Отчет по преддипломной производственной практике

 

λ=750 нм, l=0,5 см

Рис. 6.  Калибровочная кривая по белку (метод Лоури)

 

 

 

             2.4.Расчет удельной активности Na+,K+-АТФазы

 

Собственно удельную активность Na+,K+-АТФазы можно рассчитать по формуле:

                      [Pн] × 3

У.а. =

                     С (белка)  × 0,01

где: [Pн] – концентрация неорганического фосфата, нмоль/мл

С белка  - концентрация белка в 1 г ткани мозга, мг

0,01 – коэффициент разбавления

3 – коэффициент перевода  времени.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 Результаты  и обсуждение.

По результатам измерения образования неорганического фосфата за счет работы Na+,K+-АТФазы (таблицы 5, 7, 9, 11, 13, 15) и содержания белка в гомогенате мозга (таблицы 6, 8, 10, 12, 14,16) были рассчитаны значения удельной активности Na+,K+-АТФазы всех экспериментальных животных и получено среднее значение активности для каждой серии.

В таблице 7 и 17 представлены результаты измерения удельной активности фермента у крыс серии 2 ( выдержанные 1 неделю после введения аллоксана 50 мг/кг внутрибрюшинно). Из таблицы видно, что активность общей и Mg- АТФаз уменьшается при введении аллоксана по сравнению с удельной активностью фермента у интактных крыс (таблица 5). При этом удельная активность Na+,K+-АТФазы оказалась пониженной на 15 %. Полученные эффекты можно объяснить, учитывая ряд литературных данных, объясняющих некоторые процессы, протекающие в организме при диабете. При гипергликемии, вызванной аллоксаном, увеличивается образование активных форм кислорода (АФК), и, возможно, что они непосредственно окисляют сульфгидрильные группы аминокислот Na+,K+-АТФазы.  Также АФК вызывают перекисное окисление липидов, связанных с насосом. Это в свою очередь вызывает повреждение клеток, что приводит к изменению как жирнокислотного состава, так и физико – химические свойства плазмаллемы: микровязкость, текучесть, мембранный потенциал.

В таблице 9 и 17 представлены результаты определения удельной активности фермента у крыс серии 3 (на протяжении 5 дней перорально вводили лактоферрин по 200 мкл). Здесь также наблюдается снижение активности общей и Mg- АТФаз при введении лактоферрина, сопровождающееся уменьшением удельной активности Na+,K+-АТФазы на 5%. В доступной нам литературе не встречается данные, касающиеся изменений активности  Na+,K+-АТФазы при действии лактоферрина.  Но есть  данные о том, что при  взаимодействии клеток  с  гранулированными  препаратами  происходит  контактная  дегрануляция  нейтрофилов  с  появлением  в  плазме повышенных  концентраций  маркерных  белков, одним из которых является лактоферрин,  который  выполняет  функцию эндогенного антибиотика [5]. Показана индуктивная активность контактного взаимодействия с запуском специализированных  процессов  генерации  активных  форм  кислорода.  Как и в случае с аллоксаном, АФК вызывают перекисное окисление липидов, связанных с насосом, что приводит к изменению свойств плазмаллемы [1].

В таблице 11 и 17 представлены результаты определения удельной активности фермента у крыс серии 4 (выдержанные 1 неделю после введения аллоксана 25 мг/кг внутрибрюшинно на протяжении 5 дней перорально вводили лактоферрин по 200 мкл). Здесь наблюдается увеличение активности общей и Mg- АТФаз при введении лактоферрина, сопровождающееся увеличением удельной активности Na+,K+-АТФазы на 12,46 % по сравнению с серией с аллоксаном. 

В таблице 13 и 17 представлены результаты определения удельной активности фермента у крыс серии 5 (на протяжении 5 дней перорально вводили яичный альбумин по 200 мкл). Здесь также наблюдается снижение активности общей и Mg- АТФаз при введении лактоферрина, сопровождающееся уменьшением удельной активности Na+,K+-АТФазы на 10 %.  В доступной нам литературе не встречается данные, касающиеся  изменений активности  Na+,K+-АТФазы при действии яичного альбумина.  Известно, что яичный альбумин вызывает амилоидоз – нарушение белковго обмена, сопровождающееся образованием и отложением в тканях специфического белково – полисахаридного комплекса – амилоида.  В ходе экспериментального амилоидоза у животных было показано, что данным заболеванием страдают старые крысы, так как именно у них наблюдается старческая брадитрофия тканей, котрая позволяет ставить вопрос о моделировании амилоидоза. На молодых крысах амилоидоз не воспроизводится из-за особенностей обмена веществ.

В таблице 15 и 17 представлены результаты определения удельной активности фермента у крыс серии 6 (выдержанные 1 неделю после введения аллоксана 25 мг/кг внутрибрюшинно на протяжении 5 дней перорально вводили яичный альбумин по 200 мкл). Здесь наблюдается снижение активности общей и Mg- АТФаз при введении лактоферрина, сопровождающееся уменьшением удельной активности Na+,K+-АТФазы на 5 %.  В доступной нам литературе не встречается данные, касающиеся  изменений активности  Na+,K+-АТФазы при действии яичного альбумина и аллоксана.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Таблица 5. Расчет удельной активности фермента у крыс серии 1 (контроль)

 

№	D (общая АТФаза)	D (Mg-АТФаза)	D (общ. АТФазы) – D (Mg-АТФазы)	Конц-я Фн, нмоль/мл	Средняя конц-я Фн, нмоль/мл	Конц-я белка, мг/г ткани	Удельная активность Na+,K+-АТФазы
1	0,23	0,17	0,08	10,8	10	34,92	81,89
1	0,24	0,17	0,07	9,7
1	0,25	0,19	0,06	8,3
1	0,25	0,16	0,09	11,2
2	0,27	0,19	0,08	10,8	12,1	44,33	81,89
2	0,29	0,18	0,11	15,2
2	0,30	0,21	0,09	11,2
2	0,28	0,19	0,09	11,2
3	0,27	0,18	0,09	11,2	11,0	40,30	81,89
3	0,28	0,20	0,08	10,8
3	0,25	0,17	0,08	10,8
3	0,25	0,16	0,09	11,2
4	0,27	0,18	0,09	11,2	11,2	41,03	81,89
4	0,25	0,16	0,09	11,2
4	0,26	0,17	0,09	11,2
4	0,27	0,18	0,09	11,2
5	0,28	0,19	0,09	11,2	11,2	41,03	81,89
5	0,29	0,20	0,09	11,2
5	0,27	0,18	0,09	11,2
5	0,24	0,15	0,09	11,2

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Таблица 6. Определение концентрации белка в гомогенате мозга у крыс серии 1  

 

№ пробы	D1	D2	D3	D4	D среднее	Концентрация белка в пробе, мг/мл	Концентрация белка в ткани, мг/г
1	0,2	0,18	0,16	0,18	0,18	67,75	34,92
2	0,23	0,25	0,21	0,23	0,23	86	44,33
3	0,21	0,23	0,19	0,21	0,21	78,18	40,3
4	0,19	0,21	0,23	0,21	0,21	79,6	41,03
5	0,23	0,21	0,21	0,19	0,21	79,6	41,03

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Таблица 7. Расчет удельной активности фермента у крыс серии 2 (выдержанные 1 неделю после введения внутрибрюшинно аллоксана 50 мг/кг)

 

№	D (общая АТФаза)	D (Mg-АТФаза)	D (общ. АТФазы) – D (Mg-АТФазы)	Конц-я Фн, нмоль/мл	Средняя конц-я Фн, нмоль/мл	Конц-я белка, мг/г ткани	Удельная активность Na+,K+-АТФазы
1	0,196	0,128	0,068	9,18	8,61	31,53	69,61
1	0,204	0,145	0,059	8,03
1	0,213	0,162	0,051	6,89
1	0,213	0,136	0,077	10,33
2	0,229	0,162	0,067	9,16	10,61	38,87	69,61
2	0,247	0,153	0,094	12,62
2	0,256	0,179	0,077	10,33
2	0,238	0,162	0,076	10,33
3	0,229	0,153	0,076	10,33	9,74	35,69	69,61
3	0,238	0,17	0,068	9,16
3	0,213	0,145	0,068	9,16
3	0,213	0,136	0,076	10,33
4	0,229	0,153	0,076	10,33	10,33	37,84	69,91
4	0,213	0,136	0,076	10,33
4	0,213	0,145	0,076	10,33
4	0,229	0,153	0,076	10,33
5	0,238	0,162	0,076	10,33	10,33	37,84	69,91
5	0,247	0,17	0,076	10,33
5	0,229	0,153	0,076	10,33
5	0,204	0,128	0,076	10,33

 

 

 

 

 

 

Таблица 8. Определение концентрации белка в гомогенате мозга у крыс серии 2

 

№ пробы	D1	D2	D3	D4	D среднее	Концентрация белка в пробе, мг/мл	Концентрация белка в ткани, мг/г
1	0,18	0,14	0,2	0,12	0,16	61,26	31,53
2	0,18	0,22	0,2	0,2	0,2	75,52	38,87
3	0,16	0,2	0,2	0,16	0,18	69,34	35,69
4	0,21	0,17	0,17	0,21	0,19	73,52	37,84
5	0,21	0,21	0,17	0,17	0,19	73,52	37,84

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Таблица 9. Расчет удельной активности фермента у крыс серии 3 (на протяжении 5 дней вводили перорально по 200 мкл лактоферрина)

 

№	D (общая АТФаза)	D (Mg-АТФаза)	D (общ. АТФазы) – D (Mg-АТФазы)	Конц-я Фн, нмоль/мл	Средняя конц-я Фн, нмоль/мл	Конц-я белка, мг/г ткани	Удельная активность Na+,K+-АТФазы
1	0,219	0,143	0,076	10,26	9,62	35,24	77,8
1	0,228	0,162	0,066	8,98
1	0,238	0,181	0,057	7,7
1	0,238	0,152	0,086	11,54
2	0,257	0,181	0,076	10,26	11,84	43,46	77,8
2	0,276	0,171	0,105	14,11
2	0,285	0,199	0,086	11,54
2	0,266	0,181	0,085	11,54
3	0,257	0,171	0,086	11,54	10,90	39,94	77,8
3	0,266	0,190	0,076	10,26
3	0,238	0,162	0,076	10,26
3	0,238	0,152	0,086	11,54
4	0,257	0,171	0,086	11,54	11,54	42,29	77,8
4	0,238	0,152	0,086	11,54
4	0,247	0,162	0,086	11,54
4	0,237	0,171	0,086	11,54
5	0,266	0,181	0,086	11,54	11,54	42,29	77,8
5	0,276	0,190	0,086	11,54
5	0,257	0,171	0,086	11,54
5	0,228	0,143	0,086	11,54

 

 

 

 

 

 

Таблица 10. Определение концентрации белка в гомогенате мозга у крыс серии 3

 

№ пробы	D1	D2	D3	D4	D среднее	Концентрация белка в пробе, мг/мл	Концентрация белка в ткани, мг/г
1	0,16	0,18	0,2	0,16	0,18	68,37	35,24
2	0,22	0,2	0,22	0,24	0,22	84,31	43,46
3	0,22	0,2	0,2	0,18	0,2	77,48	39,94
4	0,19	0,23	0,21	0,21	0,21	82,04	42,29
5	0,19	0,23	0,21	0,21	0,21	82,04	42,29

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Таблица 11. Расчет удельной активности фермента у крыс серии 4 (выдержанные 1 неделю после введения внутрибрюшинно аллоксана 25 мг/кг и на протяжении 5 дней вводили перорально по 200 мкл лактоферрина)

 

№	D (общая АТФаза)	D (Mg-АТФаза)	D (общ. АТФазы) – D (Mg-АТФазы)	Конц-я Фн, нмоль/мл	Средняя конц-я Фн, нмоль/мл	Конц-я белка, мг/г ткани	Удельная активность Na+,K+-АТФазы
1	0,265	0,173	0,092	12,42	11,64	42,66	79,8
1	0,276	0,196	0,08	10,87
1	0,288	0,219	0,069	9,32
1	0,288	0,184	0,104	13,97
2	0,311	0,219	0,092	12,42	14,36	52,61	79,8
2	0,334	0,207	0,127	17,08
2	0,345	0,242	0,103	13,97
2	0,322	0,219	0,103	13,97
3	0,311	0,207	0,104	13,97	13,19	48,35	79,8
3	0,322	0,230	0,092	12,42
3	0,288	0,196	0,092	12,42
3	0,288	0,184	0,104	13,97
4	0,311	0,207	0,104	13,97	13,97	51,19	79,8
4	0,288	0,184	0,104	13,97
4	0,299	0,196	0,104	13,97
4	0,311	0,207	0,104	13,97
5	0,322	0,219	0,104	13,97	13,97	51,19	79,8
5	0,334	0,230	0,104	13,97
5	0,311	0,207	0,104	13,97
5	0,276	0,173	0,104	13,97