Антибиотики

Антибиотики —  самый большой класс фармацевтических соединений, синтез которых осуществляется микробными клетками. К этому же классу относятся противогрибковые агенты, противоопухолевые лекарства  и алкалоиды. В 1980 г. мировое производство антибиотиков составляло примерно 25000 т, из них 17000 т — пенициллины, 5000 т — тетрациклины, 1200 т — цефалоспорины  и 800 т — эритромицины. В 1945 г. Бротзу из Института гигиены в Кальари (Сардиния) выделил из пробы морской  воды плесень Cephalosporium acremonium, синтезирующую  несколько антибиотиков; один из них, цефалоспорин С, оказался особенно эффективен против устойчивых к пенициллину  грамположительных бактерий.

Из нескольких тысяч  открытых антибиотиков львиная доля принадлежит актиномицетам. Среди  актиномицетов наибольший вклад  вносит род Streptomyces, включая тетрациклины (один только вид Streptomyces griseus синтезирует  более пятидесяти антибиотиков). Наиболее распространенными с коммерческой точки зрения оказались пенициллины, цефалоспорины и тетрациклины.

Начиная с середины 1960-х гг. в связи с возросшей  сложностью выделения эффективных  антибиотиков и распространением устойчивости к наиболее широко применяемым соединениям  у большого числа патогенных бактерий исследователи перешли от поиска новых антибиотиков к модификации  структуры уже имеющихся. Они  стремились повысить эффективность  антибиотиков, найти защиту от инактивации  ферментами устойчивых бактерий и улучшить фармакологические свойства препаратов. Большинство исследований было сосредоточено  на пенициллинах и цефалоспоринах, структура которых включает четырехчленное b-лактамное кольцо. Добавление к b-лактамному кольцу метоксильной (СН₃О)-группы привело к появлению цефамицинов, близких к цефалоспоринам и эффективных как против грамотрицательных, так и против пенициллиноустойчивых микробов. Полусинтез состоит в замене химическим путем одной боковой цепи b-лактамного кольца на другую в полученной ферментацией молекуле. Устойчивость к пенициллинам и цефалоспоринам связана с наличием ферментов, так называемых b-лактамаз, которые широко распространены среди бактерий, актиномицетов, цианобактерий и дрожжей. Так как гены, кодирующие эти ферменты, находятся в составе плазмид, устойчивость может передаваться при переносе плазмид от одного бактериального штамма к другому. Исследователи фирмы «Мерк, Шарп и Доум» открыли новый класс b-лактамных антибиотиков, тиенамицины, продуцируемых Streptomyces cattleya. Тиенамицины чрезвычайно эффективны против грамположительных и грамотрицательных бактерий, а также способны ингибировать b-лактамазы, что значительно повышает возможности этих антибиотиков. К ингибиторам b-лактамаз относятся также клавулановая и оливановая кислоты, идентифицированные исследователями английской фармацевтической компании «Бичем». Компания выпустила новый антибиотик, аугментин, который представляет собой комбинацию b-лактамного антибиотика амоксициллина и клавулановой кислоты.

Антибиотики вырабатываются в результате совместного действия продуктов 10—30 генов, поэтому практически  невозможно обнаружить отдельные спонтанные мутации, которые могли бы повысить выход антибиотика с нескольких миллиграммов на литр в штамме дикого типа до 20 г/л и более пенициллина  или тетрациклина в промышленных штаммах Penicillium chrysogenum или Streptomyces auerofaclens. Эти высокопродуктивные штаммы были получены в результате последовательных циклов мутагенеза и селекции. В  результате мутаций появились новые  вторичные метаболиты, в том числе 6-деметилхлортетрациклин и 6-деметилтетрациклин. Определенные мутанты, так называемые идиотрофы, способны синтезировать  только половину молекулы антибиотика, а среда должна быть обогащена  другой ее половиной. Такая форма  мутационного биосинтеза привела к открытию новых производных антибиотиков, среди них принадлежащие к аминоциклитольной группе.

Число противоопухолевых  веществ микробного происхождения  довольно ограниченно. Блеомицин, выделенный Умезавой с сотр. в Токийском институте  микробной химии из культур Streptomyces verticilliis, представляет собой гликопептид, который действует, разрывая ДНК  опухолевых клеток и нарушая репликацию ДНК и РНК. Другая группа противоопухолевых  агентов создана на основе комбинации аминогликозидной единицы и молекулы антрациклина. Недостатком обоих  соединений является их потенциальная  опасность для сердца.

В медицине применяют  также аминокислоты, например, аргинин. В сочетании с аспартатом или  глутаматом он помогает при заболевании  печени. K-Na-аспартат снимает усталость  и облегчает боли в сердце, его  рекомендуют при заболевании  печени и диабете. Цистеин защищает SH-ферменты в печени и других тканях от окисления и оказывает детоксицирующее  действие. Он проявляет также защитное действие от повреждения, вызываемых облучением. Дигидроксифенилаланин и D-фенилаланин  эффективны при болезни Паркинсона. Из полиаминокислот получают хороший  материал для хирургии.

В медицине также  используют зеленую водоросль Scenedesmus. Ее культивируют в жидкой питательной  среде (установки дают до 80 тонн водорослей в год), извлекают и проводят экстракцию этиловым спиртом. Биомассу отделяют и  подвергают ферментативному гидролизу  щелочной протеазой. Около 50% белков при  этом распадается до пептидов. Гидролизат содержит почти все незаменимые  аминокислоты, представляет собой порошок  желтовато-зеленого цвета с приятным запахом и вкусом. Используется этот продукт для быстрого восстановления организма, а также как компонент  косметических средств. Если вместо обработки этанолом провести двукратную экстракцию дистиллированной водой, а  затем высушить, то получается порошок  светло-желтого цвета. Его используют как биостимулятор и готовят  из него препараты для лечения  плохо заживающих ран.

Еще в начале 90-х  годов появились статьи, в которых  рассматривались перспективы использования  сапротрофной микрофлоры как продуцента биологически активных веществ (БАВ). Предполагается вводить в организм сапрофитные  микроорганизмы, которые могли бы жить в условиях симбиоза с нормальной микрофлорой организма. Вещества, вырабатываемые бактериальными штаммами включаются в  систему биохимических процессов  организма. В случае нарушения нормального  биохимического статуса организма  они корректируют его, а при патологическом процессе – задерживают его или  способствуют прекращению. Такое введение получило название «микробиологическая  подсадка». К 1992 году было описано уже  более 50 таких штаммов и проанализирован  диапазон биологических эффектов секретируемых  БАВ.

Для лечения широкого спектра заболеваний (бактериальные  инфекции кишечника, дыхательных путей, гнойных инфекций, аллергий) успешно  применяются штаммы Bacillus subtilis (препарат «Бактисубтил», например, используют при  лечении диареи). Штаммами E. coli лечат  ряд кишечных заболеваний. БАВ, секретируемые  сапротрофами, могут регулировать ферментативные процессы в организме и вступать во взаимодействие с поступающими в  организм ксенобиотиками. Штаммы можно  получать непосредственно от человека, тогда они будут представлять его естественную микрофлору.

Можно целенаправленно  выводить лабораторные мутантные штаммы, в том числе методами генной инженерии  и вводить их в организм. Способы  введения могут быть различны: капсулы, растворимые в кишечном соке, культуры штаммов-продуцентов на пленочной основе, в виде свечей, а при легочных заболеваниях – в виде аэрозолей.

Новым направлением в медицине является использование  ферментных препаратов типа «контейнер», изготовление которых стало возможным  появлению и совершенствованию  методов иммобилизации веществ. Эти препараты представляют собой  микросферы с более или менее  твердой и проницаемой оболочкой. Назначение этих лекарственных препаратов различное. Первым типом «искусственных клеток» следует назвать микрокапсулы. Фермент, находящийся внутри оболочки, не контактирует с жидкостями и тканями  организма, не разрушается протеиназами, не ингибируется, не вызывает иммунного  ответа организма. Основное достоинство  микрокапсул заключается в том, что их можно имплантировать в  нужное место, например в непосредственной близости от опухоли. При этом микрокапсула с соответствующим содержанием  будет перерабатывать метаболиты, необходимые  для роста опухолевой ткани, и  эта ткань не будет развиваться. Капсулы могут содержать микроскопические участки тканей. Например, имеются  экспериментальные данные по созданию депо инсулина путем имплантации  микрокапсул, содержащих островки Лангерганса, синтезирующие в поджелудочной  железе инсулин. Известно, что терапии  диабетических заболеваний уделяется  много внимания. Имплантация лекарственного начала избавила бы пациентов от ежедневных инъекций инсулина. Следует учитывать, что микрокапсулы, вводимые в кровь, могут забивать кровеносные сосуды и, следовательно, являться причиной образования  тромбов. Однако эффективность микрокапсул  при использовании их в виде колонок  для диализа в аппарате «искусственная почка» несомненна. При этом объем  аппаратов и, соответственно, количество необходимых и очень дорогих  растворов резко сокращается. Например, для микрокапсулированной «искусственной почки» требуется колонка объемом  всего 30 мл, которая работает почти  в 100 раз быстрее обычного аппарата. Развитие такой техники сдерживается пока высокой стоимостью, а также  необходимостью использовать уже существующую тоже очень дорогую технику. Вероятно, ферментные реакторы на микрокапсулах  будут применяться для деградации недиализуемых материалов.

Внутрь микрокапсул  могут быть включены магнитные частицы. В этом случае извне подводят магнитное  поле и препарат удерживают вблизи органа-мишени.

В ряде случаев  используются высокомолекулярные соединения, растворимые в определенных условиях и сохраняющие высокую прочность  оболочек в других. Так ведет себя ацетилфталилцеллюлоза, микрокапсулы из которой интактны в желудочном соке и растворяются в кишечнике, освобождая содержимое. Сейчас интенсивно исследуются свойства микрокапсул, стенка которых состоит из оболочек эритроцитов. Содержимое эритроцитов  удаляется, а «тень» заполняется  ферментом. Серьезные успехи достигнуты при лечении аспарагин-зависимых  опухолей препаратами аспарагиназы в оболочках эритроцитов.

Используются оболочки и других клеток. Так, описаны лекарственные  препараты, включенные в оболочки макрофагов. Последние имеют тенденцию накапливаться  в очагах воспалений, а следовательно, могут транспортировать туда как  низко-, так и высокомолекулярный лекарственный препарат. Существенной положительной стороной «теней»  клеток в качестве носителя является их полная совместимость с организмом пациента, поскольку этот носитель готовят на основе клеток, выделенных из крови пациента, и возвращают их ему же с новым содержимым. Задача введения лекарственного препарата  в клетки может быть решена путем  создания контейнеров-переносчиков типа липосом или мицелл. Оболочка липосомы представляет собой однослойную  или многослойную поверхность, образованную, в свою очередь, бислойной структурой, созданной соединениями, имеющими два гидрофобных, достаточно протяженных участка и гидрофильную группу. Гидрофобные концы слипаются между собой и образуют пленку, обе стороны которой гидрофильны. Липосома, специфически или неспецифически адсорбировавшись на клетке, может быть поглощена ею путем фагоцитоза, и фермент внутри высвобождается.

Хорошо известно, что протеиназы, расщепляя денатурированные белки, способствуют очищению ран, и  следовательно, их заживлению. В этом направлении в клинической практике с помощью иммобилизованных протеиназ  сделано многое. В качестве носителей  для иммобилизации протеолитических ферментов наиболее употребимы волокнистые  материалы на основе целлюлозы, поливинилового спирта, солей альгиновой кислоты, полиамидное  и коллагеновое волокно. Готовят  нити, в которые при формовании включают фермент и используют их в качестве шовного материала. Сравнительный  анализ действия нативных и иммобилизованных протеиназ (в основном химотрипсина, трипсина, коллагеназы) показал, что  уже на 2—4-й день рана очищается  от некротических масс и по крайней  мере вдвое быстрее наступает  грануляция. Убедительные результаты получены при лечении трофических  язв, лучевых язв кожи. Особенно эффективны иммобилизованные протеиназы при предоперационной подготовке и после пластических операций. Иммобилизованные протеолитические ферменты с большим успехом применяются  в лечении гнойных заболеваний  легких и плевры.  

Волгоград 2011г.

Содержание

Введение………………………………………………………………………….….3

1. Технология  получения антибиотиков…………………………………………...4

1.1 Общие сведения о производстве  антибиотиков…………………………….....4

1.2 Стерилизация питательных сред……………………………………………….5

1.3 Подготовка посевного материала……………………………………………....7

1.4 Методы культивирования продуцентов  антибиотиков……………………….8

1.5 Ферментеры……………………………………………………………………...9

1.6 Развитие продуцента антибиотика  в ферментерах……………………………11

1.7 Предварительная обработка культуральной  жидкости, выделение и          химическая очистка антибиотиков……………………………………………..13

1.8 Сушка, контроль и расфасовка  препарата……………………………………..15

2. Применение  антибиотиков……………………………………………………….16

Заключение…………………………………………………………………………...18

Список  использованных источников……………………………………………….19  
  
  
  
  
  
  
  
  
  
  
  
  
  
    

Введение          

  Антибиотики - самый большой класс  фармацевтических препаратов, которые  синтезируются микроорганизмами. Некоторые  из антибиотиков используют в  сельском хозяйстве против различных  сельскохозяйственных вредителей, другие - в медицинских целях.         

  В настоящее время микроорганизмы  продуцируют десятки видов соединений - аминокислот, антибиотиков, белков, витаминов, липидов, Микробиологический  синтез различных веществ играет  ключевую роль в биотехнологическом  производстве. Начало современной  промышленной микробиологии было  положено в 40-х годах, когда  наладили производство пенпциллинов  методами ферментациинуклеиновых  кислот, полисахаридов, пигментов,  сахаров, ферментов и т. д.   

После установления высоких лечебных свойств  первого антибиотика — пенициллина сразу же возникла задача организации производства его в больших количествах. На первом этапе промышленное получение этого препарата носило примитивный, экономически нерентабельный характер. Выращивание продуцента антибиотика осуществлялось на средах, находящихся в небольших сосудах при поверхностном культивировании гриба. Процесс развития гриба продолжался 8—10 суток. Такой способ культивирования гриба при большой затрате труда давал низкий выход антибиотика, и себестоимость препарата была очень высокой. Безусловно, такое получение антибиотика не могло удовлетворить запросы медицины. В результате был предложен метод глубинного выращивания гриба в ферментерах или танках — при продувании воздуха и перемешивании культуральной жидкости. [1]