Исследование бактерицидных свойств мёда с помощью культуры E. Coli

Министерство сельского хозяйства  РФ

Новосибирский Государственный Агарный  Университет

Биолого-технологический факультет

Кафедра экологии

 

 

 

 

Курсовая работа на тему:

«Исследование бактерицидных свойств мёда с  помощью культуры E. Coli»

 

 

 

 

 

 

Выполнила студентка 4 курса 2404 группы	Панкова В. А.
Проверил Доцент	Горских В. Г.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Новосибирск 2013 г.

 

Введение

Мёд – это ценный питательный  продукт. Он используется в качестве уникального лекарственного средства. Некоторые особенности, связанные с сохранением и использованием пчелиного меда как пищи и лекарства, дали основание предполагать, что в нем содержатся и противомикробные вещества. Известно, что мед сохраняет свои вкусовые и питательные качества в течение десятилетий и столетий. При раскопках в Египте в гробницах фараонов найдены сосуды с медом, сохранившим свои качества.

Из практики известно, что мед, сохраняемый  в подходящих условиях, даже в открытых сосудах, не плесневеет и не загнивает. Эти особенности меда дали основание  использовать его с древних времён до настоящего времени. Актуальность данной работы обусловлена тем, что объект исследования - мед, всегда пользуется устойчивым спросом у населения не только как продукт питания, но и как лечебное средство.

Цель курсовой работы: оценить бактерицидное качество мёда.

Для достижения цели необходимо решить следующие задачи:

1) Определить количественные  показатели микроорганизмов в 1г меда.

2) Определить качественный состав микроорганизмов.

3) Определить наличие БГКП.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Обзор литературы

Наблюдениями и специальными лабораторными исследованиями установлено, что мед обладает бактерицидными свойствами, т. е. действует губительно на бактерий. Мед «умеет» останавливать рост болезнетворных бактерий и микроорганизмов благодаря входящим в его состав фитонцидам и ферментам. Фитонциды  обладают бактерицидными свойствами, а ферменты участвуют в реакциях окисления, в результате которых высвобождается активный кислород, последний и оказывает антибактериальное воздействие [5].

С.А. Младеновым (1992) был проделан опыт, в котором действие 20% раствора липового меда сравнивалось с действием на различные микроорганизмы (бактерий, простейших, микроскопических водорослей) вытяжки чеснока и растворов антибиотиков (пенициллина, биомицина, стрептомицина), а также других видов монофлерных медов. Раствор липового меда оказывал действие в течение самого короткого времени по сравнению с вытяжкой чеснока и антибиотиками, судя по дегенеративно-некротическим изменениям у subtilys (35 с — для меда, 80 с — для вытяжки чеснока) и у парамеций (9 с — у меда и 55 с — у чеснока). При сравнении разных образцов меда — липового, тимьянового и балканского — самый сильный эффект был у тимьянового.

 Он же (С.А. Младенов) изучал бактериостатическое и бактерицидное действие меда при разведения мясопептонного бульона в отношениях 1:5, 1:10, 1: 20, 1:40, 1:80 и 1:160. Бактериостатическое действие определялось по отсутствию роста культуры в пробирках с растворами меда и проявлению роста микроорганизма после пересева. Из 27 сортов меда, взятых из различных районов Болгарии, 24 сорта проявляли бактерицидное действие в разведении 1:5 по отношению к стрептококку (Streptococcus pyogenes группы А). Наиболее выражены противомикробные свойства меда в отношении грамположительных бактерий: стафилококков, стрептококков, дифтерийных бактерий, бацилл (Вас. anthracis, Вас. mesentericus) — по сравнению с грамотрицательными [6].

Современные доказательства природы  действующих антибиотических начал  меда основываются на изменениях их под  действием физических факторов: света, высокой температуры, способности экстрагироваться различными растворителями, изменяться в различных растворах и т.п. Антибиотическое воздействие объясняется выделением в меде перекиси водорода в результате ферментативной реакции, катализируемой глюкооксидазой. Удалось определить четкую корреляцию между количеством содержащейся в меде перекиси водорода и антибактериальной активностью меда. Этот факт могут объяснить приводимые сведения о том, что образцы меда, содержащие в больших количествах фермент каталазу (которая разрушает перекись водорода), обладают незначительной антибактериальной активностью, и то, что добавление в мед очищенной каталазы ослабляет или почти полностью предотвращает антибактериальную активность в отношении золотистого стафилококка [8].

Противомикробные свойства меда зависят, прежде всего, от его вида, т. е. от вида растения, с которого он собран. Выявились виды меда с более сильным и более слабым антибактериальным действием. Так, относительно Escherichia coli при исследовании диффузионным методом сильнее всего проявляют действие каштановый горный мед и мед из нектара душицы [7].

Химическая природа растительных антибиотиков в меде была установлена С.А. Поправко (1982) обнаружил в монофлерном меде содержание широко распространенного в растительном мире защитного вещества — бензойной кислоты, которая известна как составная часть душистого вещества «росного ладана». Вторым компонентом было вещество, ингибирующее рост растений, — абсцизовая кислота.

Антибактериальным фактором меда, выделяемым самими пчелами, является лизоцим — вещество с ферментативной активностью. Его идентифицировали и в пчелином меде и яде [6].

Польза меда заключается, с одной стороны, в том, что  он удовлетворяет нашу потребность  в минеральных веществах, а с другой стороны, в том, что он помогает при различных заболеваниях. В состав меда входят такие минеральные вещества как: медь, марганец, железо, хлор, кальций, калий, магний, фосфор, натрий и другие. Их содержание варьируется в зависимости от того, каков уровень минеральных запасов почвы в том или ином районе, поскольку именно из почвы минеральные вещества поступают в растения, а из растений – в нектар, из которого пчелы производят мед. Кроме того, в меду содержатся витамин С, рибофлавин и никотиновая кислота. При этом мед выгодно отличается от таких источников витаминов, как свежие фрукты и овощи тем, что уже через сутки количество витаминов во фруктах и овощах сокращается вдвое, в то время как в меду их содержание остается постоянным [2], [4].

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

2.Материалы и методика исследований.

Лабораторная работа на тему «Исследование бактерицидных  свойств мёда».

Цель: оценить бактерицидное качество мёда.

Задачи:

1) Определить количественные  показатели микроорганизмов в 1г меда.

2)Определить качественный  состав микроорганизмов.

3) Определить наличие  БГКП.

Объекты исследования:

1. Мёд, полученный в НСО.
2. Мёд, полученный в Алтайском крае.

Методика исследования:

Количество микроорганизмов  определяли культуральным методом. Метод посева – поверхностный.

Для приготовления взвеси  1 г. мёда вносим стерильной бактериологической петлёй в физраствор и тщательно перемешиваем. Делаем разведения: 1)1:10; 2) 1:100; 3) 1:1000; 4) 1:10000; 5) 1:100000.

С помощью пипетки 2 капли  взвеси вносим  на питательные среды  в чашках Петри и равномерно распределяем шпателем. Подписываем номера образцов и помещаем образцы в термостат при температуре 37 градусов, для прорастания.

Общее количество микроорганизмов  определяем на среде МПА, а БГКП на среде ЭНДО.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Результаты  исследований.

В образце № 1 были обнаружены микроорганизмы, в чашках Петри под №3 и №4 (разведение 1:1000; 1:10000); в образце № 2 проросли чашки под номерами 4 и 5, с разведением 1:10000; 1:100000 соответственно.

В чашке Петри под  номером 3 были обнаружены 246 колоний  бацилл, и 4 колонии бактерий.

В первом образце, в чашке  Петри №4 были обнаружены: бациллы -1

(2 колонии), бациллы - 2 (1колония), бактерии  (67 колоний).

Во 2-м образце в  чашке Петри под номером 4 были обнаружены такие микроорганизмы как: бациллы (83 колонии)  и бактерии (1 колония).

В чашке Петри №5 были обнаружены бактерии – 21 колония.

Бактерии группы кишечной палочки в данных образцах обнаружены не были. Прорастаний на питательной  среде ЭНДО не наблюдалось.

Группы микроорганизмов  определяли по морфологии колоний и клеток. Мазки окрашивали по Грамму [1].

Т.к. в 1мл. содержится 20 капель, то число микроорганизмов рассчитывается по формуле:

N_микр. = m * 20 *10 ͥ , где m - число колоний, i - № разведения.

Микробиологические  показатели качества исследуемого мёда тыс./мл.³

Группы микроорганизмов	1 образец мёда			2 образец мёда
№	3	4	Сред. значение	4	5	Сред. значение
Бациллы	4920	16600	10760	600	0	300
Бактерии	80	200	140	13400	42000	27700
Всего	5000	16800	10900	14000	42000	28000

 

 

Было установлено, что  второй образец мёда наиболее загрязнён (28000 тыс./мл.³), чем первый (10900 тыс./мл.³). Также выявлено, что в первом образце преобладают бациллы (10760 тыс./мл.³), а во втором бактерии (27700 тыс./мл.³). Присутствие бактерий может быть обусловлено попаданием в образец пыли или грязи. А вот наличие бацилл объясняется, возможно, повышенной  влажностью.

Кишечная палочка не обнаружена, это говорит об отсутствии в образцах органических поллютантов.

Для более точного  анализа необходимо провести дополнительные исследования на наличие примесей посторонних веществ. Уточнить условия хранения мёда, его сорт, размещение пасеки, с которой он был взят. Также исследовать физико-химические показатели качества используемых образцов.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Выводы

 

В исследуемых образцах были обнаружены микроорганизмы таких классов как: бациллы и бактерии. В образце №1 бацилл 10700 тыс./мл.³ и 140 тыс./мл.³ бактерий. В образце №2 27700 тыс./мл.³ бактерий и 300 тыс./мл.³ бацилл. Общее число микроорганизмов в первом образце – 10900 тыс./мл.³, во втором - 28000 тыс./мл.³.

БГКП обнаружено не было.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Список литературы

 

1. Морфология микроорганизмов. Ч. 1. Морфология колоний микроорганизмов: метод. указания / сост. Л.А. Литвина; Новосиб. гос. аграр. ун-т. Биолого – технолог. ин – т. – Новосибирск 2008. – 25с.
2. Что мы знаем о мёде? – Новосибирск: Новосибирское книжное издательство, 1991. – 112с.
3. Общая микробиология: уч. – метод. пособие Новосиб. гос. аграр. ун-т. Биолого – технолог. фак. ИЗОП; сост. Л.А. Литвина. – Новосибирск: изд - во НГАУ, 2012 г. – 116 с.
4. Микробиология: метод. разработка к лаб. – практич. занятиям. Ч.4. Методы окрашивания микроорганизмов/ Новосиб. гос. аграр. ун-т. Биолого – технолог. ин – т. – Новосибирск, 2009.
5. http://paseka.pp.ru/pchela-i-zdorove-cheloveka/605-baktericzidnye-svojstva-meda.html

6. http://bashkirskimed.ru/medovi-spravochnik/68-protivomikrobnye-svoystva-meda.html 

7. http://paseka.pp.ru/med-i-medolechenie/199-antibakterialnye-svojstva-meda-.html

8. http://beewoman.ru/svojstva-meda-poleznye-lechebnye-kosmeticheskie/