Эмфизематозный карбункул

Из проб патологического материала делают мазки-отпечатки и окрашивают по Граму и Муромцеву. В мазках из органов и в отпечатках с печени — единично или попарно расположенные, равномерно или зернисто окрашенные, толстые, крупные, грамположительные, подвижные спорообразующие палочки; перитрихи. В мускулатуре, сохраняемой 2 - 3 дня, встречаются веретенообразные или бесформенные клетки, бледно, едва заметно окрашенные (клеточные тени). Споры располагаются центрально, терминально и субтерминально. Диаметр споры превышает диаметр вегетативной клетки. Грамположительные палочки и споры позволяют предполагать о наличии возбудителя эмфизематозного карбункула.

 

Рисунок 2. Палочки эмкара

3.3 Культуральные свойства

С. chauvoei — строгий анаэроб, при культивировании требует создания вакуума не менее 1,06 кПа. В МПБ и на МПА даже с добавлением глюкозы не растет. Применяют специальные среды, дополнительными ингредиентами которых являются кровь, сыворотка, кусочки печени, мозга, мышц. Наиболее часто используют среду Китта-Тароцци, бульон Мартена, мозговую среду, полужидкий агар, глюкозо-кровяной агар, глюкозный агар с 10–12% бычьей сыворотки. Оптимальные значения рН среды 7,2–7,6; температуры —

36–38 ⁰С; рост возможен и при 14 ⁰С.

В среде  Китта-Тароцци уже через 12–24 ч дает пышный рост с газообразованием и легким помутнением, на 2–3 сут среда светлеет, и на дно выпадает рыхлый беловатый осадок, аналогично растет и в бульоне Мартена.

В глубине  сывороточного агара растет в форме чечевицеобразных или круглых колоний с нежными отростками. На глюкозо-кровяном агаре Цейсслера через 24–48 ч инкубирования вырастают круглые, в виде перламутровой пуговицы, или плоские, в форме виноградного листа, с ровным краем и приподнятым центром колонии, окруженные зоной прозрачного гемолиза.

В бульоне  с кусочками печени или мяса Cl. Chauvoei даёт уже через 12 - 24 часа пышный рост с газообразованием, различно выраженным у разных штаммов, и лёгкое помутнение среды. На вторые - третьи сутки среда в верхней части светлеет, а на дне образуется рыхлый беловатый осадок.

В печёночном бульоне спорообразование у отдельных  штаммов выражено различно: у одних  через 48 - 72 часа наблюдаются только единичные палочки со спорами, у  других - через 24 часа уже много зрелых свободных спор. Из вегетативных форм, наряду с обычными ровно окрашенными, изолированными или расположенными попарно палочками, встречаются, иногда в преобладающем количестве, экземпляры, красящиеся по полюсам или зернисто, и разновидности - удлинённые, неравномерной толщины в разных частях, шаровидные, изогнутые, в форме огурца, груши и т. д., неравномерно окрашенные. Иногда палочки располагаются параллельно.

С возрастом  в культуре появляются бледноокрашенные шаровидные коккоподобные образования, тени клеток, среди которых видны свободные отдельные споры. Культуры издают запах прогорклого масла; гнилостный запах или почернение среды указывают на загрязнение. В свежих 18 - 24-часовых культурах запах выражен слабо.

В мозговой среде наблюдается пышный рост, почернения среды нет (важное отличие от протеолитических микробов, но не от vibr. septique). Через несколько дней в глубоком слое среды отмечается нежное покраснение.

В молоке через 3 - 6 дней роста и даже через 14 дней может наступить свёртывание  без переваривания сгустка. Часто  в молоке рост совсем отсутствует; поэтому  на свежее молоко, богатое белком и  жиром, следует засевать большое количество свежей бульонной культуры (0,5 - 1 мл).

На твёрдых  средах оптимум роста происходит при 5 - 10 мм давления. Мясопептонная  желатина - неблагоприятная среда для Cl. Chauvoei. Засев следует производить большим количеством свежей культуры. Через 3 - 7 дней роста желатина разжижается.

 

3.4 Получение чистой бактериальной культуры

 

Чистую культуру С. chauvoei удается выделить, если посевы делают сразу же после гибели животного. Но, как правило, материал бывает сильно загрязнен посторонней микрофлорой, поэтому применяют ряд методов подавления сопутствующей микрофлоры. Материал можно высушить в термостате, при этом вегетативные клетки гибнут, а споры сохраняют жизнеспособность. Рекомендуют также проводить посев в жидкую элективную среду с добавлением фенола, кристаллвиолета или азида натрия, которые ингибируют постороннюю микрофлору. Иногда материал прогревают при 80⁰ С в течение 15 мин. Исследуемый материал засевают пастеровской пипеткой в среду Китта-Тароцци, в МПБ, на МПА и глюкозо-кровяной агар в чашках (агар Цейсслера). Посевы инкубируют в анаэробных условиях при 37⁰ С в течение 24–48 ч. Со среды Кита-Тароцци для выделения чистой культуры делают дробный посев на чашки с глюкозо-кровяным агаром.

 

3.5 Биохимические свойства

 

С. chauvoei синтезирует протеазу, медленно разжижающую желатин; свернутую сыворотку и яичный белок не разжижает; коагулирует молоко на 3–6-е сутки - сгусток имеет вид мягкой губчатой массы, пептонизация сгустка не происходит. Индол не образует, большинство штаммов

продуцируют незначительное количество сероводорода, нитраты в нитриты  не редуцируют. Каталазу и лецитиназу не вырабатывает. Расщепляет с образованием кислоты и газа глюкозу, сахарозу, лактозу, мальтозу, галактозу, левулезу и не разлагает маннит, салицин, глицерин, дульцит и инулин. Отношение разных штаммов к сахарам непостоянно, однако реакции на сахарозу и салицин являются индикаторными: С. chauvoei в отличие от C. septicum ферментирует сахарозу и не сбраживает салицин.

 

3.6 Токсинообразование и антигенная структура

 

Токсинообразование. Возбудитель эмфизематозного карбункула синтезирует и выделяет экзотоксин. Образование его происходит как в организме, так и при выращивании микроба в жидких питательных средах. Сl. chauvoei продуцирует термолабильный экзотоксин на мартеновском бульоне. В составе токсина обнаружены гемотоксический и некротизирующий компоненты. С. Chauvoei и C. septicum имеют общую летальную и некротизирующую фракцию токсина альфа 1, но фракция альфа 2 у токсина возбудителя эмкара отсутствует. Поэтому антитоксическая сыворотка C. septicum инактивирует гомологичный токсин и токсин С. chauvoei, антисыворотка же С. chauvoei нейтрализует только гомологичный токсин.

Возбудитель эмкара образует также патогенные ферменты: дезоксирибонуклеазу (фактор бета), гиалуронидазу (фактор гамма), токсический компонент — фактор дельта — кислородолабильный гемолизин; лецитиназу не продуцирует. Токсин обладает антигенным свойством и при обработке формалином переходит в анатоксин.

Антигенная  структура. В составе антигенов возбудителя эмфизематозного карбункула выделены термостабильный соматический О-антиген и термолабильный жгутиковый Н-антиген. Они обладают видовой специфичностью и являются общими у всех штаммов. Однако имеются наблюдения, что Н-антиген С. chauvoei, выделяемого от крупного рогатого скота и овец, различен. Кроме того, дифференцирован споровый S-антиген, общий с С. septicum, что приводит к перекрестной агглютинации у этих двух видов клостридий.

Другим диагностическим фактором данного микроба является способность продуцировать агрессины (в организме и на питательных средах). Агрессины можно получить при фильтрации воспалительного экссудата или старой бульонной культуры.  Различают естественные аггрессины - фильтрат сока поражённых мышц, и искусственные аггрессины - фильтрат культуры. Те и другие не ядовиты в очень больших дозах: до 20 мл - для морской свинки и до 100 мл - для овец и крупного рогатого скота.

 

3.7 Серологические реакции

 

Реакция преципитации оказывалась у многих исследователей специфичной при  диагностике эмкара. Однако до стадии практического применения этот ценный по быстроте метод до сих пор не доработан.

Реакция агглютинации. Сыворотка крупного рогатого скота, павшего от эмкара, не содержит агглютининов ввиду быстрого течения заболевания и непригодна для диагностики.

Реакция связывания комплемента непригодна ни для диагностики эмкара, ни для идентификации культур.

 

3.8 Биопроба

 

Проверяют внутримышечным заражением морских  свинок (с внутренней стороны бедра). Гибель наступает через 24–96 ч. Перед  заражением животным вводят 1–2%_ный раствор молочной кислоты или исследуемый растертый материал инъецируют вместе с кварцевым песком или дробленым стеклом. Молочная кислота, песок, стекло вызывают некроз ткани, что способствует более быстрому проникновению в ткани микроба и размножению его в организме. При вскрытии на месте инфекции отмечают геморрагические инфильтраты подкожной ткани и краспочерную окраску мышц. При микроскопическом исследовании отпечатков пораженных органов морской свинки, особенно печени, обнаруживают единичные или парные палочки и отсутствуют длинные нити и цепочки.

  Кролики при заражении Сl. Chauvoei не всегда гибнут, поэтому для диагностики биопроба на кроликах не применяется.

 

 

3.9 Дифференциальная диагностика

 

Эмфизематозный карбункул следует дифференцировать в первую очередь от сибирской язвы и злокачественного отека. При сибирской язве кровь не свертывается, отеки наблюдаются реже, и если они имеются, то не крепитируют. Возбудитель сибирской язвы - характерная споровая палочка, образующая в организме животных капсулу, возбудитель же эмкара - строгий анаэроб, образует клостридиальные формы и споры в организме, капсул не имеет. Злокачественный отек возникает после отелов в результате тяжелых родов, задержания последа, воспаления матки, после аборта. Общие симптомы те же, что и при эмфизематозном карбункуле. Окончательный вопрос о диагнозе решает бактериологическое исследование материала (кусочки пораженных мышц, кровь, отечная жидкость) и опыт на морской свинке. С целью дифференциальной диагностики заражают суспензией из патматериала морских свинок и кроликов. Морские свинки погибают через 18-48 ч при наличии в материале возбудителя эмкара, а кролики - при наличии возбудителя злокачественного отека.

4. УСТОЙЧИВОСТЬ

 

Устойчив возбудитель к дезсредствам. Для дезинфекции при эмкаре используют 10%-й раствор гидроксида натрия, раствор хлорной извести, содержащий 5 % активного хлора, 4%-й раствор формальдегида. Споры возбудителя эмфизематозного карбункула в высушенном состоянии выдерживают действие пара в течение 40–50 мин и погибают при нагревании до 100–105⁰ С в течение 2–12 мин, а при 80⁰ С — в течение 2 ч. Сохраняют жизнеспособность в высушенных мышцах и серозной жидкости в течение многих лет, больше 2 лет — в солевом растворе и более 6 мес. — в загнивающем материале. Также довольно долго могут сохраняться в навозе, в захороненных трупах и в трупах животных, оставленных без захоронения. Несколько лет сохраняют жизнеспособность в почве, в гниющих мышцах, навозе — до 6 мес, на дне водоемов — свыше 10 лет, в солонине — более 2 лет. Сl. chauvoei могут оставаться жизнеспособными в морской воде в течение 6 мес.

 

5. ИММУНИТЕТ  И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА

5.1 Иммунитет

 

К эмфизематозному  карбункулу более чувствителен крупный  рогатый скот в возрасте от 3 месяцев  до 4 лет. Телята до 3-месячного возраста устойчивы в результате пассивного иммунитета, полученного с молозивом  и молоком матери; животные старше 4 лет приобретают иммунитет вследствие иммунизирующей субинфекции. Переболевшие животные приобретают длительный иммунитет.

Для профилактической иммунизации животных применяют  концентрированную гидроокисьалюминиевую  формолвакцину против эмфизематозного карбункула крупного рогатого скота и овец. Вакцину вводят внутримышечно: крупному рогатому скоту в область крупа, овцам — с внутренней поверхности бедра, однократно в дозе 2 мл, независимо от возраста и упитанности животного. Иммунитет наступает через 12—14 дней и продолжается 5 — 6 мес.

Допускается одновременная вакцинация животных против эмфизематозного карбункула и сибирской язвы, против эмфизематозного  карбункула и ящура, при этом вакцины  вводят в разные места тела.

 

5.2 Лечение

 

Лечение не всегда эффективно. Это связано с острым течением инфекционного процесса при этой болезни и возможной быстрой гибелью животных в течение 1-2 дней. На начальном этапе болезни эффективными могут оказаться антибиотики: ампициллин, бициллин, амоксициллин, синулокс, окситетрациклин и другие в дозах, соответствующих инструкциям по их применению. С целью местного антибактериального действия, за счет образования атомарного кислорода применяют 2%-й раствор перикиси водорода и 0,1%-й раствор калия перманганата. В качестве антибактериального препарата применяют 3-5%-й раствор фенола. Растворы инъецируют в толщу карбункула или вокруг него. С целью проведения детоксикационной терапии внутривенно вводят 10-30%-ый раствор натрия тиосульфата или 40%-й раствор гексаметилентетрамина. Проводят симптоматическое лечение.

 

 

 

5.3 Биопрепараты

 

А) Концентрированная гидроокисьалюминиевая формолвакцина против эмфизематозного карбункула крупного рогатого скота и овец. Она представляет собой формалинизированную (инактивированную формалином) бульонную культуру возбудителя эмкара, осажденную гидратом окиси алюминия. Применяют в неблагополучных хозяйствах, не позднее, чем за 14 дней до выгона на пастбище. Крупный рогатый скот прививают с 3-месячного возраста до 4 лет. Телята, привитые в возрасте до 6 месяцев, подлежат прививкам повторно по достижении ими этого возраста. Овцы прививаются с 6 месяцев и старше. Доза крупному рогатому скоту и овцам - 2 мл внутримышечно (всем возрастным группам) однократно. Иммунитет наступает через 14 дней и продолжается до 6 месяцев. Не рекомендуется применять вакцину животным после кастрации и спиливания рогов, а также в течение 7-10 дней после отела и последнего месяца стельности (суягности).

 Б) Живая концентрированная гидроокисьалюминиевая вакцина против эмфизематозного карбункула крупного рогатого скота. Вакцина вводится однократно и обеспечивает продолжительность иммунитета до 12 месяцев.

В) Вакцина ассоциированная живая (жидкая) против сибирской язвы, эмфизематозного карбункула и лептоспироза крупного рогатого скота.

Г) Гипериммунная  сыворотка против эмкара  была впервые получена Муромцевым в 1931 г. от овец. Эта сыворотка, введённая морским свинкам подкожно в дозе 0,5 мл, предохраняла их через 24 - 48 часов от последующего заражения минимальной смертельной дозой вируса.