Лекции по микробиологии

К основным способам микроскопии можно отнести световую микроскопию (с разновидностями- иммерсионная, темнопольная, фазово - контрастная, люминесцентная и др.) и электронную микроскопию. К этим методам можно также отнести авторадиографию (изотопный метод выявления).

2.Микробиологический (бактериологический и вирусологический) - выделение чистой культуры и ее идентификация.

3.Биологический  - заражение лабораторных животных  с воспроизведением инфекционного процесса на чувствительных моделях (биопроба).

4.Иммунологический ( варианты - серологический, аллергологический) - используется для выявления антигенов возбудителя или антител к ним.

5.Молекулярно-  генетический - ДНК- и РНК- зонды,  полимеразная цепная реакция  (ПЦР) и многие другие.

Заключая изложенный материал, необходимо отметить теоретическое  значение современной микробиологии, вирусологии и иммунологии. Достижения этих наук позволили изучить фундаментальные процессы жизнедеятельности на молекулярно- генетическом уровне. Они обусловливают современное понимание сущности механизмов развития многих заболеваний и направления их более эффективного предупреждения и лечения.

 

 

 

Лекция  № 2. Систематика и морфология микроорганизмов.

1. Систематика  микроорганизмов.

Систематика- распределение микроорганизмов в соответствии с их происхождением и биологическим сходством. Систематика занимается всесторонним описанием видов организмов, выяснением степени родственных отношений между ними и объединением их в различные по уровню родства классификационные единицы- таксоны. Основные вопросы, решаемые при систематике (три аспекта, три кита систематики)- классификация, идентификация и номенклатура.

Классификация- распределение (объединение) организмов в соответствии с их общими свойствами (сходными генотипическими и фентипическими признаками) по различным таксонам.

Таксономия- наука о методах и принципах распределения (классификации) организмов в соответствии с их иерархией. Наиболее часто используют следующие таксономические единицы (таксоны)- штамм, вид, род. Последующие более крупные таксоны- семейство, порядок, класс.

В современном  представлении вид в микробиологии- совокупность микроорганизмов, имеющих общее эволюционное происхождение, близкий генотип (высокую степень генетической гомологии, как правило более 60%) и максимально близкие фенотипические характеристики.

Нумерическая (численная) таксономия основывается на использовании максимального количества сопоставляемых признаков и математическом учете степени соответствия. Больщое число сравниваемых фенотипических признаков и принцип их равной значимости затрудняло классификацию.

При изучении, идентификации  и классификации микроорганизмов  чаще всего изучают следующие (гено- и фенотипические) характеристики:

1.Морфологические-  форма, величина, особенности взаиморасположения, структура.

2.Тинкториальные- отношение к различным красителям (характер окрашивания), прежде всего к окраске по Граму. По этому признаку все микроорганизмы делят на грамположительные и грамотрицательные.

Морфологические свойства и отношение к окраску  по Граму позволяют как правило  отнести изучаемый микроорганизм к крупным таксонам- семейству, роду.

3.Культуральные-  характер роста микроорганизма  на питательных средах.

4.Биохимические-  способность ферментировать различные субстраты (углеводы, белки и аминокислоты и др.), образовывать в процессе жизнедеятельности различные биохимические продукты за счет активности различных ферментных систем и особенностей обмена веществ.

5.Антигенные- зависят  преимущественно от химического  состава и строения клеточной стенки, наличия жгутиков, капсулы, распознаются по способности макроорганизма (хозяина) вырабатывать антитела и другие формы иммунного ответа, выявляются в иммунологических реакциях.

6.Физиологические-  способы углеводного (аутотрофы, гетеротрофы), азотного (аминоавтотрофы, аминогетеротрофы) и других видов питания, тип дыхания (аэробы, микроаэрофилы, факультативные анаэробы, строгие анаэробы).

7.Подвижность  и типы движения.

8.Способность  к спорообразованию, характер спор.

9.Чувствительность  к бактериофагам, фаготипирование.

10.Химический  состав клеточных стенок- основные сахара и аминокислоты, липидный и жинокислотный состав.

11.Белковый спектр (полипептидный профиль).

12.Чувствительность  к антибиотикам и другим лекарственным  препаратам.

13.Генотипические (использование методов геносистематики).

В последние  десятилетия для классификации микроорганизмов, помимо их фенотипических характеристик (см. пп.1- 12), все более широко и эффективно используются различные генетические методы (изучение генотипа- генотипических свойств). Используются все более совершенные методы- рестрикционный анализ, ДНК- ДНК гибридизация, ПЦР, сиквенс и др. В основе большинства методов лежит принцип определения степени гомологии генетического материала (ДНК, РНК). При этом чаще исходят из условного допущения, что степень гомологии более 60% ( для некоторых групп микроорганизмов- 80%) свидетельствует о принадлежности микроорганизмов к одному виду (различные генотипы - один геновид), 40- 60%- к одному роду.

Идентификация.

Основные фено- и генотипические характеристики, используемые для классификации микроорганизмов, используются и для идентификации, т.е. установления их таксономического положения и прежде всего видовой принадлежности- наиболее важного аспекта микробиологической диагностики инфекционных заболеваний. Идентификация осуществляется на основе изучения фено- и генотипических характеристик изучаемого инфекционного агента и сравнения их с характеристиками известных видов. При этой работе часто применяют эталонные штаммы микроорганизмов, стандартные антигены и иммунные сыворотки к известным прототипным микроорганизмам. У патогенных микроорганизмов чаще изучают морфологические, тинкториальные, культуральные, биохимические и антигенные свойства.

Номенклатура- название микроорганизмов в соответствии с международными правилами. Для обозначения видов бактерий используют бинарную латинскую номенклатуру род/вид, состоящую из названия рода (пишется с заглавной буквы) и вида (со строчной буквы). Примеры- Shigella flexneri, Rickettsia sibirica.

В микробиологии  часто используется и ряд других терминов для характеристики микроорганизмов.

Штамм- любой конкретный образец (изолят) данного вида. Штаммы одного вида, различающиеся по антигенным характеристикам, называют серотипами (серовариантами- сокращенно сероварами), по чувствительности к специфическим фагам- фаготипами, биохимическим свойствам- хемоварами, по биологическим свойствам- биоварами и т.д.

Колония- видимая изолированная структура при размножении бактерий на плотных питательных средах, может развиваться из одной или нескольких родительских клеток. Если колония развилась из одной родительской клетки, то потомство называется клон.

Культура- вся совокупность микроорганизмов одного вида, выросших на плотной или жидкой питательной среде.

Основной принцип  бактериологической работы- выделение и изучение свойств только чистых (однородных, без примеси посторонней микрофлоры) культур.

2. Морфология  бактерий.

Прокариоты  отличаются от эукариот по ряду основных признаков.

1.Отсутствие  истинного дифференцированного  ядра (ядерной мембраны).

2.Отсутствие  развитой эндоплазматической сети, аппарата Гольджи.

3.Отсутствие  митохондрий, хлоропластов, лизосом.

4.Неспособность  к эндоцитозу (захвату частиц  пищи).

5.Клеточное  деление не связано с циклическими  изменениями строения клетки.

6. Значительно  меньшие размеры (как правило). Большая часть бактерий имеет размеры 0,5- 0,8 микрометров (мкм) х 2- 3 мкм.

По форме  выделяют следующие основные группы микроорганизмов.

1.Шаровидные  или кокки ( с греч.- зерно).

2.Палочковидные.

3.Извитые.

4.Нитевидные.

Кокковидные бактерии (кокки) по характеру взаиморасположения после деления подразделяются на ряд вариантов.

1.Микрококки. Клетки расположены в одиночку. Входят в состав нормальной микрофлоры, находятся во внешней среде. Заболеваний у людей не вызывают.

2.Диплококки. Деление этих микроорганизмов происходит в одной плоскости, образуются пары клеток. Среди диплококков много патогенных микроорганизмов- гонококк, менингококк, пневмококк.

3.Стрептококки. Деление осуществляется в одной плоскости, размножающиеся клетки сохраняют связь (не расходятся), образуя цепочки. Много патогенных микроорганизмов- возбудители ангин, скарлатины, гнойных воспалительных процессов.

4.Тетракокки. Деление в двух взаимоперпендикулярных плоскостях с образованием тетрад (т.е. по четыре клетки). Медицинского значения не имеют.

5.Сарцины. Деление в трех взаимоперпендикулярных плоскостях, образуя тюки (пакеты) из 8, 16 и большего количества клеток. Часто обнаруживают в воздухе.

6.Стафилококки (от лат.- гроздь винограда). Делятся беспорядочно в различных плоскостях, образуя скопления, напоминающие грозди винограда. Вызывают многочисленные болезни, прежде всего гнойно- воспалительные.

Палочковидные формы микроорганизмов.

1.Бактерии- палочки,  не образующие спор.

2.Бациллы- аэробные  спорообразующие микробы. Диаметр  споры обычно не превышает размера (“ширины”) клетки (эндоспоры).

3.Клостридии- анаэробные  спорообразующие микробы. Диаметр  споры больше поперечника (диаметра) вегетативной клетки, в связи с чем клетка напоминает веретено или теннисную ракетку.

Необходимо  иметь в виду, что термин “бактерия” часто используют для обозначения всех микробов- прокариот. В более узком (морфологическом) значении бактерии- палочковидные формы прокариот, не имеющих спор.

Извитые формы  микроорганизмов.

1.Вибрионы и  кампилобактерии- имеют один изгиб, могут быть в форме запятой, короткого завитка.

2.Спириллы- имеют  2- 3 завитка.

3.Спирохеты-  имеют различное число завитков, аксостиль- совокупность фибрилл,  специфический для различных  представителей характер движения  и особенности строения (особенно концевых участков). Из большого числа спирохет наибольшее медицинское значение имеют представители трех родов- Borrelia, Treponema, Leptospira.

Характеристика  морфологии риккетсий, хламидий, микоплазм, более подробная характеристика вибрионов и спирохет  будет дана в соответствующих разделах частной микробиологии.

Данный раздел завершаем краткой характеристикой (ключем) для характеристики основных родов микроорганизмов, имеющих медицинское значение, на основе критериев, применяемых в определителе бактерий по Берджи (Berge).

Таблица. Ключ к  основным группам бактерий

Основные  группы бактерий                                    | Роды бактерий 

1.Изгибающиеся  бактерии с тонкими стенками, подвиж-

ность обеспечивается за счет скольжения- скользя-

щие бактерии

2.Изгибающиеся бактерии  с тонкими стенками, подвиж- Treponema

ность связана с наличием осевой нити- спирохеты       Borrelia, Leptospira

3.Ригидные бактерии с  толстыми стенками, неподвиж-

ные или подвижные благодаря  жгутикам- эубактерии

А. Мицелиальные формы                                         Mycobacterium, Actino-

                                                                         myces, Nocardia, Strep-

                                                                         tomyces

Б.Простые одноклеточные

1/облигатные внутриклеточные паразиты                    Rickettsia, Coxiella,

                                                                          Chlamydia

2/свободноживущие

а. грамположительные:

кокки                                                                   Streptococcus, Staphy-

                                                                           lococcus

неспорообразующие палочки                                      Corynebacterium, Lis-

                                                                           teria, Erysipelothrix

спорообразующие палочки

в т.ч. обязательные аэробы                                        Bacillus

в т.ч. обязательные анаэробы                                     Clostridium

б. грамотрицательные:

кокки                                                                    Neisseria

некишечные палочки

в т.ч. спиральной формы                                            Spirillum

в т.ч. прямые, очень мелкие палочки                            Pasteurella, Brucella,

                                                                            Yersinia, Francisella,

                                                                            Haemophilus, Borde-

                                                                            tella

кишечные палочки

в т.ч. факультативные анаэробы                                   Escherichia, Salmone-

                                                                            lla, Shigella, Klebsiel-

                                                                           la, Proteus, Vibrio

в т.ч. облигатные аэробы                                           Pseudomonas

в т.ч. облигатные анаэробы                                        Bacteroides, Fuso-

                                                                           bacterium

4.Без клеточных стенок                                             Mycoplasma, Urea-

                                                                           plasma

                                                                 

 

3.Строение  бактериальной клетки.

Обязательными органоидами являются: ядерный аппарат, цитоплазма, цитоплазматическая мембрана.

Необязательными (второстепенными) структурными элементами являются: клеточная стенка, капсула, споры, пили, жгутики.

1.В центре  бактериальной клетки находится нуклеоид- ядерное образование, представленное чаще всего одной хромосомой кольцевидной формы. Состоит из двухцепочечной нити ДНК. Нуклеоид не отделен от цитоплазмы ядерной мембраной.