Автор работы: Пользователь скрыл имя, 30 Октября 2014 в 23:24, реферат
Антибиотики — специфические продукты жизнедеятельности микроорганизмов, животных и растений, обладающие противомикробным действием (аntі — против, bіоs — жизнь).
Многие антибиотики оказывают стимулирующее влияние на отдельные биохимические процессы, происходящие в организме животных, что ведет к улучшению общего состояния их, ускорению роста, повышению продуктивности, активизации защитных реакций. Поэтому в настоящее время антибиотики применяют для лечения и профилактики многих инфекционных и незаразных болезней.
Антибиотики – их классификация, свойства, влияние на живые организмы……………………………………………………………….….3
Методы определения антибиотиков в молочной продукции…………...9
А) Определение антибиотиков групп бета-лактама и тетрациклина с помощью тест-полосок…………………………………………………….9
Б) Определение антибиотиков бета-лактамного типа
иммуноферментным методом…………………………………………...13
В) Определение хлортетрациклина в молоке микробиологическим
методом диффузии в агар по величине торможения роста
тест-культур……………………………………………………………...16
Выводы…………………………………………………………………….19
Список использованной литературы……………………………………
Проведение анализа состоит из нескольких последовательных операций:
1. Нужно тщательно встряхнуть образцы молока. Подождать не более 1 минуты, чтобы пропала пена/пузырьки. Могут быть исследованы 2–4 образца.
2. Поместить тест-полоску в инкубатор ROSA (56±1 °С) или Charm EZ.
3. Поместить пипетку вертикально над полоской в боковой стенке ячейки для образца.
4. Добавить 300 мкл (±15 мкл) молока. Закрыть крышку инкубатора.
5. После 2-х минут воздействия
возникнет звуковой сигнал и/
Если С-линия отсутствует, смазана или неравномерно окрашена или если молоко затемняет либо С-, BL-линию, либо ТЕ-линию, анализ проведен неверно. Результат определяется по контрольной карте.
Инкубатор Charm-EZ
Charm EZ представляет собой инкубатор и устройство с цветным ЖКИ-монитором для автоматического электронного считывания результатов анализа, которые записываются на карту памяти и могут быть воспроизведены, загружены на компьютер или выведены на печать.
Оборудование Charm EZ автоматически распознает: какой тест мы собираемся делать, выставляет время и температуру инкубатора. После проведения анализа образцы можно хранить в течение 2-х месяцев, заморозив их до температуры -15°С или ниже. После выдерживания в инкубаторе результаты тест-полосок остаются постоянными при комнатной температуре в течение 10 минут. Через несколько часов положительные результаты станут более положительными, в то время как отрицательные результаты будут оставаться неизменными. Если образцы охлаждены, результаты постоянны в течении 1 часа. В случае если заморожены до -15 °С
или ниже, результаты постоянны в течение 1 недели.
В комплекте с Charm MRLBLTET2 имеются 100 тест-полосок, 100 пипеток, 5 таблеток пенициллина и окситетрациклина, 1 колба для проведения положительного анализа с целью проверки правильности показаний тест-системы. [3]
Стоимость - 4 950 грн/упаковка
Б) Определение хлортетрациклина в молоке микробиологическим методом диффузии в агар по величине торможения роста тест-культур
Пробы молока и жидких молочных продуктов по 10,0 мл, творога по 10,0г вносят в колбы емкостью 50 мл и добавляют 10,0 мл буферного раствора - 2% раствор пепсина на цитратно-солянокислом буфере с pH 5,1 (пепсин медицинский - 2 г, буфер - 100 мл навеску пепсина вносят в стерильный буфер перед проведением анализа). Таким образом, получается разведение 1:2.
Подготовленные пробы помещают в термостат для экстракции антибиотиков на 90 мин при 37°C, периодически встряхивая содержимое колбочек, после чего смесь прогревают на водяной бане при температуре 60°C в течение 20 мин.
Пробы переносят в центрифужные пробирки и центрифугируют при 3000 об./мин. в течение 10 мин. Надосадочная жидкость является первым разведением (1:2) и готова для внесения в лунки. Второе разведение (1:4) готовят в химических пробирках: 1,0 мл надосадочной жидкости приливают к 1,0 мл цитратно-солянокислого буфера (без пепсина).
В подготовленные для исследований чашки Петри, в три заранее отмеченные стеклографом лунки, вносят контрольное разведение стандарта, по 0,05 мл, а в три другие вносят такое же количество одного из разведений испытуемых растворов. После внесения в лунки экстрактов и стандарта антибиотика с определяемой концентрацией чашки помещают в термостат на 20 часов при температуре 29°C. На следующий день замеряют зоны задержки роста тест-культуры и производят расчет содержания антибиотиков в исследуемых продуктах.
Произвольную навеску хлортетрациклина (5 - 15 мг) растворяют в 0,1 н соляной кислоте в соотношении 1:1 (1 мг антибиотика растворяют в 1 мл кислоты) и получают основной раствор. Далее на цитратно-солянокислом буфере - pH 5,1, лимоннокислого натрия - 20,6 г, HCl (уд. вес 1,19) - 1,81мл, H2O - до 1 мл, проводят стерилизацию автоклавированием при 121°C на протяжении 20 мин готовят контрольное разведение антибиотика. Например, стандарт ХТЦ содержит 930 ед./мг. Навеску в 10 мг растворяют в 10 мл 0,1 н HCl. Основной раствор содержит 930 ед./мл. Из основного раствора готовят контрольное разведение, равное 0,05 ед./мл.
Б) Количественное определение содержание хлортетракциклина
Для количественного определения измеряют задержки роста тест-культур и производят расчет в исследуемых продуктах по таблицам Дмитриева В. С., Семенов С. М. «Микробиологический контроль активности антибиотических препаратов».
Определяют разность диаметров зон подавления роста при двух разведениях испытуемого препарата:
20,2 - 17,3 = 2,9 мм.
По таблице, соответствующей этой разности диаметров зон, находят значение активностей соответствующих диаметров зон подавления роста после поправки. В вертикальном столбце находят целые числа, в горизонтальном - десятые доли. Полученные значения умножают на соответствующие показатели разведения (2 и 4; 3 и 6).
2,15 ед./мл x 3 = 6,45 ед./мл (зона 20,2)
1,08 ед./мл x 6 = 6,48 ед./мл (зона 17,3)
------------------------------
среднее 12,93:2 = 6,465 ед./мл – соответствует концентрации хлортетрациклина в нашем исследуемом молоке. [4]
В) Определение антибиотиков бета-лактамного типа иммуноферментным методом
Оборудование, средства измерений, посуда, материалы и реактивы
7. Бумага фильтровальная.
8. Тест-набор для определения
антибиотиков бета-лактамного
Метод основан на иммуноферментной реакции, в процессе которой антибиотики бета-лактамного типа захватываются специфическими белковыми рецепторами, мечеными ферментом с индикатором, с образованием химически прочного комплекса, блокирующего свойство индикатора изменять цвет продуктов химических реакций. Наличие антибиотиков устанавливают визуально, сравнивая интенсивность цвета зоны определения антибиотиков с интенсивностью цвета контрольной зоны индикаторного устройства.
Подготовка к определению
Тест-набор хранят в холодильнике от 2ºС до 8ºС. Перед началом работы необходимое количество тест-наборов выдерживают при температуре от 15ºС до 30ºС в течении 5 мин.
Анализируемое молоко хранят в холодильнике при температуре 0ºС до 10ºС.
Вскрывают упаковку тест-набора и проверяют положение шарика реактива в пробирке, который должен находиться на дне. При необходимости шарик реактива устанавливают на дно пробирки встряхиванием.
Проведение определения
Снимают крышку с пробирки. Пипетку вместимостью 0,45 см3 наполняют анализируемым молоком до метки и выливают в пробирку. Пробирку закрывают крышкой и перемешивают круговыми движениями до растворения реактива.
Индикаторное устройство устанавливают на горизонтальной поверхности так, чтобы приемная воронка для заливания анализируемой смеси находилась слева от оператора. Содержимое пробирки переливают в приемную воронку индикаторного устройства.
В момент начала изменения цвета активационного окна клавишу индикаторного устройства нажимают до щелчка. Через 6 мин считывают результат. Стабильность окраски сохраняется в течении 30 мин.
Обработка результатов
Сравнивают интенсивность окрашенных в синий цвет зон в окнах индикаторного устройства.
Если после проведения определения изменение окраски не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест-набором.
Большая или меньшая интенсивность зоны определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков в анализируемом молоке.
Меньшая интенсивность цвета зоны определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие ее окрашивания свидетельствует о наличии антибиотиков в анализируемом молоке. [5]
1 – антибиотики отсутствуют; 2 – антибиотики присутствуют
Антибиотики – это необходимые в некоторых условиях вещества для обеззараживания микрофлоры организма. Они оказывают стимулирующее влияние на отдельные биохимические процессы, происходящие в организме животных, что ведет к улучшению общего состояния их. Но вместе с тем необходимо учитывать их дозировку, побочные эффекты, период их действия, а также период их выведения из организма животного. Этого необходимо строго придерживаться, так как при недостаточном выведение антибиотика из организма, он попадает молочные продукты этого животного. Необходим постоянный контроль качества продуктов, а особенно после применения антибиотиков животным.
Список использованной литературы:
https://standartgost.ru/g/
http://forumsng.0pk.ru/
Информация о работе Методы определения антибиотиков в молочной продукции