Автор работы: Пользователь скрыл имя, 16 Апреля 2014 в 19:28, реферат
Краткое описание
Методы цитологии: 1)Световая микроскопия Прижизненное изучение клеток: - метод клеточных культур - метод микрохирургии - метод флуоресцентной микроскопии - метод сканирующей и световой микроскопии
Получение клеточных фракций начинается
с общего разрушения клетки, с ее
гомогенизации. Затем из гомогенатов
уже можно выделять фракции. Одним из
основных способов выделения клеточных
структур является дифференциальное
(разделительное) центрифугирование.
Принцип его применения
в том, что
время для осаждения частиц в гомогенате
зависит от их размера и плотности:
чем больше частица или чем она тяжелее,
тем быстрее она осядет на дно
пробирки. Чтобы ускорить
этот процесс оседания,
используют ускорения,
создаваемые центрифугой.
При центрифугировании раньше
всего и при
небольших (1-3 тыс. g)ускорениях осядут
ядра и неразрушенные клетки, при 15-
30 тыс. g осядут крупные частицы,
макросомы, состоящие из митохондрий,
мелких пластид, пероксисом, лизосом
и др., при 50 тыс. g осядут микросомы,
фрагменты вакуолярной
системы клетки. При
повторном дробном
центрифугировании этих
смешанных подфракций можно
получить чистые
фракции. Так, при разделении макросомной
подфракции получают отдельно
митохондрии, лизосомы,
пероксисомы. При разделении
микросом можно
получить фракцию мембран
аппарата Гольджи, фрагментов
плазматической
мембраны, вакуолей, гранулярного
ретикулума. В случаях
более тонкого
разделения фракций используют
центрифугирование в градиенте
плотности
сахарозы, что позволяет хорошо разделить
компоненты, даже незначительно
отличающиеся друг от друга по удельной
массе.
Полученные фракции, прежде
чем их анализировать
биохимическими
способами, необходимо проверить
на чистоту с помощью
электронного
микроскопа.
Создание безклеточных систем.
Получение отдельных клеточных компонентов
дает возможность изучать их
биохимию и функциональные особенности.
Так можно создать бесклеточную
систему для рибосом,
которые будут синтезировать
белок по заданной
экспериментатором информационной
РНК, выделенные митохондрии
в
подобранных условиях могут
осуществлять синтез АТФ,
на выделенном
хроматине при участии соответствующих
ферментов может происходить синтез
РНК и т.д.
В последнее время
применяются бесклеточные
системы для воссоздания
клеточных надмолекулярных структур.
Так, используя очищенные от гранул
желтки, экстракты цитоплазмы яиц земноводных
или яиц морских ежей, можно
получить ядра с ядерной оболочкой из
введенной в эту бесклеточную систему
чужеродной ДНК (например ДНК бактериофага).
Такая ДНК связывается с
белками-гистонами, которые
есть в избытке в
таком экстракте, образуется
хроматин (дезоксирибонуклеопротеид),
который покрывается двойной
мембранной оболочкой, несущей даже ядерные
поры. Такие модельные системы
помогают изучать тонкие,
интимные процессы, например
транспорт
макромолекул из цитоплазмы
в ядро и наоборот.
В цитоплазматических
экстрактах яиц земноводных
и иглокожих такие
ядра могут периодически
делиться путем митоза. Эти модели внесли
огромный вклад в расшифровку
природы регуляции клеточного цикла.
Методы клеточной инженерии.
Базовым методом клеточной инженерии
служит слияние клеток микроорганизмов
или соматических клеток животных и растений.
Растительные и бактериальные клетки
перед слиянием превращают в протопласты.
Последующий отбор полученных гибридных
клеток позволяет отобрать те из них, которые
объединили геномы или фрагменты ДНК родительских
клеток.
Клеточная инженерия позволяет
получать гибридные штаммы, клетки или
даже целые растения, скрещивая между
собой филогенетически отдаленные организмы.
В случае неполного слияния клеток получаются
асимметричные гибриды. Это расширяет
возможности получения новых ценных штаммов
микроорганизмов, сортов с/х растений
и пород с/х животных, для создания которых
ранее использовались методы классической
селекции. Использование достижений клеточной
инженерии позволило разработать технологии
получения безвирусных растений путем
регенерации целого растения из одной
соматической клетки.
Отдельным направлением клеточной
инженерии, имеющим огромное практическое
значение, является получение гибридов,
т.е. клеток, возникающих при слиянии родительских
клеток из одного организма, но с разными
программами дифференциации и развития.
Это могут быть клетки из разных типов
ткани или опухолевые клетки. Наибольшее
развитие гибридомная технология нашла
в получении моноклональных антител (МкАТ).
Слияние в пробирке синтезирующей иммуноглобулин
клетки - В-лимфоцита с клеткой миеломы,
т.е. клеткой злокачественной опухоли,
способной к неограниченному делению,
приводит к получению моноклональной
культуры клеток, производящих уникальное
по специфичности антитело. Такие антитела
(МкАТ) широко используются в медицине
для диагностики различных заболеваний.
На их основе разрабатываются новые подходы
в терапии онкозаболеваний, связанные
с адресной доставкой лекарственных веществ
к клеткам опухоли.
Библиография.
Ю.С. Ченцов. ВВЕДЕНИЕ В КЛЕТОЧНУЮ
БИОЛОГИЮ. ОБЩАЯ ЦИТОЛОГИЯ.