Методы анализа лекарственных средств производных арилалкиламинов

Подлинность.

• 1 мо препарата смешивают с 4 мл воды и прибавляют 1 каплю раствора хлорида окисного железа; тотчас же появляется изумрудно-зеленое окрашивание, которое от прибавления 1 капли раствора аммиака переходит в вишнево-красное и затем в коричнево-красное.
• К 1 мл препарата прибавляют 2 мл 1% раствора йодата калия, 1 мл разведенной фосфорной кислоты и смесь нагревают в течение 1 минуты при 60°С; появляется стойкое, интенсивное красно-фиолетовое окрашивание.
• К 1 мл препарата прибавляют 5 мл буферного раствора (рН = 3,6) и 2 мл 0,1 н. раствора йода, оставляют на 5 мин, после чего смешивают с 3 мл 0,1 н. раствора тиосульфата натрия. Рствор сохраняет темно-красное окрашивание (отличие от НА)

рН 3,0 – 3,5

Тяжелые металлы 10 мл препарата не должны содержать тяжелые металлы.

Хранение. Список Б. В прохладном, защищенном от света месте.

Высшая разовая доза под кожу 1 мл

Высшая суточная доза под кожу 5 мл

Примечание. Для инъекций применяют  раствор адреналина гидрохлорида 0,1% в ампулах (Solutio Adrenalini hydrochloridi 0,1% pro injektionibus)

3.2. Noradrenalini hydrotartas. 
Норадреналина гидротартрат

 

Описание. Белый или почти белый кристаллический порошок без запаха, горького вкуса. Легко изменяется под действием света и кислорода воздуха.

Растворимость. Легко растворим в воде, мало растворим в спирте, практически нерастворим в эфире и хлороформе.

Подлинность.

• 5 мл препарата растворяют  в 5 мл воды, прибавляют 1 каплю раствора хлорида окисного железа; появляется изумрудно-зеленое окрашивание, которое от прибавления одной капли раствора аммиака переходит в вишнево-красное, а затем в оранжево-красное.
• 1 мл 0,1% раствора препарата разводят гидротартратным буферным раствором с рН = 3,56 до объема 10 мл и прибавляют 2 мл 0,1 н раствора тиосульфата натрия. Раствор должен быть бесцветным или слабо-розовым (отличие от адреналина, вызывающего интенсивное красное окрашивание). Повторяют определение с 10 мл буферного раствора с рН = 6,5; образуется красно-фиолетовое окрашивание.

Раствор препарата (1 : 100) дает желтый осадок при прибавлении 0,5 мл раствора едкого натра.

Температура плавления 100 - 106° (плав мутный, препарат предварительно не высушивают).

Удельное вращение от -10° до -12° в пересчете на сухое вещество (2% водный раствор).

Удельный показатель поглощения. Е^1%_{1 см} при длине волны 279 нм от 769084 (0,005% водный раствор)

Кислотность рН = 3,5 – 5,0 (1% водный раствор)

Вода 0,05 г препарата (точная навеска) титруют реактивом К.Фишера. Содержание воды должно быть 4,5 – 6,0%.

Сульфатная зола из 0,2 г препарата должна быть невесомой.

Хранение. Список Б. В запаянных ампулах или в хорошо укупоренной таре, предохраняющей от действия света.

3.3. Solutio Noradrenolini hydrotartratis 0,2% pro injektionibus. 
Раствор норадреналина гидротартрата 0,2% для инъекций

 

Состав: Норадреналина гидротартрата  1 г

Натрия метабисульфита 1 г

Натрия хлорида 8 г

Воды для инъекций до 1 л

 

Раствор фильтруют, разливают в  ампулы нейтрального оранжевого стекла по 1 мл и стерилизуют текучим  паром при 100° в течение 15 мин.

Описание. Бесцветная прозрачная жидкость

Подлинность. Препарат дает первую и вторую реакцию подлинности, указанные для «Noradrenalini hydrotartas».

рН = 3,0 – 4,5

Хранение. Список Б. В прохладном защищенном от света месте.

 

 

3.4. Ephedrine hydrochloridum 
Эфедрина гидрохлорид

 

Описание. Бесцветные игольчатые кристаллы или белый кристаллический порошок без запаха, горького вкуса.

Растворимость. Легко растворим в воде, растворим в 95% спирте, практически нерастворим в эфире.

Подлинность

• 0,01 г препарата растворяют в 1 мл воды, прибавляют 0,1 мл раствора сульфата меди и 1 мл раствора едкого натра; появляется синее окрашивание. При взбалтывании этого раствора с 1 мл эфира, эфирный слой окрашивается в фиолетово-красный цвет, водный слой сохраняет синее окрашивание.
• 0,05 г препарата растворяют в 1 мл воды, прабавляют кристаллик феррицианида калия и нагревают до кипения; появляется запах бензальдегида.
• 0,01 г препарата дает с 0,5 мл разведенной азотной кислоты и 0,5 мл раствора нитрата серебра, образуется белый творожистый осадок, растворимый в растворе аммиака.

Температура плавления 216 - 220°

Удельное вращение от -33° до 36° (5% водный раствор).

Кислотность 0,2 г препарата растворяют в 5 мл свежепрокипяченной и охлажденной воды, прибавляют 1 каплю раствора метилового красного; появившееся красное окрашивание должно переходить в желтое от прибавления не более 0,15 мл 0,05Н раствора едкого натра.

Соли аммония 0,3 г препарата помещают в пробирку, приливают 2 мл воды и 1 мл раствора натра. В верхнюю часть пробирки вкладывают тонким слоем небольшое количество ваты. Сверху пробирки помещают смоченную водой красную лакмусовую бумагу. Пробирку помещают на пять минут в водяную баню с t = 0,5°. Не должен выделяться аммиак, который определяют по запаху и посинению красной лакмусовой бумаги.

Сульфаты. Раствор 0,2 г препарата в 10 мл Н₂О должен выдерживать испытания на сульфаты (не более 0,05% в препарате).

Органические примеси. Раствор 0,15 г препарата в 5 мл концентрированной серной кислоты должен быть бесцветным.

Хранение. Список Б. Вхорошо укупоренной таре, предохраняющей от действия света.

Высшая разовая доза внутрь и под кожу 0,05 г.

Высшая суточная доза внутрь и под  кожу 0,15 г.

3.5. Solutio Eppedrini hydrochloridi 5% pro injektionibus 
Раствор эфедрина гидрохлорида 5% для инъекций

 

Состав: Эфедрина гидрохлорида 50 г

Воды для инъекций до 1 л

 

Раствор фильтруют, разливают в ампулы нейтрального стекла по 1 мл и стерилизуют текучим паром при 100° в течение 30 мин.

Описание. Прозрачная бесцветная жидкость.

Подлинность. 1 мл препарата разводят водой до 5 мл. Полученный раствор дает реакции подлинности, указанные для «Ephedrini hydrochloridum».

рН = 4,5 – 7,0

Хранение. Список Б. В защищенном от света месте.

Высшая разовая доза внутрь и  под кожу 0,05 г

Высшая суточная доза внутрь и под  кожу 0,15 г.

 

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Глава 1. КАЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ

1.1. АНАЛИЗ АДРЕНАЛИНА

 

1. Реакция с хлоридом окисного железа

Адреналина гидрохлорид при  добавлении FeCl₃ окрашивается в изумрудно-зеленый цвет, переходящий от прибавления одной капли раствора аммиака в вишнево-красный, а затем в оранжево-красный.

2. Реакция азосочетания

Адреналин, как соединение, содержащее фенольную группу, обладает способностью сочетаться с солями диазония. В качестве диазореактивов применяют обычно диазотированную сульфаниловую кислоту. При взаимодействии диазобензосульфокислоты с фенолами в щелочной среде образуются азокрасители; сочетание протекает в пара- или орто- положении к гидроксильной группе.

Выполнение реакции : 1 мл 0,1% адреналина гидрохлорида растворяем в воде, прибавляем 5 – 6 капель диазореактива и через 3 – 5 мин – 2 – 3 капли раствора едкого натра; при этом возникает темно-красное окрашивание.

3. Реакция с фосфорномолибденовой кислотой

Фосфорномолибденовая кислота  в кислом или нейтральном растворе не окисляет слабые восстановители. В  щелочной среде окислительная способность  фосфорномолибденовой кислоты значительно повышается, в результате чего происходит окисление многих соединений, в молекуле которых содержится фенольный гидроксил; фосфоромолибдат при этом восстанавливается до так называемой молибденовой сини, как следствие этого появляется синее или зеленое окрашивание.

Выполнение реакции: 1 мл 0,1% адреналина гидрохлорида растворяем в 1 мл воды и  прибавляем 5 – 6 капель 10% раствора фосфорномолибденовой кислоты; адреналина гидрохлорид 0,1% приобретает зеленое окрашивание; после прибавления раствора аммиака появляется интенсивное темно-фиолетовое окрашивание.

4. Реакция окисления.

Препараты, содержащие в молекуле фенольный гидроксил окисляются раствором йодата калия в кислой среде, образуя окрашенные комплексы.

Выполнение реакции: к 1 мл 0,1% адреналина гидрохлорида прибавляют 1 мл воды, по 5 капель раствора фосфорной кислоты и 1% раствора йодата калия и нагреваем на водяной бане.

5. Тонкослойная хроматография (ТСХ)

На стеклянную пластинку наносим  силикагель, гранулы которого предварительно измельчаем на шаровой мельнице, просеиваем через сито с размером отверстий 0,1 мм, обрабатываем концентрированной соляной кислотой, отмываем до нейтральной реакции дистиллированной водой и сушим на воздухе. Затем на тонкий слой силикагеля наносим каплю адреналина гидрохлорида 0,1%, помещаем в камеру с 70% этиловым спиртом, закрываем крышкой. Затем рассчитываем значение величины R_f, который должен быть равен 0,13, что свидетельствует о подлинности препарата.

6. Спектр поглощения.

0,005% раствор в 0,01 н растворе  соляной кислоты, адреналина гидротартрата имеет максимум поглащения при длине волны 279 нм.

1.2. АНАЛИЗ НОРАДРЕНАЛИНА

 

1. Реакция с нингидрином.

0,005 г препарата растворяют в  1 мл воды, прибавляем 1 к4аплю 0,1 н  раствора едкого натра, несколько  капель 0,25% раствора нингидрина и кипятим смесь 1-2 мин; появляется желтое окрашивание.

2. Реакция с сульфитам меди в щелочной среде.

0,01 г препарата растворяем в 1 мл воды, прибавляем 0,1 мл раствора сульфата меди и 1 мл раствора едкого натра; появляется синевато-зеленое окрашивание.

3. Тонкослойная хроматография (ТСХ).

Как и в случае адреналина в качестве сорбента используем тонкий слой силикагеля в виде порошка, либо в виде водной суспензии; в качестве растворителя также используем 70% этиловый спирт. Коэффициент подвижности R_f равен 0,12.

4. Спектр поглощения.

Определяем на спектрометрах. Анализируемый  раствор помещается в специальную  кювету (ультрафиолетовая спектроскопия), источник света подается в устройство монохроматора, а оттуда свет попадает в кюветное отделение, после того как раствор поглощает свет, спек р определяется индикатором. Максимум поглощения 0,005% водного раствора норадреналина гидротартрата равен 279 нм.

5. Спектр флюоресценции.

Флюресценция норадреналина вызывается облучением коротковолновым ультрафиолетовым светом. Так, норадреналина гидротартрат флуоресцирует в ультрафиолетовом свете желто-зеленым светом. Максимум флуоресценции норадреналина гидротартрата составляет 505 нм.

 

1.3. АНАЛИЗ ЭФЕДРИНА

 

1. Реакция образования окрашенных комплексов меди:

0,01 г препарата растворяем в 1 мл воды, прибавляем 0,1 мл раствора сульфата меди и 1 мл раствора едкого натра. Появляется синее окрашивание, при взбалтывании этого раствора с 1 мл эфира эфирный слой окрашивается в фиолетово-красный цвет, что служит реакцией отличия эфедрина от остальных препаратов этой группы, у которых эфирный слой остается бесцветным.

Эфедрин, кроме того. дает следующую  реакцию:

0,01 г препарата в 1 мл воды  добавляем 8-10 капель раствора  феррицианида калия и 2-3 капли  раствора едкого натра; при  нагревании ощущается запах бензальдегида.

2. Тонкослойная хроматография (ТСХ).

На стеклянную пластинку размером 9x12 см наносим слой окиси алюминия  толщиной 0,6 мм.

В качестве растворителей используем смесь бензол-метанол (9:1), помещаем в этот раствор пластинку и  рассчитываем потом R_f, который должен быть 0,15.

3. Хроматография на бумаге (БХ).

В данном случае неподвижной фазой  служит вода, адсорбированная на бумаге. В качестве растворителя используем: 1) месь циклогексан-диэтиламин в соотношении 9:1, при этом Rp = 0,47; 2) смесь петролийный эфир-этиламин (9:1), R_f = 0,26; 3) смесь циклогексан-хлороформ-диэтиламин (7:2:1), R_f = 0,76.

4. Флюоресценция.

К 1-2 мг эфедрина гидрохлорида в сухой  пробирке прибавляем 7-8 капель реактива Марки (раствор фармальдегида в  H₂SO₄) и 5 – 7 капель воды. Наблюдается интенсивно голубая флюоресценция.

 

Глава 2. КОЛИЧЕСТВЕНЫЙ  АНАЛИЗ

2.1. АНАЛИЗ АДРЕНАЛИНА

 

Около 0,15 г тонкоизмельченного и  высушенного препарата (точная навеска) растворяем в 20 мл ледяной уксусной кислоты, слегка нагревая до 40°С в случае медленного растворения и титруем 0,1 н раствора хлорной кислоты до голубовато-зеленой окраски. Индикатор – метиловый фиолетовый.

1 мг 0,1 н раствора хлорной кислоты  соответствует 0,03333 г адреналина.