Валидационная оценка методик анализа левомицетина в глазных каплях

 

ПРЕЦИЗИОННОСТЬ  ( PRECISION)

  Прецизионность (воспроизводимость) –выражает степень близости (или степень разброса) результатов для серии измерений, выполненных на различных пробах одного и того же образца. По существу это мера суммы случайных ошибок. Данная характеристика бывает трех уровней:

- сходимость (повторяемость);

- внутрилабораторная прецизионность;

- межлабораторная прецизионность.

  Однако, для целей фармацевтического анализа бывает достаточно только первых двух уровней.

  Сходимость (repeatability) характеризует прецизионность методики при ее выполнении в одних и тех же условиях (в частности, одним и тем же аналитиком или группой аналитиков) в течение небольшого промежутка времени.

Внутрилабораторная прецизионность (intermediate precision) различные аналитики, различное оборудование и т. д.

 Межлабораторная прецизионность (воспроизводимость (reproducibility)) характеризует прецизионность в межлабораторном эксперименте (совместные исследования, обычно применяемые для стандартизации метода) [7].

 

ПРАВИЛЬНОСТЬ (ACCURACY)

  Правильность или точность (accuracy, trueness) характеризует степень соответствия между известным истинным значением или справочной величиной и значением, полученным по данной методике.Правильность складывается из случайных составляющих и общей систематической погрешности. Однако, главным фактором, определяющим правильность, является значение систематической погрешности [7].

 

ПРЕДЕЛ  ОБНАРУЖЕНИЯ (DETECTION LIMIT)

  Предел обнаружения (detection limit) для конкретной аналитической методики представляет собой минимальное количество анализируемого вещества в образце, которое может быть обнаружено (при этом не обязательно должно быть определено точное значение) [7].

 

РОБАСТНОСТЬ (ROBUSTNESS)

  Это способность аналитической методики не подвергаться влиянию малых, задаваемых (контролируемых) аналитиком изменений в условиях выполнения методики. Робастность является показателем надежности методики при ее использовании в указанных условиях [7].

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Глава 2. Валидационная оценка методик анализа левомицетина в глазных каплях.

 

Состав лекарственного средства:

Раствора левомицетина 0,25%              10 мл

Натрия хлорида                                       0,09 г

 

 

2.1 Валидационная оценка методов качественного и количественного определения по показателю специфичность

Для установления специфичности  согласно прописи были приготовлены модельные смеси, содержащие:

1.левомицетин + натрия хлорид ( 0,025 г левомицетина, 0,09г натрия хлорида, воды для инъекций до 10 мл);

2.левомицетин (0,025 г левомицетина, воды для инъекций до 10 мл);

3.натрия хлорид(0,09г натрия хлорида, воды для инъекций до 10) [7].

 Далее была проведена  валидационная оценка методик качественного анализа лекарственного средства по показателю специфичность.

Для установления специфичности  следует убедиться в отсутствии положительного эффекта реакции  на сопутствующие вещества: другие ингредиенты лекарственного средства и вспомогательные вещества.

В модельной смеси 1, с помощью качественных реакций доказана подлинность левомицетина и натрия хлорида в лекарственном средстве:

 

Аналитический эффект: желтое окрашивание.

 

NaCl + AgNO3           AgCl    + NaNO3

 

Аналитический эффект: белый  осадок.

 

В модельной смеси 2, содержащей только левомицетин с помощью качественной реакции на натрия хлорид подтвержден отсутствие аналитического эффекта у левомицетина.

В модельной смеси 3, содержащей только натрия хлорид с помощью качественной реакции на левомицетин подтверждено отсутствие аналитического эффекта у натрия хлорида.

Вывод: таким образом, согласно проведенным исследованиям, доказана специфичность методик идентификации хлорамфеникола в лекарственном средстве.

Количественное  определение:

Хлорамфеникол: Точную навеску СО левомицетина (0,10 г) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 15 мл 0,1 М раствора кислоты хлористоводородной, перемешивают, доводят тем же растворителем до метки, перемешивают. Измеряют оптическую плотность каждого раствора на спектрофотометре при длине волны 278 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. Раствор сравнения – 0,1 М раствор кислоты хлористоводородной.

Натрия хлорид: К 2 мл раствора ЛС добавляют  5 мл воды и 2 капли индикатора калия хромата. Титруют 0,1М раствором нитрата серебра до оранжево - желтого окрашивания.

 

2.2 Валидационная оценка количественного определения по показателю линейность

Построение  градуировочного графика

Точную навеску натрия хлорида (0,9г) помещают в мерную колбу  вместимостью 100 мл, растворяют в воде, доводят водой до метки и перемешивают (раствор А).

На титрование отмеривают последовательно 1,0 мл; 2,0 мл; 3,0 мл; 4,0 мл; 5,0 мл раствора А (0,009г; 0,018г; 0,027г; 0,036г; 0,045г.) и проводят определение.

К аликвоте раствора ЛС добавляют 5 мл воды и 2 капли индикатора калия хромата. Титруют 0,1М раствором нитрата серебра до оранжево - желтого окрашивания.

 

 

Таблица № 1 Результаты титриметрического определения натрия хлорида аргентометрическим методом

 

V 0,9% р-ра А (мл)	1	2	3	4	5
Конц. р-ра в г/ в навеске	0,009	0,018	0,027	0,036	0,045
V 0,1М р-ра нитрата серебра(мл)	1,6	3,0	4,5	6,2	7,6

 

 

 

Главным показателем параметра  линейность является коэффициент корреляции. Его расчет проводят по формуле:

; (1.1)

Но прежде нужно вывести  формулу уравнения регрессии:

y = bx + a,   где

; (1.2)

; (1.3)

 

 

Таблица №2 Вычисление коэффициента корреляции

Раствор	xi	yi	xi∙ yi	xi2	yi2
1	0,009	1,6	0,0144	0,000081	2,56
2	0,018	3	0,054	0,000324	9
3	0,027	4,5	0,1215	0,000729	20,25
4	0,036	6,2	0,2232	0,001296	38,44
5	0,045	7,6	0,342	0,002025	57,76
∑	0,135	22,9	0,7551	0,004455	128,01

 

По данным таблицы № 2 построили градуировочный график зависимости концентраций от оптической плотности,  рассчитали уравнение градуировочного графика и коэффициент корреляции.

b=168,9

a=0,02

y=168,9x+0.02

r=0.99948

 

 

Вывод: в результате расчетов получен коэффициент корреляции равный 0,99948, соответствующий требованию для методики анализа ( ≥ 0,99).

2.3 Валидационная оценка методик количественного определения по показателю правильность

Раствор модельной  смеси А₁. Точные навески левомицетина – субстанции (0,200 г) и натрия хлорида 0,72 г помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 15 мл 0,1 М раствора кислоты хлористоводородной, перемешивают, доводят тем же растворителем до метки, перемешивают.

Раствор модельной  смеси А₂. Точные навески левомицетина – субстанции (0,250 г) и натрия хлорида (0,9 г) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 15 мл 0,1 М раствора кислоты хлористоводородной, перемешивают, доводят тем же растворителем до метки, перемешивают.

Модельной смеси  А₃. Точные навески левомицетина – субстанции (0,300 г) и натрия хлорида (1,08 г) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 15 мл 0,1 М раствора кислоты хлористоводородной, перемешивают, доводят тем же растворителем до метки, перемешивают.

Растворы  Б₁, Б₂, Б₃. В три мерные колбы вместимостью 100 мл переносят по 1,0 мл раствора модельной смеси А₁ и доводят 0,1 М раствором кислоты хлористоводородной до метки.

Растворы  Б₄, Б₅, Б₆. В три мерные колбы вместимостью 100 мл переносят по 1,0 мл раствора модельной смеси А₂ и доводят 0,1 М раствором кислоты хлористоводородной до метки.

Растворы  Б₇, Б₈, Б₉. В три мерные колбы вместимостью 100 мл переносят по 1,0  мл раствора модельной смеси А₃ и доводят 0,1 М раствором кислоты хлористоводородной до метки.

Расчет содержания натрия хлорида (г) проводят по формуле:

 

где:   V- объем титранта (мл);

К- поправочный коэффициент;

Т- титр по определяемому  веществу;

Р- общий объём ЛП;

а- навеска (мл).

 

 

 

 

 

Таблица 3 Результаты определения правильности

титриметрическим методом

 

№ п.п	Уровень	Взято	V, мл	Найдено  г/ мл	R %	R-100%	Метрологические характеристики
1	1	0,72	3,8	0,74	102,8	2,8	R=100,49 SD=2,815 tвыч=0,49
2	1	0,72	3,7	0,72	100,0	0
3	1	0,72	3,7	0,72	100,0	0
4	2	0,9	4,7	0,91	101,1	1,1
5	2	0,9	4,6	0,90	100,0	0
6	2	0,9	4,8	0,93	103,3	3,3
7	3	1,08	5,5	1,07	99,07	0,93
8	3	1,08	5,5	1,07	99,07	0,93
9	3	1,08	5,4	1,06	99,07	0,93

 

 

2.4 Валидационная оценка методов количественного определения по показателю прецизионность

Приготовили модельный раствор левомицетина с натрия хлоридом  №2.

Точные навески левомицетина – субстанции (0,250 г) и натрия хлорида (0,9 г) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 15 мл 0,1 М раствора кислоты хлористоводородной, перемешивают, доводят тем же растворителем до метки, перемешивают.

Определение №1.

Проводят 3 параллельных титрования, отмеривая каждый раз по 2 мл ЛП.

Определение №2.

Проводят 3 параллельных титрования, отмеривая каждый раз по 3 мл ЛП.

Определение №3.

Проводят 3 параллельных титрования, отмеривая каждый раз по 4 мл ЛП.

 

Расчет содержания натрия хлорида (г) проводят по формуле

 

где:   V- объем титранта (мл);

К- поправочный коэффициент;

Т- титр по определяемому  веществу;

Р- общий объём ЛП;

а- навеска (мл).

 

Таблица № 4 Расчеты стандартного отклонения и относительного стандартного отклонения

 

уровень	Взято вещества, г/мл	V, мл	Найдено г/мл	%	(-ср)	(-		Метрологические характеристики
1	0,018 0,018 0,018	3,1 3,0 3,1	0,0181 0,0175 0,0181	100,56 97,22 100,56	0,7 -2,64 0,7	0,49 6,9696 0,49	Rср=99,86   SD=1,54   RSD=1,54
2	0,027 0,027 0,027	4,6 4,6 4,5	0,0269 0,0269 0,0264	99,63 99,63 97,78	-0,23 -0,23 -2,08	0,0529 0,0529 4,3264
3	0,036 0,036 0,036	6,2 6,3 6,2	0,0362 0,0368 0,0362	100,56 102,22 100,56	0,7 2,36 0,7	0,49 5,5696 0,49

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Общие выводы

 

1. Проанализированы и обобщены данные литературы по использованию в медицинской практике лекарственных средств хлорамфеникола.
2. Изучены методики качественного и количественного анализа левомицетина и лекарственных средств на его основе.
3. Исследована возможность использования химических и физико-химических методов для идентификации и количественного определения левомицетина в глазных каплях.
4. Обоснован выбор методик анализа раствора, содержащего хлорамфеникол с использованием валидационных характеристик.
5. Доказана валидность методик идентификации и количественного определения левомицетина в лекарственном средстве.
6. Установлено,  что методики характеризуются простотой выполнения, экспрессностью, высокой чувствительностью и позволяют достоверно оценивать качество исследуемого препарата.