Методы анализа лекарственных средств производных арилалкиламинов

1.2. ФАРМАКОЛОГИЯ НОРАДРЕНАЛИНА.

Норадреналин, подобно адреналину, оказывает прямое действие на эффекторные клетки. Эти вещества отличаются друг от друга в основном по степени преимущественного влияния на a- или β-адренорецепторы. Норадреналин оказывает влияние главным образом на a-адренорецепторы и значительно слабее на β-адренорецепторы, исключая β₁-адренорецепторы сердца. В активности по отношению к a-адреналинорецепторам нарадреналин уступает адреналину и в большинстве случаев требуются сравнительно большие его дозы, чтобы получить эффект, соответствующий тому, который возникает после введения адреналина. На метаболические процессы норадреналин действует значительно слабее, чем адреналин.

Под влиянием норадреналина возрастает как систолическое, так и диасталическое давление. Пульсовое давление тоже несколько увеличивается. Минутный объем кровообращения не изменяется или даже может несколько уменьшаться. Последнее явление частично объясняют урежением сердечных сокращений, которое возникает благодаря компенсаторным рефлексам вагусного происхождения. Периферическое сопротивление в большинстве сосудистых областей возрастает. Кровоток через почки, мозг и печень уменьшается. Как правило, аналогичное явление наблюдается и в кровотоке через скелетные мышцы. Уменьшение церебрального кровотока сопровождается снижением потребления кислорода мозгом. Под влиянием норадреналина лизентериальные сосуды суживаются. Уменьшается также почечный кровоток. За счет расширения коронарных сосудов и повышения артериального давления увеличивается кровоток через коронарные сосуды. Благодаря тому, что норадреналин в большей степени влияет на a-адренорецепторы, в отличии от адреналина в малых дозах он не вызывает расширения сосудов и вторичного снижения артериального давления в первой фазе действия. На фоне применения веществ, блокирующих a-адренорецепторы, прессорные эффекты норадреналина подавляются, но не извращаются. Следует заметить, что необходимы большие дозы a-адренорецепторов, чтобы полностью предупредить вазоконстрикторное действие норадреналина. При использовании норадреналина вследствие посткапиллярной вазоконтрикции повышается давление в капиллярном русле и жидкая часть крови, не связанная с беками, проникает в гастроцелюлярное пространство. По этой причине объем циркулирующей крови может несколько уменьшаться. При экстракардиаграфических исследованиях регистрируется синусная брадикардия, связанная с рефлекторным повышением тонуса блуждающего нерва. В определенных условиях при назначении норадреналина может возникать желудочная тахикардия и фибрилляция.

Сила гипертензивного эффекта  норадреналина меняется при патологических процессах, например, при шоке. Характерно, что в данном случае препарат был более эффективным на ранних стадиях этого патологического состояния. Следует подчеркнуть, что норадреналин усиливает централизацию кровообращения. В частности, норадреналин, улучшал мозговой кровоток и повышал коэффициент утилизации кислорода мозгом, ограничивает кровоток в других органах (конечности, почки), приводя тем самым к развитию гипоксии в них.

Выраженное вазоконстрикторное действие норадреналина способствует значительному увеличению возврата венозной крови и повышению давления в правом предсердии, легочной артерии и капиллярного давления в малом круге кровообращения. При заболеваниях сердца это может повлечь за собой отек легких. Сужение легочных сосудов в данном случае играет второстепенную роль. При попадании раствора норадреналина в подкожную клетчатку сосуды столь резко суживаются, что возникает тканевая апоксия с последующими некротическими явлениями. Следует отличить, что Путов, Митюнин и Селезнев, Бами и Грефнович наблюдали некроз клетчатки и кожи, окружающей вену, не связанный с паравенозным введением норадреналина. Проверив данное явление в эксперименте, Митюнин и Селезнев полагают, что длительные вливания  норадреналина вызывают спазм мелких сосудов и ишемию стенки вен. В результате этого повышается проницаемость сосудов, и раствор адреномиметика, проникая в окружающие ткани, вызывает их ишемию, а затем и некроз. В экспериментах на собаках при длительной инфузии норадреналина обнаружили очаги массовых поражений, локализованные в сердце, желудке, диафрагме, кишках, мочевом и желчном пузыре.

После первоначального подъема  артериальное давление постепенно снижается  и достигает уровня ниже исходного. При длительном внутривенном введении норадреналина может развиваться своеобразное состояние, напоминающее геморрагический или травматический шок. Ученные установили, что у собак возникает сердечная недостаточность, если им в течении 30-60’ вливать раствор норадреналина со скоростью 2-4 мин/кг. Описанная сердечная недостаточность частично обусловлена кровоизменениями, распространенными очагами некроза и дегенерацией миофибралл миокарда. Такие повреждения сердечной мышцы могут наблюдаться и в клинике при ишемической болезни сердца. По-видимому, катехоламины играют существенную роль в генезе коронарной болезни. Эту гипотезу подтверждают такие факты, как улучшение течения коронарной болезни, наблюдаемое при истощении запасов катехоломинов и при применении β-адреноблокатов.

После неоднократного использования  препарата может развиваться тахифилаксия, хотя не столь выраженная, как в случае эфедрина. Ряд авторов полагает, что норадреналин накапливается в избыточных количествах в адренергических синапсах заменяется неактивными или менее активными метаболитами. Другие исследователи считают, что развитию тахифилаксии способствует системный ацидоз, обусловленный апоксией, гипотензией и циркуляторным стазом. Однако, необходимо отметить, что восстановление нормального кислотно-щелочного баланса крови при ацидозе, вызванном норадреналином, мало влияет на развитие тахифилаксии к данному препарату. Более убедительна гипотеза, по которой предполагается, что рецепторы при длительном применении норадреналина в избытке насыщены медиатором, в результате чего возникает блокада и рефрактерность мышц сосудов.

При клиническом применении норадреналина  может возникать гиперкалиемия  и метаболический ацидоз с повышением содержания свободных аминокислот.

1.3. ФАРМАКОЛОГИЯ ЭФЕДРИНА

Эфедрин содержится в различных  растениях, которые использовались в древней медицине около 5 тыс. лет тому назад. В современной медицине он был введен в практику в 1924г. Синтез алкалоида осуществлен в 1927г. Эфедрин стимулирует как a-, так и β-адренорецепторы. В механизме его действия существенную роль играет способность освобождать норадреналин. Таким образом, это препарат относится к непрямым адреномиметикам. Однако, не исключается и прямое влияние эфедрина на адренорецепторы. Возникающие при применении данного адреномиметика тахифилаксию объясняют истощением запасов катехоламинов. В связи с тем, что препарат возбуждает оба типа адренорецепторов, для него характерно стимулирующее действие на сердце и смешанный эффект на сосуды.

Предполагают, что сердечный компонент  в механизме гипертензивного  действия препарата имеет доминирующее значение. В связи с возбуждением адренорецепторов сердца возникает тахикардия, увеличение ударного и минутного объемов. Несмотря на выражены инотропный эффект, случаи аритмии при использовании эфедрина во время общего обезболивания встречаются относительно нечасто. Сердечный компонент в механизме гипертензивного действия эфедрина и прямой сосудосуживающий эффект препарата обнаружены как в экспериментах на животных, так и в наблюдениях на людях. Под влиянием эфедрина повышается систолическое давление и незначительно меняется диастолическое. В связи с этим возрастает пульсовое давление. Кровоток через почки и органы брюшной полости уменьшается. Мозговой кровоток и кровоток через скелетные мышцы увеличиваются.

Наблюдения на добровольцах показали, что при инфузии эфедрина со скоростью от 24 до 200 мг/кг/мин возникает вазоконстрикция, которая, по-видимому, осуществляется за счет освобождения катахоламинов из симпатических нервных окончаний. Во второй фазе наблюдается вазодилятация, которая очевидна связаны с прямым действием эфедрина на β-адренарецепторы. Необходимо указать, что истощение запасов катахоламинов под влиянием эфедрина подтвердилось не во всех наблюдениях. Например гипертензивный эффект эфедрина отмечали при использовании его у больных с дегенерацией отдельных вегетативных нервов. Эти факты свидетельствуют о том, что эфедрин помимо непрямого, обладает прямым действием на сосуды.

Имеются данные о том, что эфедрин  в малых дозах усиливает эффекты  катахоламинов с прямым действием  на фосфорилазу «Q» в сердце, а в больших дозах препарат ослабляет этот процесс. В этом случае можно говорить о двух механизмах действия эфедрина. С одной стороны, он блокирует обратный транспорт катахоламинов, а с другой β-адренорецепторы.

В отличие от адреналина, эфедрин хорошо всасывается из кишечника, действует более длительно, но уступает по активности первому. Кроме того для него характерно выраженное центральное действие. Препарат в меньшей степени, чем адреналин повышает уровень сахара в крови. В опытах Парий (1970), выполненных на крысах без наркоза, было установлено, что при внутрибрюшинном введении эфедрина в дозе 5 мг/кг отмечается выраженное повышение потребления кислорода животными. По наблюдениям этого же автора препарат обладает довольно выраженным гипертермическим действием.

Как известно, при спинальной и  эпидуральной анестезии часто назначаются гипертензивные препараты. При этих видах обезболивания снимается общее периферическое сопротивление сосудов, значительно увеличивается объем крови в венах, снижается минутный объем сердца, а также сила и частота сердечных сокращений. Применяемый в этих условиях эфедрин можно расценивать как физиологический антогонист. Однако не всегда удается с помощь данного препарата достичь удовлетворительного прессорного эффекта. Кроме того, тахифелаксия ограничивает возможность повторных инъекций эфедрина.

Глава 2. МЕТОДЫ АНАЛИЗА

2.1. ПЛОСКОСТНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ

К плоскостным  видам хромотографии относят  бумажную (БХ) и тонкослойную (ТСХ). Эти  два вида жидкостной хромотографии просты по технике выполнения, экспрессны, не требуют дорогостоящего оборудования. Разделение этими методами может быть выполнено с использованием различных роматографических систем потому выделяют адсорбционную, распределительную, обращенно-фазавую и ионно-обменную БХ и ТСХ. ТСХ используют чаще чем БХ.

Бумажная и тонкослойная хромотографии  сходны по технике выполнения анализа. В БХ в качестве носителя неподвижной  фазы, например воды используют целлюлозное  волокно бумаги, в методе ТСХ –  различные сорбенты (оксид алюминия, силикогель, целлюлозу и др.), нанесенные на пластинку тонким слоем. В обоих методах используют храмотографические системы жидкость – твердый сорбент и жидкость – жидкость – твердый сорбент, причем в качестве неподвижной фазы используют различные растворители или их смеси, органические и неорганические кислоты. Хроматографическое разделение в плоскостных видах хроматографии, как и в колонке, обусловлено переносом компонентов подвижной фазы вдоль слоя неподвижной фазы с различными скоростями в соответствии с коэффициентами распределения разделяемых компонентов.

Разделяемые компоненты на пластинке или на полоске  бумаги образуют отдельные зоны (пятна), положение которых на хроматограмме  характеризуется величинами R_f- относительной скоростью перемещения компонентов в тонком слое или по бумажной полоске. Экспериментально величину R_f определяют как отношение расстояния Х, пройденного веществом к расстоянию L, пройденному растворителем от старта до линии фронта:

Величина R_f зависит от природы носителя (бумага, активности и природа сорбента, толщина слоя сорбента), качества и природы растворителя, способа нанесения пробы, детектирования, т.е. от техники эксперимента, температуры, некоторых других факторов. В идеальном случае R_f не зависит от концентрации определяемого вещества и присутствия других компонентов.

Получение и анализ плоскостных  хроматограмм на полоске хроматографической бумаге или на тонком слое сорбента проводят острым карандашом стартовую линию на расстоянии 1 см от нижнего края бумаги (пластинки). Пробу наносят микропипеткой на линию старта. Диаметр пятная не должен превышать 2-3 мм; чем меньше пятно, тем лучше разделение. В ТСХ используют восходящий способ получения хроматограмм. Для этого применяют стеклянные, металлические или пластмассовые пластинки, покрытые тонким слоем сорбента (неподвижная фаза) обычно толщиной 100-300 мкм. Исследуемое вещество наносят микропипеткой на стартовую линию, как в БХ и помещают пластинку в камеру, содержащую растворители (подвижная фаза) для разделения компонентов.

Хроматографирование  в БХ и  ТСХ продолжают до тех пор, пока на растворитель не пройдет от линии  старта ≈ 10 см. После этого хроматограмму  вынимают из камеры и подсушивают  на воздухе. Если образуются невидимые зоны хроматограммы проявляют.

 КАЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ

Если на хроматограмме образуются окрашенные зоны, то проводят визуальное наблюдение. Невидимые хроматограммы  проявляют соответствующими реагентами, как правило групповыми. По характерной  окраски образующихся цветных зон судят о составе анализируемой пробы.

Для обнаружения компонентов используют также метод основанный на измерении  величины R_F для стандартного и исследуемого растворов в одной камере, на одинаковых полосках бумаги или на одной и той же полоске. После проявления общих хроматограмм определяют R_F иследуемого и стандартного растворов. Сопоставляя их, делают заключение о наличии в исследуемом растворе тех или иных компонентов.

КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ

Количественный анализ осуществляют непосредственно на хроматограмме (на слое сорбента или на бумаге) или анализируемое вещество (пятно) вымывают из слоя сорбента (с бумажной полоски) после вырезания зоны, и полученный раствор анализируют каким-либо методом.

Непосредственно на хроматограммах количественный анализ можно осуществлять по размеру пятна (полуколичественное определение), спектрофотометрическим методом по спектрам поглощения (фотоденсиметрия) и по спектрам отражения, а также флуориметрическим, рентгенофлуорисцентным и радиометрическим методами. Определение компонентов после смывания можно выполнить, например, спектрофотометрическим, флуориметрическим, атомно-абсорбционным методами. Предел обнаружения дается в виде количества, приходящегося на 1 г сорбента, но лучше всего в виде концентрации в анализируемой пробе. Относительные стандартные отклонения при использовании спектрофотометрических методов анализа не превышают 1%.