Возбудитель туберкулёза и паратуберкулёза

Клинические признаки болезни у собак и кошек малохарактерны, наблюдается исхудание, а при поражении легких - затрудненное дыхание, кашель. Смерть наступает вследствие полного истощения.

 

Диагностика (материалы, направляемые в лабораторию)

Диагноз устанавливают на основании  анализа эпизоотологических данных, клинических признаков и результатов  аллергического, патологоанатомического, гистологического, бактериологического  и биологического исследований.

Патологический материал для бактериологического  исследования направляют как при  жизни животного (истечения из носа, бронхиальную слизь, молоко – особенно при увеличении надвыменных лимфоузлов, фекалии, реже мочу), так и посмертно (поражённые части органов и лимфоузлы  – бронхиальные, заглоточные, средостенные, предлопаточные, надвыменные). Труп птицы направляют целиком – исследуют поражённые печень, селезёнку, лёгкие, яичники. Если нет возможности направить в лабораторию свежий материал, то патологический материал консервируют в 30-40% водном растворе глицерина или посылают его в замороженном состоянии.

Мокроту, слизь, гной заливают равным объёмом 10% раствора трёхзамещённого  фосфата натрия, хорошо перемешивают и ставят в термостат на 24 ч. Затем  центрифугируют 10-15 мин. Исследуют выпавший осадок.

Поражённые ткани нарезают мелкими  кусочками и растирают в стерильной ступке с 6% серной кислотой в соотношении 1:4, фильтруют через 2 слоя марли, центрифугируют, кислоту отсасывают, к осадку добавляют  физраствор, вновь встряхивают и центрифугируют. Так повторяют 2-3 раза. Осадок высевают на питательные среды.

 

Иммунитет

При заболевании туберкулезом фагоцитоз  имеет незавершенный характер, формируется  нестерильный иммунитет, вследствие чего защитного значения он не имеет. Специфическая  профилактика при помощи вакцины  БЦЖ возможна, но в большинстве  стран сельскохозяйственных животных против туберкулеза не вакцинируют.

 

Специфическая профилактика

Профилактику и меры борьбы с  туберкулезом животных осуществляют согласно действующим Санитарным и ветеринарным правилам. В благополучных хозяйствах комплектование ферм проводят здоровыми  животными из благополучных по туберкулезу  хозяйств, корма приобретают только в благополучных хозяйствах.

Вновь поступивших животных в период 30-дневного карантина исследуют  на туберкулез. Обрат, поступающий для  выпойки молодняка, пастеризуют, а  сборные пищевые отходы подвергают термической обработке. К обслуживанию животных не допускают больных туберкулезом людей. Периодически проводят дезинфекцию  животноводческих помещений, уничтожают грызунов и клещей, улучшают кормление  и условия содержания животных.

С профилактической целью ежегодно проводят плановые диагностические  исследования животных на туберкулез. Коров и быков-производителей обследуют 2 раза в год: весной, перед выгоном  на пастбище, и осенью, перед постановкой  скота на зимнее содержание, а молодняк крупного рогатого скота (начиная с 2-месячного возраста) и откормочные  группы - 1 раз в год; лошадей, мулов, ослов, овец и коз - в зависимости  от эпизоотической ситуации; всех взрослых свиноматок и молодняк после отъема во всех племенных хозяйствах, птицеводческих станциях - 1 раз в год. Животных, принадлежащих  гражданам, исследуют на туберкулез одновременно с проведением этой работы на фермах.

 

Биопроба

Для дифференциации отдельных видов  микобактерий ставят биопробу на морских  свинках, кроликах, а при необходимости  – на курах, предварительно проверенных  аллергическим методом (туберкулинизацией) для исключения спонтанного туберкулёза. Для заражения применяют либо культуру, либо присланный в лабораторию  материал, который предварительно обрабатывают серной кислотой, как указывалось  выше, растирая в стерильной ступке. К осадку после центрифугирования  добавляют 15% раствор двууглекислой  соды, оставляют на 10-15 мин и вновь  центрифугируют 5 мин. Образовавшийся осадок  дважды промывают стерильным физраствором с последующим центрифугированием, а затем осадок вновь суспендируют в физрастворе, отстаивают 5-10 мин.

Надосадочную жидкость вводят по 1-2 мл морским свинкам в паховую  область, кроликам – внутривенно. У  морских свинок в положительных  случаях через 2-3 недели на месте введения образуется уплотнение, потом язва с одновременным увеличением региональных лимфоузлов. Этим свинкам через 2-3 недели подкожно инъецируют туберкулин, что приводит к бурной генерализации процесса и гибели животных.

 

 

Биопрепараты

В ветеринарной практике для диагностики  туберкулёза широко применяется  аллергический метод, который основан  на выявлении повышенной чувствительности заражённых туберкулёзом животных к  введению туберкулина. У поражённых туберкулёзом животных и птиц на месте  инъекции туберкулина развивается  воспаление, образуется отёчная припухлость, утолщается складка кожи (бородавка). Туберкулодиагностика позволяет выявлять до 80-93 % больных животных, 40-60 % птиц, поражённых туберкулёзом.

Аллергены для исследования на туберкулёз.

Альттуберкулин. Он содержит продукты жизнедеятельности туберкулёзных палочек, а по внешнему виду – это прозрачная, маслянистая, тёмно-коричневая жидкость. Он готовится из бычьего и человеческого видов палочек путём выращивания их в течение 2 месяцев на МПБ. Культуру автоклавируют, выпаривают до 1/10 первоначального объёма, фильтруют и стерилизуют. Аналогичным образом готовят туберкулин и для птиц.

Сухой очищенный туберкулин (СОТ) готовят, выращивая культуры микобактерий на синтетической питательной среде. В фильтрат 3-недельной культуры добавляют трихлоруксусную кислоту для осаждения протеинов. Настаивают 10ч в холодильнике при температуре 35 °С. Надосадочную жидкость сливают, а осадок центрифугируют и трижды промывают 1% раствором трихлоруксусной кислоты и ацетоном путём центрифугирования. Полученную массу подвергают лиофилизации. Применяется также, как и альттуберкулин, для внутрикожной пробы по 0,2 мл, реакцию читают через 72ч. При наличии воспаления и утолщения кожной складки на 3 мм и более – реакция положительная, а животное считается больным.

Сухой туберкулопротеин. Готовят, как и сухой очищенный туберкулин, но после фильтрации жидкость отстаивают 1ч при температуре 4-5°С, а затем суперцентрифугируют при 18-20 тыс. об/мин. Скопившийся на барабане центрифуги осадок и есть туберкулопротеин. Применяется аналогично.

Вакцина БЦЖ. Вакцину готовят из ослабленного бычьего вида микобактерий из посевного материала на глицериновом картофеле с желчью, а затем в жидких синтетических средах. Плёнку снимают, отмывают и гомогенизируют, разводят 1:5 раствора глутамата натрия. Вакцину разливают в ампулы и лиофилизируют. В ампулах содержится 1 мг культуры БЦЖ, что составляет 20 доз по 0,05 мг. Растворяют физиологическим раствором. Срок годности вакцины 1 год.

Возбудитель паратуберкулёза

Историческая справка

В 1895 г. X. Ионе и Г. Фротингем обнаружили возбудитель болезни в мазках из подвздошной кишки больной  коровы и описали его. Б. Банг (1906) экспериментально воспроизвел болезнь  у телят.

В нашей стране паратуберкулез крупного рогатого скота впервые установлен И. И. Гордзялковским в 1911 г. в бывшей Воронежской губернии, паратуберкулез овец — П. П. Вишневским и П. Г. Прохоровым в 1937 г.

Над изучением заболевания, совершенствованием диагностики и мер борьбы работали такие отечественные ученые, как  П. П. Вишневский, К. А. Дорофеев, Е. П. Посохни, Т. В. Пашов, В. Д. Штанько, А. К- Строгое, О. А. Полякова, Н. М. Нуралиев и др.

Паратуберкулез у крупного рогатого скота встречается спорадически во многих странах Европы, Азии, Африки, Америки, также в Австралии и  Новой Зеландии. Отдельные эпизоотические вспышки и спорадические случаи болезни регистрируются и в Нечерноземной  зоне России. Экономический ущерб  из-за ограниченного распространения  невысок.

 

Характеристика заболевания

Паратуберкулез (лат. — Paratuberculosis, Enteritis paratuberculosa; болезнь Ионе, паратуберкулезный энтерит) — хроническая бактериальная болезнь жвачных, преимущественно крупного рогатого скота и овец, реже буйволов, верблюдов и очень редко коз, оленей, яков, характеризующаяся медленно развивающимся продуктивным энтеритом, периодической диареей, прогрессирующим истощением и гибелью животных.

 

Морфология возбудителя

Возбудитель паратуберкулеза Mycobacterium paratuberculosis — тонкая короткая полиморфная грамположительная палочка, аэробная, кислото-спирто-щёлочеустойчивая, неподвижная, спор и капсул не образует, хорошо окрашивается по Цилю—Нильсену. В мазках, приготовленных из фекалий больных животных, соскобов со слизистой оболочки пораженного участка кишечника и брыжеечных лимфатических узлов, паратуберкулезные микобактерии расположены кучками, гнездами, редко одиночно или попарно (по 2-4 клетки).

 

Культуральные и биохимические  свойства

Для паратуберкулезных бактерий характерно расположение в мазках из патологического материала в виде кучек (по 2—4 и более), гнезд, целых глыбок, состоящих из коротких палочек, мелких кокков, отдельных зерен, пылинок, диплококков и др. Выделение чистой культуры, а также культивирование вторых и третьих генераций связано со значительными трудностями. Растет возбудитель паратуберкулеза очень медленно (рост первичных культур наблюдается через 45—180 дней) и только на элективных питательных средах — среде Дюбо-Смита с добавлением фактора роста (экстракт из микобактерий Тимофеевой травы), среде Смита в прописи А. А. Аликаевой (экстракт микобактерий флеи), средах Дапкииа, Генли, Ренжера, Гона, Дарсэ, агаризированной среде Нуралиева. Оптимальная температура, необходимая для роста возбудителя,— 38°С. На твердых питательных средах бактерии паратуберкулеза вырастают в виде беловато-серых сморщенных сухих колоний с неровными краями, постепенно достигающих размеров 1—2 мм и принимающих бугристый вид. В мазках, окрашенных по Циль-Нильсену, обнаруживают более длинные и стройные палочки, чем в препаратах из исходного патологического материала, часто имеющих вид четок или бусинок, отграниченных неокрашенными промежутками. При окраске по методу Муха выявляют зернистость. Микобактерии паратуберкулеза не патогенны для лабораторных животных.

 

Устойчивость возбудителя  к факторам внешней среды

Возбудитель паратуберкулеза обладает значительной устойчивостью к воздействию  факторов окружающей среды и различных  дезинфицирующих средств. Он сохраняется  в почве, навозе, кормах и в воде непроточных водоемов до 8-10 месяцев, в моче 7 дней. Микроб погибает при 85 °С через 5 минут; в молоке, нагретом в закрытых сосудах до 63°С, — через 30 мин, а при 80-85°С — через 1-5 мин. Солнечный свет убивает его через 10 месяцев. Некоторые противотуберкулезные синтетические соединения, сульфаниламидные препараты и антибиотики in vitro только задерживают рост культур М. paratuberculosis. Лучшими дезинфицирующими средствами являются щелочной 3% раствор формальдегида и 3% раствор гидроксида натрия; 20% взвесь свежегашеной извести (гидроксид кальция), 5% эмульсия ксилонафта, 5% растворы формалина и лизола, феносмолина, фенолятов натрия.

Патогенность и  патогенез

После алиментарного заражения  паратуберкулезные микобактерии проникают  через поврежденный эпителий в строму ворсинок стенки тонкой кишки и фагоцитируются ретикулярными клетками. В связи  с наличием на поверхности микробной  клетки и в ее оболочке стеариновых  кислот и других воскоподобных веществ  микобактерии при фагоцитозе не перевариваются (незавершенный фагоцитоз), а происходит их внутриклеточное размножение. Пораженные макрофаги объединяются в клеточные  скопления и приобретают вид  эпителиоидных клеток. Внутриклеточно размножающиеся микробы разрушают клетки, и освободившиеся микроорганизмы заново фагоцитируются. Возникают крупные скопления микробов и пораженных макрофагов вначале в ворсинках, позднее в глубоких слоях кишечной стенки и в брыжеечных лимфатических узлах, вызывая в них атрофию и характерное пролиферативное воспаление. Нарушаются ферментативная, секреторная и всасывающая функции кишечника, а также минеральный, солевой и водный обмены. Все это приводит к интоксикации и истощению организма. Иногда (чаще у молодняка) возникает бактериемия; при этом возбудитель болезни проникает в лимфатические узлы, паренхиматозные органы, матку, плод, вымя.

Патологоанатомические изменения. Характерные поражения обнаруживают в тощей и подвздошной кишках — на отдельных их участках видны утолщения слизистой оболочки в 4—10 раз, плотные продольные и поперечные складки бледного цвета, напоминающие извилины головного мозга, точечные и полосчатые кровоизлияния. Серозная оболочка и брыжейка отечны, субсерозные лимфатические сосуды утолщены, имеют вид толстых извивающихся тяжей. Мезентеральные лимфоузлы увеличены, размягчены, иногда с серовато-белыми саркомоподобными очажками. У овец и коз утолщение и складчатость слизистой оболочки кишечника выражены слабее, а в увеличенных лимфоузлах и слизистой кишечника иногда встречают обезызвествленные и инкапсулированные очажки некроза. Часто наблюдают асцит. В латентной стадии болезни изменения обнаруживают только в брыжеечных лимфоузлах.

У верблюдов отмечают очаговую дистрофию  тонких кишок, утолщение и складчатость толстых кишок, резкое увеличение брыжеечных, подчелюстных, заглоточных лимфоузлов, поражение печени, селезенки, почек.

 

Диагностика (материалы, направляемые в лабораторию)

Первичный диагноз на паратуберкулез крупного рогатого скота ставят на основании анализа эпизоотологических и характерных клинических данных (диарея, прогрессирующее истощение  при сохраненном аппетите, отеки  в области подчелюстного пространства, подгрудка, жажда, температура тела в пределах нормы), результатов патоморфологического, бактериологического, аллергического и серологического исследований. Диагноз обязательно подтверждают результатами патологоанатомического вскрытия убитых с диагностической  целью больных животных, бактериоскопией  и гистологическим исследованием  патологического материала.