Иммунодефициты – принцип диагностики и коррекции

Неспецифическими стимуляторами иммунной системы организма являются синтетические двухцепочечные полинуклеотиды - полиИЦ, полиГЦ, полиАУ. Иммуномодулирующие свойства полиИЦ связаны с повышением синтеза интерферона лимфоцитами, увеличением активности Т-хелперов и изменением антительной активности. Кроме того, полинуклеотиды стимулируют макрофаги, ингибируют рост опухолей и усиливают различные проявления клеточного иммунитета (бласттрансформацию на антиген in vitro, кожные реакции ГЧЗТ и др.) у животных и человека.

Кроме описанных выше препаратов, обладающих иммуностимулирующими свойствами, в настоящее время в медицине используются иммуностимуляторы, полученные из костного мозга (миелопид), синтетические (ликопид или ГМДП- усовершенствованный аналог МДП) и другие. В ветеринарной практике рядом фирм выпускаются коммерческие иммуномодулирующие препараты типа иммунофан, "Риботан" и др., применять которые необходимо согласно прилагаемых инструкций. При этом, необходимо иметь в виду характеристики используемого препарата, источник получения и методы контроля.

ИММУНОСУПРЕССАНТЫ

Исторически, глюкокортикоиды использовались как лекарственные препараты, угнетающие иммунные функции у пациентов с заболеваниями иммунной системы. Получение цитотоксических антираковых препаратов, способных вызывать иммуносупрессию, дает возможность дополнительного выбора терапевтических средств для лечения пациентов с аутоиммунными болезнями. Цитотоксические препараты подразделяются на два типа: клеточно-циклические препараты, которые уничтожают быстроделящиеся клетки (антиметаболиты) и неклеточно-циклические препараты, являющиеся токсическими для всех клеток (алкилирующие агенты). Большинство из этих препаратов используется в терапии рака и трансплантации органов, однако, некоторые из них используются самостоятельно или в сочетании с глюкокортикоидами для лечения аутоиммунных или других иммунологических нарушений.

Глюкокортикоиды составляют одну из основных групп иммуносупрессоров клеточного и гуморального иммунитета с довольно глубоко изученным механизмом этого действия. Иммунодепрессивный эффект глюкокортикостероидов осуществляется не через деструкцию и лизис лимфоцитов, как это имеет место при использовании цитотоксических препаратов. Скорее всего, он связан с изменением миграции лейкоцитов, изменениями функциональной способности лейкоцитов как клеток- эффекторов и ингибиции продукции или высвобождения растворимых медиаторов воспаления. функциональные изменения в лимфоцитах, связанные с применением глюкокортикоидов, включают снижение дифференциации и пролиферации, уменьшение количества поверхностных рецепторов, подавление продукции интерлейкина-2, осуществляемой Т-клетками, снижение хелперной и увеличение супрессорной активности.

Циклоспорин является препаратом, полученным из грибов, и обладает высокой степенью специфичности к определенным субпопуляциям Т-клеток. Он блокирует продукцию интерлейкина-1 Т-клетками, ингибирует распознавание и продукцию ИЛ-2 Т-хелперами, ограничивает размножение цитотоксических Т-клеток, препятствует пролиферации Т-хелперов, необходимых для активации В-клеток и поддерживает экспансию Т-супрессоров. Циклоспорин является потенциальным антагонистом для многих функций Т-клеток, ассоциированных с патогенезом болезней иммунной системы. Препарат успешно используется в медицине после трансплантации органов и для лечения некоторых Т-клеточных новообразований. Имеются данные по его использованию в лечении аутоиммунных болезней.

Алкилирующие препараты (хлорамбуцил, мелфалан, циклофосфамид, бузулфан) являются неклеточно-циклическими иммунодепрессантами, используемые для лечения болезней иммунной системы. Их основное действие включает ионизацию лекарственной молекулы, которая затем химически алкилирует составные части нуклеиновых кислот, например гуанин. Это действие вызывает повреждение хромосом и гибель клеток.

Антиметаболиты (метотрексат, азотроприн, 6-меркапто-пурин и др.) действуют подобно алкилирующим препаратам, блокируя синтез нуклеиновых кислот. Использование этих препаратов при заболеваниях иммунной системы основано на том принципе, что антиметаболиты разрушают лимфоциты, пролиферирующие в ответ на антигенный стимул, таким образом отменяя иммунный ответ. Азотиоприн -наиболее распространенный препарат этой группы, обладающий цитотоксическим эффектом на Т- и В-клетки и блокирующий пролиферацию предшественников моноцитов.

2. Перекрестный иммунофорез: методика и цель использования

Иммунофорез -(immunophoresis) - метод идентификации неизвестного антигена или выявления наличия какого-либо антитела в сыворотке крови, основанный на протекании реакции преципитации. Антитело и антиген при этом диффундируют в направлении друг к другу в агаровом геле.

Ракетный и двумерный (перекрестный) иммуноэлектрофорез

Ракетный иммуноэлектрофорез (РИЭФ) и двумерный иммуноэлектрофорез (ЦИЭФ) в отличие от ВИЭФ — количественные методы. Они основаны на электрофорезе антигенов в агаре, содержащем антитела (Laurell, 1965).

РИЭФ позволяет определить, сколько антигена содержится в штамме или ином объекте исследования. Если в материале имеется антиген, то образуется «ракетка», если нет — она отсутствует. РИЭФ по чувствительности несколько уступает РИГА, но очень демонстративен.

ДИЭФ дает возможность определить весь набор антигенов; их может быть несколько десятков (20…30 и больше). Для изучения антител количественные методы используются реже.

РИЭФ. Проводят ИЭФ антигена в 1%-м агаре «Серва» на мединал-вероналовом буфере с лактатом кальция. К 25 мл охлажденного до 48 °С агара добавляют 1,5 мл моноспецифической сыворотки. Раствор выливают на стеклянную пластину 120 х 90 мм и после застывания с катодной стороны пробивают ряд лунок диаметром 2 мм на расстоянии 1 см друг от друга. В лунки вносят 10 мкл антигена (контроль) и водно-солевой экстракт клеток, в которых необходимо определить его содержание (опыт).

Электрофорез проводят при напряжении 5 В/см и силе тока 35 мА в течение 2 ч. В положительном случае образуются ракетки.

ДИЭФ. Техника выполнения заключается в следующем. На пластинку наносят 25 мл 1%-го расплавленного агара. На расстоянии 1 см от катодной стороны пробивают лунки диаметром 5 мм и вносят в них по 20 мкл исследуемого материала.

Электрофорез в первом направлении проводят при напряженности 5 В/см и силе тока 30 мА в течение 2 ч. Затем гель разрезают на полоски и переносят на другие пластинки, оставшуюся часть пластинки заливают агаром, содержащим соответствующую сыворотку.

Электрофорез во втором перпендикулярном направлении проводят при напряженности 1,2 В/см и силе тока 20 мА. Для приготовления геля используют трис-веронал-глициновый буфер Свенсена ионной силой 0,02.

Результаты РИЭФ очень демонстративные при изучении штаммов Y. pestis, не синтезирующих антигены Ф1 и Т. Была использована антифракционная чумная сыворотка 231 (708). Эти штаммы ракеток не образуют. Определено количественное содержание Ф1 и Т в водно-солевых экстрактах клеток штамма Y. pestis 231 и его вариантах.

Наибольшее количество зон преципитата в ДИЭФ со штаммами 14-37 Y pestis наблюдается с гипериммунными сыворотками лошадей. В ДИЭФ возможно идентифицировать иерсинии чумы по содержанию антигенов Ф1 и Т.

Таким образом, количественные методы ИЭФ позволяют идентифицировать Y. pestis и определить набор антигенов. Их следует применять в первую очередь для глубокого изучения антигенной структуры патогенных микроорганизмов.

При использовании ДИЭФ с возбудителями сапа и мелиоидоза были идентифицированы общие и индивидуальные антигены клеточных структур, определено место антигенов клеточных структур в общем антигенном составе мелиоидозного микроба (антигены цитоплазмы, клеточных стенок и пр.). Всего в ДИЭФ у В. pseudomallei выявлено 22 антигена, у В. mallei — 21, причем 11 были общими.

Белки обладают антигенными свойствами, что широко используется при их

изучении. Реакцию между растворимыми белками и специфическими по отношению к ним преципитирующими антителами проводят в гелях или на пленках из ацетата целлюлозы с помощью различныхметодов простой или двойной иммунодиффузии. Такие иммунодиффузионные тесты можно применять и к белкам, предварительно разделенным путем электрофореза. В определенных условиях антиген и антитело мигрируют при электрофорез

е в противоположных направлениях. Если их движение навстречу друг другу

обусловлено электромиграцией, а не диффузией, то такой иммунохимический тест называют электросинерезом (синонимы: встречный электрофорез, иммуноэлектроосмофорез). Количественное определение белков можно осуществлять с помощью электрофореза в среде, содержащей антитела (электроиммуноанализ, электроиммуно-диффузия, ракетный иммуноэлектрофорез). Этот метод применяют также для анализа смеси белков, предварительно разделенных в процессе электрофореза (перекрестный иммуноэлектрофорез, перекрестный электрофорез в среде с антителами). Методы иммунопреципитации, обладающие большой чувствительностью, позволяют не только обнаруживать и точно идентифицировать белки, но и проводить их количественное определение. Используя антитела с различной специфичностью, можно проверять белки на наличие или отсутствие у них определенных генетических маркеров

или определенных структурных субъединиц. Кроме того, антигенную природу белковых компонентов можно исследовать путем их сравнения с известными антигенами. Таким образом, различные комбинации электрофоретических методик с иммунохимическим анализом служат чрезвычайно эффективным и разносторонним способом изучения свойств белков. Очевидно, что эффективность иммунохимических тестов зависит от

специфичности используемых антисывороток, а также от их титра и сродства к антигенам.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Список используемой литературы и интернет – ресурсов:

1. Е.С. Воронин,  А.М. Петров,  М.М. Серых,  Д.А. Девришов.

Иммунология 

2.  В.М. Манько,  Д.А. Девришов.    Ветеринарная иммунология 

3. А.А. Ярилин.     Иммунология 

4. В.Г. Галактионов. Иммунология 

5.А.М. Воробьева  Руководство по  гематологии

6. М.В. Дроздова.   Заболевания  крови

7. Н.Н. Мамаев.  Гематология

8. Д.Н. Гольдберг, Е.Д. Гольдберг.  Справочник по гематологии

9. С.А.Луговская, В.Т. Морозова.    Лабораторная гематология  

 Интернет-ресурсы  по ветеринарии:

www.allbest.ru

www.veterinar.ru

www.vetstudent.ru

www.webmedinfo.ru

http://vetvrach.info/