История развития гистологии

СРС 

 

На тему: История развития гистологии. Медоды исследования.

Кафедра морфологических дисциплин

Выполнила: Гусейнова Эльнара.

Группа: 114”а” ОЗР

Приняла: Таимбетова Қ.Ғ.

История развития гистологии  
 

В истории  развития гистологии можно выделить три основных периода: домикроскопический, микроскопический и современный. 
 
Домикроскопический период (с начала V в. до н. э. и по 1665 г.) связан с именами Аристотеля, Галена, Везалия и других великих ученых того времени. Данный период развития гистологии характеризуется попытками выделения в организмах животных и человека неоднородных тканей с использованием методов анатомического препарирования.

Аристотель

Гален

Вазалий

Микроскопический период – 1665 – 1950 гг. Начало этого периода связано с именем английского физика Р. Гука, который изобрел микроскоп и использовал его для систематического исследования различных, в том числе и биологических, объектов.

Р. Гук  впервые ввел термин «клетка».

 В результате своих исследований Т. Шванн сформулировал клеточную теорию:

 

1) все  растительные и животные организмы  состоят из клеток;

 

2) все  клетки развиваются по общему  принципу – из цитобластомы;

 

3) каждая  клетка обладает самостоятельной  жизнедеятельностью, а жизнедеятельность  организма является суммой деятельности  клеток.

Современные положения клеточной теории: 
 
1) клетка является наименьшей единицей живого; 
 
2) клетки животных организмов сходны по своему строению; 
 
3) размножение клеток происходит путем деления исходной клетки; 
 
4) многоклеточные организмы представляют собой сложные ассоциации клеток и их производных, объединенные в системы тканей и органов и связанные между собой клеточными, гуморальными и нервными механизмами регуляции.

Дальнейшее  совершенствование микроскопов  позволило выявить в клетках  более мелкие структуры:

 

1) пластинчатый  комплекс (К. Гольджи – 1897 г.);

 

2) митохондрии  (Э ван Бенда – 1897 г.);

 

3) центриоли  ( Т. Бовери – 1895 г.);

 

4) эндоплазматическую  сеть (К. Портер – 1945 г.);

 

5) лизосомы (К. Дюв – 1949 г.).

Органоиды клетки

Современный этап развития гистологии начался с 1950 г., когда впервые электронный микроскоп был применен для изучения биологических объектов. Однако для современного этапа развития гистологии характерно внедрение не только электронной микроскопии, но и других методов: цито– и гистохимии, гисторадиографии и т. д. При этом обычно используется комплекс различных методов, позволяющих составить не только качественное представление об изучаемых структурах, но и получить тонкие количественные характеристики. Особенно широко в настоящее время применяются различные морфометрические методы, в том числе и автоматизированная обработка полученной информации с использованием персонального компьютера.

МЕТОДЫ  ИССЛЕДОВАНИЯ В ГИСТОЛОГИИ.

Основным  методом исследования в гистологии является микроскопирование – изучение гистологических препаратов под микроскопом.

Выделяются  следующие виды микроскопии:

1) световая микроскопия (наиболее распространенный вид микроскопии, при этом разрешающая способность микроскопа составляет 0,2 мкм);

2) ультрафиолетовая  микроскопия (разрешающая способность  микроскопа составляет 0,1 мкм);

3) люминисцентная  микроскопия (применяется для  определения в исследуемом гистологическом  препарате определенных химических  структур);

4) фазово-контрастная  микроскопия (применяется для  обнаружения и изучения определенных  структур в неокрашенных гистологических  препаратах);

5) поляризационная  микроскопия (используется в основном  для изучения волокнистых структур);

6) микроскопия  в темном поле применяется  для изучения живых объектов;

7) микроскопия  в падающем свете (предназначена  для изучения толстых объектов);

8) электронная  микроскопия (наиболее современный  вид микроскопии, имеющий разрешающую  способность 0,1 – 0,7 нм). Имеются  две разновидности электронной  микроскопии – просвечивающая (трансмиссионная)  и сканирующая (или растворная) микроскопия, дающая отображение  поверхностных ультраструктур.

ПРИГОТОВЛЕНИЕ ГИСТОЛОГИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА

Приготовление гистологического препарата включает в себя следующие этапы.

1. Взятие материала – кусочка ткани или органа. При заборе материала необходимо выполнять следующие правила: 
 
1) забор материала должен проводиться как можно раньше после смерти или забоя животного, при возможности от живого объекта, чтобы как можно лучше сохранить структуру исследуемых клеток; 
 
2) забор материала должен проводиться острым инструментом, чтобы не травмировать ткани; 
 
3) толщина кусочка не должна превышать 5 мм, чтобы фиксирующий раствор смог проникнуть на всю глубину ткани; 
 
4) обязательно необходимо произвести маркировку кусочка, при этом указываются наименование органа, номер животного или фамилия человека, дата забора.

2. Фиксация материала. Данный этап проводится для того, чтобы остановить обменные процессы в клетке и сохранить ее от распада. Для этого взятый на исследование кусочек ткани погружают в фиксирующий раствор. Раствор может быть простым (спирт или формалин) и сложным (раствор Карнуа, фиксатор Цинкера). Фиксатор вызывает денатурацию белков и сохраняет структуру клеток в состоянии, близком к прижизненному. Фиксацию можно проводить также путем замораживания – охлаждением жидким азотом или струей углекислого газа.

Обезваживание в спиртах возрастающей концентрации

3. Заливка кусочков ткани в уплотняющие среды (парафин, смолы) – или замораживание. Данный этап необходим для того, чтобы в последующем из исследуемой ткани можно было изготовить тонкий срез.

4. Приготовление срезов на микротоме или ультрамикротоме с помощью специальных ножей. После этого срезы для световой микроскопии приклеиваются на предметные стекла, а для электронной – монтируются на специальные сеточки.

Микротом 

5. Окраска срезов или их контрастирование (для электронной микроскопии). Перед окраской срезов необходимо удалить уплотняющую среду – выполнить депарафирование. С помощью окраски достигается контрастность изучаемых структур. Красители можно подразделить на основные, кислые и нейтральные. Наиболее широко применяются основные красители (гематоксилин) и кислые (эозин). Часто используются и сложные красители.

Аппарат для окраски срезов

6. Просветление срезов в ксилоле и толуоле. Их заключают в смолы (бальзам и полистирол) и закрывают покровным стеклом.

После данных процедур препарат можно исследовать  под световым микроскопом. Помещенные под стекло срезы для светового  микроскопа могут долго храниться  и многократно использоваться. Для  электронной микроскопии каждый срез используется только 1 раз, при  этом он фотографируется, и изучение структур ткани производится по электронограмме.