развитие антибиотикорезистентности  микроорганизмов связано с выработанными  в ходе эволюции биохимическими механизмами. Различают следующие пути реализации антибиотикорезистентности у бактерий:

1. Модификация мишени действия антибактериальных препаратов (АБП). Структура мишеней действия АБП подвержена изменчивости в результате мутаций в кодирующих их генах. Часть таких изменений может привести к снижению (или утрате) способности мишени связываться с АБП.
2. Инактивация АБП. Механизмы инактивации (ферментативного разрушения) существовали у бактерий задолго до начала использования этих веществ в качестве антибактериальных препаратов. Скорее всего, они выполняли функции защиты от собственного антибиотика. В последующем детерминанты резистентности распространились среди возбудителей инфекционных болезней.
3. Активное выведение АБП из микробной клетки (эффлюкс). Известны, как минимум, четыре больших семейства транспортных систем, обеспечивающих активное выведение экзогенных веществ (в том числе и АБП) из бактериальной клетки. «Базовая» активность этих систем во многом определяет уровень природной чувствительности бактерий к АБП. При активации выведения отмечают формирование приобретенной резистентности.
4. Нарушение проницаемости оболочки микробной клетки. Этот механизм распространен, в основном, среди грамотрицательных бактерий, обладающих внешней мембраной и является наименее специфичным в отношении АБП разных групп. Транспорт гидрофильных АБП внутрь микробной клетки осуществляется через пориновые каналы. При нарушении структуры пориновых каналов или их утрате эффективность транспорта АБП резко снижается, что проявляется в формировании устойчивости к нескольким классам препаратов.
5. Защита мишени. Защита мишени относится к наименее изученным механизмам АБР. Установлено, что бактерии способны синтезировать белки, предотвращающие связывание АБП с мишенью, причем известно, что указанные белки связываются не с АБП, а с мишенью действия и каким- то образом модифицируют ее. Ранее этот механизм был известен только для тетрациклинов, однако сравнительно недавно он был описан и для хинолонов.