Влияние препарата Полифит на естественную резистентность кур

Диагностический центр:

Микробиологическая  лаборатория осуществляет:

исследование спермы животных (определение общего количества бактерий, коли-титра, определение наличия  анаэробов, синегнойной палочки  и плесневых грибов)

микробиологическое исследование кормов (общее микробное число, определение  анаэробов, коли-титр и др.)

определение стерильности лекарственных средств для инъекций, глазных капель, мазей и т.п.

определение микробиологической чистоты лекарственных форм: таблетки, капсулы, гранулы, растворы, экстракты, сиропы, мази и т.п.

исследование кала и смывов из прямой кишки на дисбактериоз

бактериологический посев  с определением состава микрофлоры и антибиотикочувствительности  микроорганизмов.

Лаборатория биохимического исследования сыворотки крови животных позволяет проводить оценку степени нарушения обмена веществ у всех видов животных путем биохимического анализа крови (ссылка на раздел прайса). Универсальный биохимический анализатор Виталон 400 (Vital Diagnostiks) позволяет в кратчайшие сроки и с использованием малого объема сыворотки крови проводить определение большого количества показателей.

Лаборатория качества кормов и сырья растительного  и животного происхождения оснащена высокоэффективным жидкостным хроматографом «Shimadzu» (Япония), позволяющим в короткие сроки и с высокой точностью определять содержание аминокислот в кормах. С помощью высокоэффективного жидкостного анализотора «Милихром-4» проводится определение содержания витаминов.

Лаборатория иммуноферментного анализа (ИФА) – метод диагностики инфекционных заболеваний, в основе которого лежит реакция «антиген-антитело». Метод ИФА характеризуется высокой достоверностью результатов, быстротой проведения и низкой стоимостью. Автоматическое считывание результатов анализа сводит к минимуму вероятность ошибки. Полностью автоматический анализатор для ИФА «TECAN SUNRIZE» (Австрия) позволяет проводить экспресс-определение микотоксинов в кормах в течение 15 – 20 минут.

С помощью программного обеспечения «BioChek» ИФА-лаборатория  осуществляет экспресс-диагностику  широкого спектра вирусных инфекций птицы.

Лаборатория ПЦР. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) – передовой метод молекулярной диагностики заболеваний, направленный на выявление специфического участка генома возбудителя. Его чувствительность и специфичность достигают 90 – 100%, что позволяет гарантированно обнаруживать в биологическом материале единичные возбудители. Метод ПЦР является "золотым стандартом" для диагностики многих инфекций, проверен временем и тщательно апробирован клинически. ПЦР-лаборатория оснащена современным оборудованием, в том числе амплификатором для Real-Time PCR «Rotor Gene 3000» (Австралия). Метод ПЦР с детекцией конечного продукта в режиме реального времени обладает большей чувствительностью и точностью по сравнению с традиционной ПЦР и позволяет проводить количественные анализы.

Виварий УрНИВИ:

В виварии содержатся животные, которые используются для проведения различных научных исследований по направлению деятельности института.

На момент выполнения исследований, в виварии содержались:

• Куры. Сдержатся в помещении, в клеточной батарее. Вентиляция естественная, кормление комбикормом. Используются как модельные животные для изучения эффективности вакцинации против гриппа птиц А, для изучения влияния  энтеросорбентов на гематологические показатели.
• Гуси. Содержатся в помещении, имеют свободные выгул, кормление комбикормом. Модельная птица для изучения вакцинации против гриппа птиц А, для изучения влияния добавки гермевит на иммунную систему птиц.
• Мыши лабораторные. Содержатся в помещении в клетках, кормление согласно рационам, разработанным  для лабораторных мышей. Используются в опытах по определению острой токсичности комбикорма.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

3.2. Материалы и методы

 

Нами проведены исследования по определению влияния препарата  полифит на гематологические и иммунологические показатели кур. Исследования проведены на базе вивария Уральского научно-исследовательского ветеринарного института.

Опыт проводили на цыплятах кросса «Родонит», начиная  с суточного возраста. Для выявления особенностей морфологии клеток крови, освоения методик исследования, а также выявления возрастных особенностей, определяли гематологические и иммунологические показатели цыплят в возрасте 1, 7, 14, 21, 30 дней.

Для исследования у цыплят до 21 дня кровь брали методом декапитации, у кур, старше 21 дня - из подкрыльцовой вены. Для стабилизации применяли гепарин. В цельной крови определяли содержание гемоглобина (гемометром Сали), количество эритроцитов и лейкоцитов (И.А. Болотников, Ю.В. Соловьев, 1980). Подсчет эритроцитов и лейкоцитов осуществляли одновременно в камере Горяева по методике Фриед и Лукачевой в модификации Болотникова И.А.

Лейкоцитарную формулу  подсчитывали в мазках, окрашенных по Паппенгейму краской Май-Грюнвальда.

Для характеристики клеточного и гуморального иммунитета (Л.С. Колабская, 1980) проводили количественное определение Т- и В- лимфоцитов. Для характеристики клеточного и гуморального иммунитета проводили количественное определение Т- и В- лимфоцитов. Т-лимфоциты кур не имеют рецепторов к эритроцитам других видов животных. Поэтому определение их количества осуществляли с помощью антител, полученных иммунизацией кроликов тимоцитами кур. Для антител определяли оптимальное разведение, дающее максимальный процент розеткообразующих клеток. Мембранными маркерами В-лимфоцитов являются поверхностные иммуноглобулины и рецепторы и С₃ компоненту комплемента. Количественное определение В-лимфоцитов основано на подсчете мононуклеаров, несущих эти маркеры  (Оуэн Р.Л., 1996).

Определяли влияние  препарата полифит на гематологические показатели кур в возрасте 3-х месяцев.

Полифит - многокомпонентная  биологически активная добавка натурального происхождения для профилактики и лечения наиболее распространенных заболеваний желудочно-кишечного тракта, печени, кормовых отравлений у животных. В состав препарата входят экстракты лекарственных растений и высокоэффективный детоксикант - ультрадисперсный оксид кремнезема. Детоксикант освобождает организм животных от токсинов экзогенного и эндогенного происхождения (вирусов, бактерий, микроорганизмов, продуктов извращенного и нарушенного метаболизма). Одно из действий препарата - повышение иммунитета животных. В таких условиях значительно повышается эффективность действия фитосбора. Их воздействие на организм животного наблюдается уже в гомеопатических дозах.

Препарат представляет собой легкий порошок белого, желтоватого или зеленовато-белого цвета с травяным запахом. В воде образует суспензию со слабым травяным привкусом. Стабилен при хранении в герметически закрытой посуде, в защищенном от света месте. Полифит не обладает кумулятивным (накапливающемся) действием, не вызывает привыкания, не оказывает повреждающего действия на наружные и внутренние органы животного.

Цыплятам применяли  полифит орально, при индивидуальном выпаивании, в виде суспензии с  водой, в дозе 0,07 г на голову два раза в день, в течении 4-рех дней (табл. 1).

 

 

 

 

 

Табл. 1. – Схема  опыта по изучению влияния препарата полифит на иммуногематологические показатели цыплят

Группы	Количество  гол.	Применяемый препарат	Схема применения	Способ оценки эффективности
1 группа  Куры, 3 мес.	6	Полифит	Per os, по 0,07 г., 2 раза в день четыре дня подряд, в виде суспензии.	До введения, через  14 дней после,   гематологические, иммунологические исследования
2 группа Куры, 3 мес.	4	Контроль	Физиологический раствор по такой же схеме	-//-

 

Статистическую обработку  цифровых данных проводили на PC Pentium с использованием стандартных прикладных программ Miсrosoft Word и Excel

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

3.3. Результаты собственных исследований

 

3.3.1. Особенности морфологии клеток крови у птиц

 

Форменные элементы крови птиц

 Эритроциты существенно отличаются от красных, кровяных телец млекопитающих тем, что в зрелом состоянии содержат ядро, которое образует двустороннюю выпуклость клетки. Кроме того, они крупнее по размерам и имеют овальную форму. Протоплазма эритроцитов, птиц красится ацидофильно, ядро — базофильно.

Базофилы  - клетки круглой формы. Ядро зрелого базофила имеет несколько сегментов, окрашивается в темно-фиолетовый цвет (молодые клетки имеют ядро округлое, (вытянутое, палочковидное). Протоплазма мелкозернистая. Гранулы темно-фиолетовые.

В крови птиц морфологически и функционально  различают эозинофилы и псевдоэозинофилы (Н. П. Рухлядев, Л. А. Лебедев).

Эозинофилы — круглые клетки. Ядра по форме, как у базофилов. Окрашиваются в темно-фиолетовый цвет с розовыми круглыми гранулами.

Псевдоэозинофилы. Различают: а) с округлыми гранулами (юные формы), которые напоминают эозинофилы, но крупнее их и края гранул кажутся несколько размытыми, окрашиваются в красный цвет; ядра имеют менее рельефный рисунок и окрашиваются слабее, чем у зозинофилов; б) в подавляющем большинстве с палочковидной грануляцией в протоплазме. Гранулы окрашиваются более интенсивно, чем у псевдоэозинофилов с круглыми гранулами, и ядра их более пикнотичны, иногда имеются два ядра, расположенных у полюсов клетки.

Лимфоциты — клетки величиной 5—10 мк. Ядра круглые, окрашиваются в темно-фиолетовый цвет. Протоплазма синего цвета, иногда содержит азурофильные зернышки.

Моноциты — величина клеток 11 —14 мк. Протоплазма их серовато-голубая, окружает ядро широким слоем, азурофильная зернистость — пылевидная. Ядро бобовидной или лопастной формы фиолетово-дымчатого цвета.

В иммунном ответе птиц, как и у млекопитающих, участвуют  два типа лимфоцитов, которые различаются по происхождению, дифференцировке и поиммунологическим функциям. Т - лимфоциты образуются в тимусе из поступающих в него стволовых клеток костного мозга. В процессе пролиферации и дифференцировки под влиянием веществ, выделяемых тимусом, образуются сначала предшественники - лимфоциты тимуса, а из них Т - лимфоциты, поступающие в кровь. В - лимфоциты образуются из стволовых клеток в фабрициевой сумке. Здесь происходит их антигеннозависимая пролиферация и дифференцировка, в результате которой В - клетки, достигнув определенной стадии развития, поступают в кровь и отсюда заселяют периферические лимфоидные органы и ткани. Лимфоциты осуществляют иммунологический надзор и уничтожают генетически чужеродные элементы непосредственно или вырабатывая антитела (И. А. Болотников, Ю.В.Конопатов, 1987).

 

3.3.2. Гематологические и иммунологические показатели у цыплят разного возраста

 

По данным многих исследователей, в том числе  Верещак Н.А. (2007),  существуют возрастные особенности формирования естественной резистентности птиц. Реактивные свойства в растущем организме складываются постепенно и окончательно формируются лишь на определенном уровне общефизиологического созревания. Постнатальный период развития птиц характеризуется состоянием пониженной реактивности организма, выражающейся слабым проявлением неспецифических гуморальных факторов, недостаточной защитной силой кожно-перьевого покрова и слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта. По мере развития реактивность организма птиц постепенно усложняется и совершенствуется, что связано с развитием желез внутренней секреции, формированием определенного уровня обмена веществ, совершенствованием защитных приспособлений против инфекций, интоксикаций и т.д. (Л.Н. Соколова, 1989; А.Ю. Бакулин, 1994; Б.А. Гладков, 1990).

Гематологические и  иммунологические исследования у цыплят разного возраста показали, что содержание отдельных клеток крови различается в зависимости от возраста (табл. 2).

Табл. 2. – Показатели иммунитета цыплят в возрастном аспекте

Показатели	1 сут.	7 дн.	14 дн.	21 день	30 дн.
Эритроциты, млн/мкл	1,86±0,07	2,84±0,71	2,85±0,02	3,45±0,22	2,81±0,08
Гемоглобин, г/л	85,4±0,71	83,64±1,26	80,7±2,16	86,2±0,84	86,4±1,00
Лейкоциты, тыс/мкл	30,5±0,45	41,16±1,9	30,8±0,92	22,6±0,79	29,42±1,12
Псевдоэозинофилы, %	22,2±2,07	20,0±1,58	19,4±0,92	24,0±0,83	26,0±1,13
Эозинофилы, %	3,0±0,4	3,6±0,76	3,6±0,11	4,2±0,22	3,2±0,72
Моноциты, %	2,8±0,43	3,6±0,52	4,2±0,34	3,07±0,56	4,22±0,36
Базофилы, %	0,3±0,11	0,56± 0,25	0,4±0,17	0,6±0,18	0,47±0,21
Лимфоциты, %	71,4±1,36	72,8± 1,21	72,6±2,56	64,0±1,72	70,06±2,36
АКЛ, тыс/мкл	18,6±0,84	20,64±1,3	22,8±0,87	36,2±1,4	27,0±0,94
Т-лимфоциты, %	31,2±1,1	26,4±1,22	29,1±0,68	24,15±0,63	29,3±1,7
В-лимфоциты, %	12,0±1,1	16,34±1,06	14,33±1,86	24,6±1,63	18,64±1,64
ОтношениеТ/В	0,66±0,1	0,78±0,06	0,79±0,03	1,49±0,04	1,02±0,04