Автор работы: Пользователь скрыл имя, 06 Ноября 2014 в 16:50, реферат
Автор изобретения ПЦР - Кери Муллис. Он в 1993 году получил Нобелевскую премию в области химии. Давно был необходим метод, который позволял бы получить неограниченное число копий исходной ДНК или РНК. В течение нескольких лет ПЦР использовалась как экспериментальный метод. Её широкое внедрение в клиническую практику началось в 80-х - 90-х годах.
Существует несколько разновидностей ПЦР, одной из которых является мультиплексная полимеразная цепная реакция.
1 Введение…………………………………………………………………………3
2 Мультиплексная ПЦР, ее сущность……………………………………………4
3 Требования к праймерам мультиплексной ПЦР …………………………......6
4 Проведение на основе анализа предшествующих антител к HLA ………….6
5 Преимущества мультиплексной ПЦР и приложения…………………………7
6 Применение мультиплексной ПЦР
6.1 Применение в NAT скрининге донорской крови………………………...8
6.2 Применение в диагностике вирусных нейроинфекций………………….9
5 Заключение……………………………………………………………………..13
6 Список использованной литературы…………………………………………14
Ограниченный объем и широкий спектр потенциально
нейроинвазивных вирусов важных клинических
образцов - спинномозговой жидкости и
тканей мозга - одновременно в одном клиническом
образце привел к необходимости использования
анализа ПЦР, допускающего выявление множественных
патогенов в ПЦР.
Так в Read and Kurtz в Великобритании на наличие
четырех основных агентов, вызывающих
вирусные менингиты и энцефалиты - ВПГ-1,
ВПГ-2, энтеровирусы и VZV провели исследование
1683 клинических образцов СМЖ. Результаты
исследования дали положительный результат
в 138 (8.2%) случаях (ВПГ-1 - 25 образцов, ВПГ-2
- 33 образца, энтеровирусы - 51 образец, VZV
- 28 образцов) и более чем одного вируса
у пациентов с энцефалитами и менингитами
подтвердили важность тестирования
В настоящее время, разработаны методики, использующие наборы праймеров для одновременной детекции ВПГ-1 и ВПГ-2,вируса Эпштейн-Барра ,VZV, цитомегаловируса, вируса герпеса 6-го типа в различных комбинациях.*В Финляндии группа исследователей, детектировала различные вирусы в клиническом образце спинномозговой жидкости около 3 тыс. пациентов, используя ПЦР, которые имели заболевания ЦНС, включающие менингит энцефалит, и миелит. Они обнаружили данные о том, что в имеющихся клинических образцах VZV детектировался чаще всего - 29 %, энтеровирусы и ВПГ в 11 % случаев каждый, и в 7% случаев - вирус гриппа. Рассмотрев простую пропорцию этих случаев, мы можем увидеть, что индикация, ВПГ переоценивается, а VZV недооценивается. Эти исследования методом ПЦР показывают необходимость и актуальность использования ПЦР-анализа одновременно на различные патогены, но требуют дальнейшей доработки. Тем не менее, детекция ВПГ остается критической при вирусных энцефалитах, так как имеются способы его эффективного лечения.*Кроме выявления влияния и роли различных этиологических агентов на характер течения заболеваний ЦНС, использование мультиплексного подхода необходимо при клинической диагностике ВИЧ-пациентов с заболеваниями ЦНС вследствие множественного инфицирования герпесвирусами, вызывающих неврологические симптомы у групп этих людей.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Мультиплексная полимеразная цепная реакция, мультипраймерная полимеразная цепная реакция - ПЦР, в которой одновременно используют более одной пары олигонуклеотидных праймеров, что приводит к коамплификации нескольких ДНК-матриц. Эта реакция позволяет экономить время, она используется для экспресс-идентификации инфекционных агентов, например, скрининга сразу по нескольким инфекционным возбудителям, или для исследования состояния нескольких аллельных генов у эукариотических организмов.
Новые разработки в области ПЦР позволили определять сразу несколько патогенных организмов, что улучшило и удешевило метод. В мультиплексном ПЦР анализе амплифицируется более одной целевой последовательности, поэтому он включает несколько пар праймеров. Данный метод поможет сэкономить время без ущерба чувствительности. Со времени своего открытия мультиплексный анализ внедрился во многие дисциплины изучения нуклеиновых кислот, включая количественный анализ, анализ генных делеций, обнаружение РНК. В области диагностики инфекционных заболеваний, техника показала свою ценность в идентификации бактерий, вирусов, паразитов, грибов.
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ