ФЕДЕРАЛЬНОЕ
АГЕНТСТВО ПО ОБРАЗОВАНИЮ
ПЕНЗЕНСКИЙ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПЕДАГОГИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ
им. В.Г. БЕЛИНСКОГО
Естественно-географический
факультет
Кафедра биохимии
Курсовая
работа
ФЕРМЕНТЫ
КЛИНИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ
Выполнила: студентка
группы БХ-41
Рахматуллина
Равиля Ильясовна
Проверил: к.б.н.,
доцент
Соловьев Владимир
Борисович
Пенза, 2009
Содержание
Введение
1.Энзимопатология
2.Энзимодиагностика
3.Основные
ферменты, которые используются
в клинической диагностике
3.1.Аспартатаминотрансфераза
(ACT)
3.2. Аланинаминотрансфераза
(АЛТ)
3.3. Амилаза
3.4.у-Глутамилтранспептидаза
(ГГТ)
3.5. Креатинкиназа
(КК)
3.6. Лактатдегидрогеназа
(ЛДГ)
3.7. Щелочная
фосфатаза (ЩФ)
4.Энзимотерапия
Заключение
Литература
Введение
Цель работы: ознакомление
с основными ферментами, используемыми
при клинической диагностики и оценка
их информативности.
Предметом исследования являются основные
ферменты клинической диагностики.
Достижения
энзимологии находят все большее
применение в медицине, в частности
в профилактике, диагностике и
лечении болезней. Успешно развивается
новое направление энзимологии-медицинская
энзимология, которая имеет свои
цели и задачи, специфические методологические
подходы и методы исследования.
Медицинская
энзимология развивается по трем
главным направлениям, хотя возможности
применения научных достижений энзимологии
в медицине теоретически безграничны,
в частности в области энзимопатологии,
энзимодиагностики и энзимотерапии.
Энзимодиагностика,
безусловно, является важной и актуальной
для современной медицины и науки,
так как биохимические исследования,
белкового спектра, активности ферментов
в крови и других биологических
жидкостей, которые осуществляются
в этой области, способствуют выявлению
причин, приводящих к различным поталогиям,
и помогают предотвратить или
ослабить их неблагоприятное действие
на организм.
1. Энзимопатология
Область исследований энзимопатологии является
теоретической, фундаментальной частью
патологии. Она призвана изучать молекулярные
основы развития патологического процесса,
основанные на данных нарушения механизмов
регуляции активности или синтеза индивидуального
фермента или группы ферментов. Обладая
высокой каталитической активностью и
выраженной органотропностью, ферменты
могут быть использованы в качестве самых
тонких и избирательных инструментов
для направленного воздействия на патологический
процесс. Как известно, из более чем 5000
наследственных болезней человека молекулярный
механизм развития выяснен только у 2-3
десятков. Считают, что развитие болезни
чаще всего связано с наследственной недостаточностью
или полным отсутствием синтеза одного-единственного
фермента в организме больного. Иногда
болезни называют также энзимопатиями.
Так, галактоземия-наследственное заболевание,
при котором наблюдается ненормально
высокая концентрация галактозы в крови.
Болезнь развивается в результате наследственного
дефекта синтеза фермента гексозо-1-фосфат-уридилтрансферазы,
катализирующего превращение галактозы
в легкометаболизируемую глюкозу. Причиной
другого наследственного заболевания
- фенилкетонурии, сопровождающейся расстройством
психической деятельности, является потеря
клетками печени способности синтезировать
фермент, катализирующий превращение
фенилаланина в тирозин.
Энзимопатология
успешно решает и проблемы патогенеза
соматических болезней; ведутся работы
по выяснению молекулярных основ
атеросклероза, злокачественного роста,
ревматоидных артритов и др. Нетрудно
представить огромную роль ферментных
систем или даже отдельных ферментов,
нарушение регуляции активности
и синтеза которых приводит к
формированию или развитию патологического
процесса.
2.Энзимодиагностика
Энзимодиагностика заключается в постановке
диагноза заболевания (или синдрома) на
основе определения активности ферментов
в биологических жидкостях человека. Энзимодиагностика-развивается
по двум путям.
Один путь-использование
ферментов в качестве избирательных
реагентов для открытия и количественного
определения нормальных или аномальных
химических веществ в сыворотке
крови, моче, желудочном соке и др. (например,
выявление при помощи ферментов
глюкозы, белка или других веществ
в моче, в норме не обнаруживаемых).
Другой путь-открытие
и количественное определение самих
ферментов в биологических жидкостях
при патологии. Оказалось, что ряд
ферментов появляется в сыворотке
крови при распаде клеток (отсюда
их название «некротические ферменты»).
Для диагностики органических и
функциональных поражений органов
и тканей широко применяются отдельные
ферментные тесты, выгодно отличающиеся
от других химических диагностических
тестов, используемых в клинике, высокой
чувствительностью и специфичностью.
Известно около 20 тестов, основанных на
количественном определении активности
ферментов (и изоферментов), главным
образом в крови (реже в моче),
а также в биоптатах (кусочки
тканей, полученные при биопсии). Следует
отметить, что из огромного числа
ферментов (более 3500), открытых в природе
(частично и в организме человека),
в диагностической энзимологии
используется лишь ограниченный набор
ферментов и для весьма небольшого
числа болезней (гепатиты, инфаркт
миокарда, органические поражения почек,
поджелудочной железы, печени и др.).
Доказано, что органы и ткани человека
характеризуются специфическим
ферментным и изоферментным спектром,
подверженным не только индивидуальным,
но и суточным колебаниям. Существует
большой градиент концентрации ферментов
между внутриклеточными и внеклеточными
частями тела. Поэтому любые, даже
незначительные, повреждения клеток
(иногда функциональные расстройства)
приводят к выделению ферментов
во внеклеточное пространство, откуда
они поступают в кровь. Механизм
гиперферментации (повышенное содержание
ферментов в крови) до конца не
расшифрован. Повышение уровня внутриклеточных
ферментов в плазме крови прямо
зависит от природы повреждающего
воздействия, времени действия и
степени повреждения биомембран
клеток и субклеточных структур органов.
В оценке ферментных тестов для диагностических
целей особое значение имеет знание
периода полужизни (полураспада) в
плазме крови каждого из диагностических
ферментов, что делает важным выбор
точного времени для ферментного
анализа крови. Весьма существенным
является также знание особенностей
распределения (топографии) ферментов
в индивидуальных органах и тканях,
а также их внутриклеточной локализации.
3.Основные
ферменты, которые используются
в клинической диагностике
3.1.
Аспартатаминотрансфераза (ACT)
Аминотрансфера́зы (трансаминазы) — ферменты
из группы трансфераз, переносящие группы
атомов, содержащие азот. К этой группе
ферментов относятся такие важные для
клинической лабораторной диагностики
ферменты, как АСТ и АЛТ.
Аспартатаминотрансфераза (ACT; глутамат-оксалоанетат-тран-саминаза;
GOT L-аспартат: 2-оксоглутаратаминотрансфераза,
КФ 2-6.1.1) катализирует реакцию переаминирования
(трансаминирования) между аспартатом
и α-кетоглутаратом:
α -Кетоглутарат
+ L-аспартат ↔ L-глутамат + оксалоацетат.
У млекопитающих
наиболее высокая активность и концентрация
ACT отмечена в печени, нервной ткани,
скелетной мускулатуре и миокарде.
Незначительная активность ACT определена
и в крови здоровых людей. В
большинстве тканей существует как
минимум два изофермента ACT: митохондриальный
изофермент (мАСТ), на всех поддерживающих
средах движущийся к катоду, и растворимый
в цитозоле изофермент ACT (цАСТ), мигрирующий
к аноду. цАСТ состоит из двух идентичных
субъединиц; это димер с молекулярной
массой 93 кДа. мАСТ - тоже димер с
молекулярной массой 91 кДа. Выделение
изоферментов выявило существование
нескольких изоформ со сходной кинетикой,
но выраженными иммунологическими
различиями. Изоферменты ACT имеют некоторое
различие кинетических характеристик:
оптимум действия мАСТ более низкий,
чем цАСТ.
3.2. Аланинаминотрансфераза
(АЛТ)
Аланинаминотрансфераза (АЛТ; глутамат-пируваттрансаминаза;
GPT, L-аланин: 2-оксоглутаратаминотрансаминаза,
КФ 2.6.1.2) катализирует реакцию переаминирования
между L-аланином и α-кетоглутаратом:
L-аланин + α-кетоглутарат
↔ пируват + L-глутамат.
АЛТ - вторая активная
аминотрансфераза, выделенная из тканей
человека. АЛТ присутствует во многих
органах: печени, почках, скелетных
мышцах, миокарде, поджелудочной железе.
Невысокая активность АЛТ отмечена
и в сыворотке крови здоровых
людей. Как и ACT, АЛТ присутствует
в клетках в форме двух изоферментов
- цитозольного и митохондриального,
но последний нестабилен, содержание
его в клетке низкое.
Клиническое
значение определения концентрации
аминотрансфераз.
Повышение активности
аминотрансфераз отмечено при ряде
патологических процессов, в которые
вовлечена печень. Активность ACT и
АЛТ повышена при остром панкреатите,
холецистите, паразитарных заболеваниях,
псориазе, ожогах, применении пропионлактона
как противовирусного средства, перегрузке
организма железом, гепатобилиарной
патологии.
Увеличение
активности аминотрансфераз можно
отметить и у здоровых людей при
диете, богатой белком или содержащей
25—30% сахарозы, а также у доноров.
Большое практическое
значение имеет упоминание лекарственных
препаратов, обладающих
невыраженным гепатотоксическим свойством.
К ним на основании накопленного
многими исследователями опыта
относят аспирин, индометацин, линкомицин,
анаболические стероиды, пероральные
контрацептивы, тестостерон и другие
андрогены, прогестерон, сульфаниламиды,
пиридоксин, барбитураты, препараты
меди и железа, антибиотики ( гентамицин,
ампициллин, тетрациклин).
Активность ACT
в крови возрастает при туберкулезе
легких, септицемии, герпетической
инфекции, вирусном гепатите, опухолях.
Активность ACT снижается при малярии
и беременности, не меняется при
эмболии легочной артерии, пневмониях,
абсцессах легкого, ревматоидном артрите.
Увеличение активности АЛТ отмечено
у пациентов при терапии некоторыми
лекарственными средствами, особенно
антибиотиками, гиполипидемическими
препаратами, кетоацидозе, азотемии.
Исследование
отношения мАСТ/общая активность
ACT также было предложено в качестве
диагностического теста. Отношение
мАСТ/общая активность ACT снижено
при общем гепатите и не изменено
при обтурации желчных протоков,
алкогольном поражении печени, метастазах
в печень. Появление в сыворотке
крови высокой активности мАСТ свидетельствует
о некротических процессах в
гепатоцитах. В остром периоде инфаркта
миокарда повышение активности ACT —
достоверный диагностический тест.
В то же время активность ACT повышена
в значительно меньшей степени,
чем активность КК или ЛДГ. Клинико-морфологические
исследования показали, что динамику
активности ACT можно использовать для
расчета объема поражения при
инфаркте миокарда при небольших
очагах некроза миоцитов столь же
достоверно, как и на основании
активности КК.
Предложено
использовать повышение активности
ACT в сыворотке крови как прогностический
тест при остром лейкозе.
3.3.Амилаза
α-Амилаза [α -(1,4)-глюкан-4-глюканогидролаза,
КФ 3.2.1.1] -фермент, гидролизующий внутренние
1,4 α -гликозидные связи крахмала,
гликогена и других полимеров
глюкозы. В организме человека основные
источники α -амилазы - поджелудочная
и слюнные железы. Многочисленные
изоформы, выделенные из биологических
жидкостей и тканей человека, представляют
собой, вероятно, гетерогенные продукты
посттрансляционных изменений двух
семейств изоферментов амилазы, синтез
которых кодируют два локуса гена
Ату-1, слюнной (С) тип амилазы и
Ату-2, панкреатический (П) тип фермента,
тесно связанные в хромосоме 1.
Изоферменты С и П не имеют
больших различий в аминокислотном
составе. Гель-фильтрацией на сефадексе
во фракции С-амилаз выделены две
изоформы, одна из которых содержит
углеводы. Молекулярная масса изоформ,
содержащих углеводы, 57 кДа, не содержащих
углеводы - 55 кДа. Изоэлектрические точки
основных изоформ С-изоамилаз от
5,5 до 6,5. П-группа изоамилаз имеет
меньшую молекулярную массу (53 кДа)
и не содержит углеводов. Изоэлектрические
точки этих белков варьируют от 5,7
до 7,0.
Убедительным
доказательством того, что П-тип
амилазы образуется только в поджелудочной
железе, служит отсутствие этого изофермента
у лиц с тотальной панкреатэктомией.
С-изофермент α-амилазы, напротив, может
быть синтезирован в разных органах
и тканях. Высокая активность С-амилазы
зафиксирована в ткани фаллопиевых
труб и содержимом кисты яичников.
Специфическая группа изоамилаз, продуцируемых
тканями женских половых органов,
не выявляется в сыворотке крови
или моче здоровых людей; распределение
изоамилаз идентично у мужчин
и женщин. Изоамилазы, принадлежащие
к С-группе, обнаружены и в женском
молоке и раневой жидкости.
Клиническое
значение определения активности амилазы
в сыворотке крови.
Определение
активности α-амилазы в сыворотке
крови - наиболее распространенный тест
диагностики острого панкреатита.
При остром панкреатите активность
фермента в сыворотке крови возрастает
через 3-12 ч после болевого приступа,
достигает максимума через 20—30 ч
и возвращается к норме при
благоприятном течении в пределах
четырех дней. Активность α-амилазы
(диастазы) в моче возрастает через
6-10 ч после подъема активности
в сыворотке и возвращается к
норме чаще всего через три
дня после подъема.
В настоящее
время широко известно, что увеличение
обшей активности α-амилазы неспецифично
для панкреатита и других заболеваний
поджелудочной железы. Клинические
исследования показали, что повышение
активности α-амилазы происходит при
ряде заболеваний, к которым относят
кишечную непроходимость, заболевания
желчных путей, аппендицит, паротит,
внематочную беременность. Чувствительность
и специфичность определения
α-амилазы при диагностике острого
панкреатита возрастают при изменении
границ нормальных значений (дискриминационный
уровень нормы и патологии
— активность1,5—2 раза превышающая
верхние границы нормы). В этом
случае определение активности α-амилазы
наиболее информативны первые сутки
развития острого панкреатита. По мнению
ряда авторов, определение активности
α-амилазы в сыворотке крови
при хроническом панкреатите
не имеет диагностического значения.
У человека α-амилазу,
свободно проходящую через фильтрационный
барьер почечных телец, реабсорбируют
клетки эпителия почечных канальцев
так же, как и другие низкомолекулярные
белки сыворотки крови. Увеличение
активности амилазы в сыворотке
крови может быть вызвано нарушением
элиминации фермента. Пример — состояние,
называемое макроамилаземией, когда
фермент связан с иммуноглобулинами
сыворотки крови и образует макромолекулярный
комплекс. Такой комплекс не фильтруется
в мочу и не может быть удален
при помощи каких-то иных механизмов,
что ведет к значительному
и порой длительному увеличению
активности α-амилазы в сыворотке
крови. Макроамилаземия встречается
у здоровых людей с частотой 1%,
у лиц с гиперамилаземией - с
частотой 2,5%. Макроамилаземия может
быть диагностирована методом ультрацентрифугирования,
ЭФ, гельхроматографии, предложен также
простой тест преципитации комплекса
полиэтиленгликолем.