Клетки иммунной системы

Онкология

• количественный анализ внутриклеточных компонентов (ДНК)
• анализ стадий клеточного цикла
• выявление анеуплоидного клона
• определение пролиферативной активности анеуплоидного клона
• определение специфических маркеров
• позволяет проводить наблюдение пациентов, входящих в группу риска
• оценка состояния иммунной системы:
• оценка клеточного звена иммунитета (определение субпопуляций лимфоцитов)
• оценка функциональной состоятельности иммунокомпетентных клеток (NK тест, фагоцитарный тест и т. п.)

Цитология

• определение цитоморфологической принадлежности клетки размер, соотношение ядро/цитоплазма, степень асимметричности и гранулярности клеток
• оценка активности внутриклеточных ферментов с помощью флуорогенных субстратов
• определение экспрессии поверхностных антигенов
• анализ стадий клеточного цикла
• измерение физиологических параметров клетки (внутриклеточный pH, концентрация свободных ионов Ca2+, потенциал наружной клеточной мембраны)

Гематология

• анализ субпопуляционного состава клеток периферической крови
• подсчет ретикулоцитов, анализ тромбоцитов по специфическим маркерам
• дифференциальная диагностика лимфопролиферативных заболеваний и реактивных лимфоцитозов
• диагностика лимфопролиферативных заболеваний
• диагностика острых лейкозов
• оценка минимальной резидуальной болезни

Фармакология

• измерение экспрессии маркеров
• измерение активности внутриклеточных ферментов
• определений стадий клеточного цикла в рамках изучения механизмов воздействия различных биологически активных веществ на клеточном уровне

ПРАКТИКУМ ПО ПРОТОЧНОЙ ЦИТОФЛУОРИМЕТРИИ

 Иммунофенотипирование  лимфоцитов крови человека

   Термин “лимфоциты” объединяет незернистые лейкоциты крови (агранулоциты), образующиеся из единого предшественника (лимфобласта), развивающиеся в лимфоидной ткани и циркулирующие в крови и лимфе. Выделяют три основных типа лимфоцитов: Т-клетки (Т-лимфоциты), В-клетки (В-лимфоциты) и NK-клетки (естественные киллеры). В совокупности они составляют 25–30% всех лейкоцитов (1500–2200 в 1 мм3крови).

Различение типов лимфоцитов осуществляется на основании анализа фенотипа – набора белков (маркеров), экспрессируемых на поверхности клетки и участвующих в выполнении функций, специфических для каждой субпопуляции лимфоцитов.

С целью систематизации известных поверхностных молекул лейкоцитов введена номенклатура CD (от англ. “cluster of differentiation” – кластер дифференцировки), в соответствии с которой каждой молекуле, независимо от ее химической структуры, присвоен определенный номер. Наличие молекулы на поверхности обозначается как “+”, отсутствие “–”. Некоторые CD молекулы, используемые для идентификации основных групп лимфоцитов, приведены:

- CD45 – тирозиновая протеинфосфатаза, участвующая в работе сигнальных путей клетки;

- CD3 – белок-корецептор  антиген-распознающего Т-клеточного  рецептора;

- CD4 – трансмембранный  гликопротеин, участвующий в распознавании  молекул антигена, связанных с  антиген-презентирующим комплексом II класса. Данный белок, кроме Т-лимфоцитов, экспрессируется на моноцитах, макрофагах, дендритных клетках и т.д.;

- CD8 – трансмембранный  гликопротеин, участвующий в распознавании  молекул антигена, связанных с  антиген-презентирующим комплексом I класса;

- CD19 – белок в составе корецепторного  комплекса антиген-распознающего  В-клеточного рецептора. Присутствует  на B-лимфоцитах с самых ранних  этапов развития и теряется  на этапе их созревания в  плазматические клетки;

- CD56 – гликопротеин, участвующий в клеточной адгезии и экспрессирующийся на поверхности нейронов, глиальных клеток, клеток скелетной мускулатуры и NK-клеток;

- CD16 – рецептор для Fc-фрагмента иммуноглобулинов G, присутствующий на поверхности части NK-клеток, полиморфноядерных нейтрофильных лейкоцитов, моноцитов и макрофагов.

CD молекулы, используемые для идентификации  основных групп лимфоцитов

Группа                                                                           CD маркеры

Лейкоциты                                                                   CD45+

Т-лимфоциты                                                               CD45+, CD3+

Т-хелперы                                                                    CD45+, CD3+, CD4+

Т-киллеры                                                                     CD45+, CD3+, CD8+

В-лимфоциты                                                                CD45+, CD3-, CD19+

NK-клетки                                                                      CD45+, CD3-, CD56+, CD16+/-

Так как большинство CD присутствуют на нескольких типах клеток, определение только одного CD не позволяет точно определить тип клетки. Для точной идентификации типа клетки необходимо определение сочетания, или комбинации, маркеров.

Для определения фенотипа клеток используется метод иммунофенотипирования: клетки окрашиваются специфичными к CD антителами, конъюгированными с флуоресцентными красителями. Связывание маркированных антител с клеткой определяется тем, какие именно CD она экспрессирует. После такой окраски проводится анализ флуоресценции клеток с помощью проточной цитофлуориметрии.